实验原理
本实验以 E.coli DH5α 菌株为受体细胞，用 CaCl2 处理受体菌使其处于为感受态，然后与 pUC18质粒共保温，实现转化。 pUC18 pUC18质粒携 pUC18 带有抗氨苄青霉素的基因，因而使接受了该质 粒的受体菌具有抗氨苄青霉的特性，用 Apr符 号表示。将经过转化后的全部受体细胞经过适 应稀释，在含氨苄青霉素的平板培养基上培养 ，只有转化体才能存活，而未受转化的受体细 胞则因无抵抗氨苄青霉素的能力而死亡。
对照组
对照组1 以同体积的无菌双蒸水代替DNA 无菌双蒸水代替 对照组1: 以同体积的无菌双蒸水代替DNA 溶液,其它操作与上面相同。 溶液,其它操作与上面相同。此组正常情况 下在含抗生素的LB平板上应没有菌落出现。 含抗生素的LB平板上应没有菌落出现 下在含抗生素的LB平板上应没有菌落出现。
对照组2: 以同体积的无菌双蒸水代替DNA 无菌双蒸水代替 对照组2: 以同体积的无菌双蒸水代替DNA 溶液,但涂板时只取5μl 菌液涂布于不含抗 溶液,但涂板时只取5μl 菌液涂布于不含抗 生素的LB平板上 LB平板 生素的LB平板上，此组正常情况下应产生大 量菌落。 量菌落。
实验步骤
转化
1. 取目的DNA加入大肠杆菌感受态细胞中，于 冰上放置30min 2. 于42℃水浴90S ℃ 3. 冰上放置 冰上放置2min 4. 加入800µlLB液体培养基于37培养1小时 5. 将培养液均匀涂布在含Amp+的培养基平板上 6. 将平板放置于37℃恒温培养箱中培养12-14个 ℃ 小时，然后观察结果
大肠杆菌感受态细胞及转化
实验目的
1.了解转化的概念及其在分子生物学研究中 的意ห้องสมุดไป่ตู้。 2.学习将外源质粒 DNA 转入受体菌细胞并筛 选转化体的方法。
实验原理
转化( Transformation )是将异源 DNA 分子 引入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗 传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子 遗传、基因工程等研究的基本实验技术。
转化率
统计每个培养皿中的菌落数。 统计每个培养皿中的菌落数。 转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子， 转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子，根据 此皿中的菌落数可计算出转化子总数和转化频率，公式如下： 此皿中的菌落数可计算出转化子总数和转化频率，公式如下： 转化子总数＝菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积／ 转化子总数＝菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积／ 涂板菌液体积 转化频率（转化子数／ mg质粒DNA）＝转化子总数／ 质粒DNA）＝转化子总数 转化频率（转化子数／每mg质粒DNA）＝转化子总数／质 DNA加入量 加入量(mg) 粒DNA加入量(mg) 感受态细胞总数＝对照组２菌落数×稀释倍数× 感受态细胞总数＝对照组２菌落数×稀释倍数×菌液总体 积／涂板菌液体积 感受态细胞转化效率＝转化子总数／ 感受态细胞转化效率＝转化子总数／感受态细胞总数
实验结果
实验报告
写明实验目的、实验原理、仪器、材料与试 剂 详细列出实验步骤； 画出实验结果的示意图并做分析，计算转化 效率。
抗Amp
宿主细菌
含Amp培养基 Amp培养基
影响转化率的因素
细胞生长状态和密度。 转化的质粒 DNA 的质量和浓度。 试剂的质量。 防止杂菌和其它外源 DNA 的污染。
实验仪器
超净工作台
恒温空气摇床
水浴锅
恒 温 培 养箱 养皿 培
实验试剂
大肠杆菌DH5α LB培养基 氨苄青霉素 pUC18质粒
转化中的受体细胞
转化过程所用的受体细胞一般是限制性 修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性 内切酶和甲基化酶的突变株，常用 RM 符号表示。
实验原理
转化方法：电击法、 CaCl2、 RuCl等化 学试剂法 感受态细胞：处理后，细胞膜的通透性 发生变化，成为能容许外源 DNA 分子通 过时细胞的状态。 转化细胞(转化子)：带有异源 DNA 分子 的受体细胞( Transformant )。