硝酸甘油的耐受实验
------- 探究维生素C对硝酸甘油耐受的
影响
预防0902班第二组
创意及初稿者：宁佩珊 修改及编撰者：刘芳仪 演讲者：
预 防 0902 班
学号 组员
2602090216
2602090217 2602090218 2602090219 2602090220 2602090221 2602090222 2602090223
数据处理
对照组 耐药组 实验组
NE前血管张力g NE后血管张力g NTG后血管张力 g △张力max
数据处理
每组数据取平均值。
用统计学软件检验实验数据， 判定所得数据是否可取。
六、实验结果与结论
实验结果预期：
• NE前血管张力三个组一致，都为4g。 • NE后血管张力三个组基本一致。 • NTG后血管张力对照组最小，实验组次之， 耐药组最大。 • 于是△张力max对照组最大，实验组次之， 耐药组最小。
六、实验结果与结论
实验结果预期：
• 耐受组较对照组和实验组主动脉环对 NTG的舒张幅度明显下降 • 实验组较对照组主动脉环对NTG的舒张 幅度也有下降
六、实验结果与结论
结论：
①持续应用NTG贴片72 h可使家兔产生 明显的NTG耐受； ②维生素C和NTG合用具有显著改善NTG 耐受性的作用。
氧化物歧化酶和一些抗氧化剂诸如维生素E、 维生素C、叶酸和N一乙酰半胱氨酸均可完 全或部分逆转耐药，也证实了这一机制存在 的可能。大量的研究证实，持续NTG治疗时,超氧
阴离子的生成主要来源于NADH／NADPH氧化酶、 黄嘌呤氧化酶、线粒体和内源性NOS(NO合酶 )，最近 研究还发现，血小板激活能使超氧阴离子生成增多， 并且血管紧张素lI (AngiotensinlI，AnglI)也可激活 NADH／NADPH氧化酶，使超氧阴离子生成增多
离体实验条件：
恒温：37度
营养液： 台式液 给氧：5%CO2 的 氧气
离体实验步骤
• 1. 准备灌流系统和BL-410记录系统，预设各项 参数 • 2. 将离体血管环用铁丝连接至张力换能器上， 施以4g左右张力，供氧。 • 3. 平衡60min，用1mL 1μ mol/L 的去甲肾上腺 素预激血管环。 • 4. 依次加入不同的浓度 NTG,每加一药待收缩 达到最高峰后，立即给予下一剂量。 • 5. 记录实验结果。
• 维生素C是水溶性抗氧化剂，主要 作用场所在血浆中，充当抵抗氧 自由基侵犯的第一道防线。他能 通过提供电子给∙OH或O2-，使之 失活，变成活性低的脱氧抗坏血 栓剂，拥有广泛的抗氧化损伤的 能力。
四、实验器材、动物与药品
• 动物：家兔（ 成年，健康，体重相似，32只） • 维生素C注射液（1g/kg∙d），生理盐水，硝酸甘油贴膜 ( 16 mg/片,贴保宁R 5)，1μmol/L 的去甲肾上腺素NE，台 式液， 10-9～10-4mol/ L的NTG，20%乌拉坦 • BL-410生物信号记录分析处理系统， 手术台，注射器， 烧杯，纱布，铁丝，塑料导管，婴儿秤 ，张力换能器 ， 恒温浴槽、镊子、灌流系统、供氧装置
细胞培养实验发现，硝酸甘 油孵育内皮细胞或平滑肌细胞24h, 活性氧(ROS)生成增加，硝酸甘油 升高内皮细胞中ROS 作用减弱， 而抗氧化剂维生素C 可显著抑制 硝酸甘油引起的ROS 生成。
氧化应激与NTG的耐药性
近几年，很多学者将目光聚焦于NTG代谢过程中 诱导的氧化应激，认为其在NTG耐药性的产生中起 着非常重要的作用。研究表明，NTG耐药兔离体主 动脉环中氧自由基较未耐药组明显增加；且应用超
一、研究背景 硝酸甘油
主要通过扩张外周血管降低心脏前 后负荷，扩张冠状动脉减少心肌耗氧而 发挥作用。然而临床中发现，硝酸甘油 长期应用会导致其扩血管作用减弱甚至 消失，即形成所谓的硝酸甘油耐受。
硝酸甘油耐受性产生的可能机制
1 、血容量扩张 2 、缩血管反应增强 3 、舒血管物质减少 4 、氧化应激损伤 5 、一氧化氮，环磷酸鸟苷信号系统异常 6、 硝酸甘油生物转化异常
五、Байду номын сангаас验方法
1. NTG耐药性动物模型的建立： 剃净家兔胸部或肩胛间区的部分 皮毛,暴露一处皮肤,使NTG耐药组在 暴露皮肤上置一NTG贴膜,每日 7 ∶00 ～9 ∶00 更换贴膜一次,共72 小时，之后家兔即为对NTG耐药的家 兔。
五、实验方法
2、分组与处理： 根据家兔的体重、性别、血压随机各分成3组( n = 8)，组间无差 异: 1.对照组, 72小时内给以不含药物的贴膜覆盖于皮肤表面,每日 7∶00～9∶00更换贴膜一次;并相同时间内注射与实验组维C 注射液等量的生理盐水。 2.耐药组, 72小时内给以NTG贴膜覆盖于皮肤表面，每日给5mg NTG的贴膜，每日7∶00～9∶00更换贴膜一次；并相同时间 内注射与实验组维C注射液等量的生理盐水。 3.实验组， 72小时内给以NTG贴膜覆盖于皮肤表面，每日给5mg NTG的贴膜，每日7∶00～9∶00更换贴膜一次；并相同时间 内注射适量维生素C注射液。 4.不含药物的贴膜+维生素C
五、实验方法
• 8只实验组，8只耐药组和8只对照组家兔大剂 量耳缘注射乌拉坦致死后剖胸取出胸主动脉, 部分制备成4mm 长的血管环。 • 将血管环挂置于37 ℃,95 % O2-5 %CO2 平衡 的台式液浴槽中, 连接张力换能器, 调节基础 张力至4g , 平衡60min。
• 以1mL 1μmol/L 的去甲肾上腺素预激血管环 后依次加入1mL10-9～10-4mol/ L的NTG, 由 BL-410系统通道1记录血管环的最大舒张程 度△ 张力max。
在体家兔，硝酸甘油诱导耐受 的同时，血管组织中超氧阴离子产 物及NADH活性增加，而超氧化物 歧化酶活性及表达下降，外源性超 氧化物歧化酶孵育耐受血管组织可 恢复硝酸甘油的舒血管作用，超氧 化物歧化酶抑制剂可模拟家兔离体 血管耐受。
二、实验目的
1、观察硝酸甘油（NTG）对血管的作用。 2、探究维生素C对家兔硝酸甘油耐受性形成的 影响。
卢雁
张群 宁佩珊 黎红旭 施静怡 刘芳仪 刘旭圆 王傅
2602090224
2602090226 2602090227
陈洁
谢晓然 翁国新
2602090228
2602090229 2502080211 0202090319
扎西卓玛
格松卓玛 穆聃 马婧
一、研究背景 耐受
指持续使用某种物质后，对其剂量反 应下降，因此需要增加此种物剂量以达 到原来剂量所产生的效应。
NTG耐受时血管组织中超氧阴离子的 含量显著增多，过多的超氧阴离子能迅 速灭活NTG的效应分子NO，导致NTG耐 受性的产生。研究发现NTG耐受时血管 组织中MDA的含量显著升高，而NO和 cGMP(NO的下游分子)的含量显著降低， 表明NTG耐受时确存在氧化应激因素。 VitC与NTG合用后，伴随NTG耐受程度 的减轻，MDA(丙二醛 )、NO和cGMP的上 述变化发生逆转，提示VitC对NTG耐受 性的改善作用是通过清除过多的超氧阴 离子，并进而减少NTG源性NO的失活实 现的。
3、了解离体动脉环的实验方法。
三、实验原理
• 大量研究表明，硝酸甘油增加氧自由基生成是硝酸甘油耐受的重要机制之一.
硝酸甘油是治疗心绞痛的经典 药物，主要作用于血管平滑肌细胞 而产生舒血管效应，降低前后负荷， 扩张冠状动脉，减少心肌耗氧而发 挥作用。长期反复应用硝酸甘油可 引起耐受导致疗效减弱。
三、实验原理