MagDNA TM 磁珠细菌DNA提取试剂盒( 磁珠型)适合：G+,G-细菌，酵母，真菌，乳酸菌，霉菌等Cat. # 504001（50 preps）504002（100 preps）504003（200 preps）Note: for laboratory research use only.MagDNA TM 磁珠细菌DNA提取试剂盒( 磁珠型)适用范围：适用于手动快速提取各种细菌基因组DNA，无需蛋白酶消化，也适用于SPRI-TE；雅培m2000；MagNA Pure LC 2.0 System；BioRobot MDx Workstation；King Fisher（ml)；King Fisher 96 process，ABIgen Magstation等系列核酸提取仪，适合大规模提取！试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次200次Lysis Buffer A 室温25ml 50ml 100 ml Solution AB 室温12ml 22ml 44 ml Binding Buffer PQ 室温25ml 50ml 100 mlWash Buffer B 室温15ml 30ml 60ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇Wash Buffer C 室温10 ml 20ml 30ml第一次使用前按说明加指定量乙醇（3倍）Wash Buffer D 室温10 ml 20ml 30ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇（3倍）Elution Buffer E 室温10ml 15ml 25ml MagDNA磁珠室温 1.2ml 1.2ml X 2 1.2ml X 4本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项:1.Lysis Buffer A或者W ash Buffer B低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

2.避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

3.加入MagDNA磁珠前，请漩涡混匀，以免影响浓度的均一性。

产品介绍：本试剂盒采用国内领先的专利技术合成的高度分散均一的纳米磁珠颗粒，表面修饰高效核酸结合基团，能最大限度的吸附DNA和RNA，博凌科为经过多次实验优化缓冲液体系，开发出一系列高效核酸纯化试剂盒。

独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于MagDNA® D-Beads DNA磁珠，再通过一系列快速的漂洗除杂的步骤，将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐高pH值的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从磁珠上洗脱。

适合多种核酸纯化仪器，可以实现核酸的自动化快速分离。

为您的科研工作带来方便！产品特点：1.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

2.快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。

3.多次漂洗确保高纯度，典型的产量200µl全血可提取出5-15µg，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达30 kb -50kb，可直接用于PCR、Southern-blot和各种酶切反应。

4.一般加入结合液和磁珠，由于DNA浓度较大会析出，会和磁珠缠绕在一起，形成一团黑色螺旋装物质，请缓慢颠倒，团状即是DNA和磁珠的复合体。

5.洗脱液Elution Buffer E不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。

也可以使用水洗脱，但应该确保批pH大于8.5，pH过低影响洗脱效率。

用水洗脱DNA应该保存在－20℃。

DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（30mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.5），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

注意事项：1.需要自备异丙醇和无水乙醇。

2.开始实验前将需要的水浴先预热到70℃备用。

操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）提示：第一次使用前请先在W ash Buffer B/C/D中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!1.收集1毫升过夜培养细菌加入1.5毫升离心管。

可以观察菌液浓度，自行调整菌体多少！2.9,000rpm离心30秒，使细胞沉淀下来，弃上清，涡旋或轻弹打散细胞沉淀。

涡旋振荡直到细胞团充分重悬、分散。

细胞的重悬分散对下一步裂解非常重要，细胞未打散就加入裂解液，会导致细胞不能充分裂解，形成肉眼可见团块。

3.加入350μl Lysis Buffer A重悬的细胞，上下吹打裂解细胞，或者剧烈涡旋10秒帮助裂解细胞，70℃水浴10min。

4.可选步骤: 在裂解物中加入RNase A（10mg/ml）至终浓度10μg/ml，颠倒25次混匀，37℃温育15分钟去除残留RNA，然后冷却回室温。

5.加入冰冷的150μl Solution AB后，在涡旋振荡器上高速连续振荡混匀25秒。

混匀后可能见到一些小的蛋白团块。

6.12，000 rpm(可根据需要调整加大离心力)离心5分钟。

这时候应该可以见到管底暗褐色或是白色的块状沉淀，也可能见到一些蛋白沉淀漂浮在液体表面。

7.小心吸取上清（大约400μl）到一个新的1.5ml离心管中。

吸取上清时，注意不要吸到管底的和漂浮在液体表面的蛋白沉淀。

如果不小心将蛋白沉淀转入新的离心管中，可再次离心2分钟后取上清。

8.加入等体积的室温Binding Buffer PQ 400μl和20μl MagDNA磁珠，立刻上下颠倒20次充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，也可能会形成一团或是类似双螺旋的丝状物质，请不要吸走黑色团块。

上述步骤中充分混匀非常重要，混匀不充分严重降低产量，必要时如样品粘稠不易混匀时可以涡旋振荡15秒混匀。

9.将离心管放到磁性分离架上静止1-2min，直到溶液变澄清，小心的吸掉液体，不要吸到磁珠。

10.取下离心管，加入500μl杂质去除缓冲液Wash Buffer B （请先检查是否已加入无水乙醇!），颠倒混匀，将离心管放到磁性分离架上静止1-2min，直到溶液变澄清，小心的吸掉液体。

11.加入600μl漂洗液Wash Buffer C （请先检查是否已加入无水乙醇!），颠倒混匀，将离心管放到磁性分离架上静止1-2min，直到溶液变澄清，小心的吸掉液体，弃掉废液。

12.加入500μl漂洗液Wash Buffer D （请先检查是否已加入无水乙醇!），颠倒混匀，将离心管放到磁性分离架上静止1-2min，直到溶液变澄清，小心的吸掉液体，弃掉废液。

（尽可能的吸掉残余液体，以免影响下游实验）13.取下离心管，将其放置在37-65℃的烘箱种晾干残余乙醇。

（也可用吹风机吹2-3min即可，不要太干，以免DNA难以溶解）14.加入50-100μl洗脱缓冲液Elution Buffer E，轻轻弹动管壁，将磁珠完全打散分散在洗脱缓冲液中，室温放置1-2min。

（洗脱缓冲液在65-70℃水浴中预热效果更好，如果要得到更高浓度的DNA可以减少洗脱体积，也可分两次洗脱）15.将离心管放到磁性分离架上静止1-2min，直到溶液变澄清，小心的转移溶液到一新的离心管，不要吸到磁珠，如果吸到磁珠可重新放置在磁力架上分离。

16.DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。

附：自动核酸提取仪操作：（以Thermo King Fisher 96 为例说明）1.用排枪小心吸取处理好的上清（步骤10中的大约400μl ）到King Fisher Plate A 板中，再加入等体积的Binding Buffer PQ （大约400μl ）和20μl MagDNA 磁珠，充分震动混匀。

也可直接处理，直接在核酸提取仪上消化。

2.并按表Table 96，用排枪添加其他试剂，启动King Fisher 96 ，完成设置，等待结果！Table96 （表96） A=King Fisher 96 DW Plate B=King Fisher 96 KF Plate3. 结束后取出板子，低温保存，检测纯度和浓度！4.如果要得到更多的产物，可再次洗脱！Plate Type Plate ContentReagent VolumeA 1 Sample ：步骤10中制备样品+Binding Buffer PQ 400-1000μlA 2 Wash BufferB 500μl A 3 Wash BufferC 600μl A 4 Elution BufferD 500μl B 5 Elution BufferE 50-100μl A6Tip Loading Plate--问题与解决方法问题评论与建议DNA产量低*使用了不恰当的裂解液，造成裂解不完全-建议：处理材料不要过量。

*加入蛋白沉淀液后没有充分混匀，DNA和蛋白质沉淀不能分离开，离心时丢失-建议：参见步骤5保证充分混匀。

* DNA沉淀在洗涤的时候丢失了-建议：异丙醇沉淀后用乙醇洗涤的过程中，倒弃上清的时候要格外小心，不要把DNA沉淀也倒掉了。

A260/A280>1.9 * RNA酶处理时间不够造成RNA污染-建议：可以加大RNA酶用量或者处理时间延长到1小时。

* DNA剪切断了-建议：严格按照操作步骤，动作不可以太剧烈。

A260/A280 <1.6 *蛋白质残留高-建议：保证重复的裂解液用量和时间；*测定吸光值时用水稀释DNA 会降低A260/A280-建议：使用TE 缓冲液来稀释DNA，保证pH值大于8.0。

* DNA没有完全溶解-建议：可在65℃温育帮助重新溶解（不要超过一小时）然后室温或者4℃放置过夜，期间可以颠倒轻弹帮助溶解。

问题评论与建议变色的DNA *如果异丙醇沉淀后没有迅速进行70％乙醇漂洗的步骤，有的组织如肝脏提取出的DNA可能会变色-建议：异丙醇沉淀离心后，马上进行70％乙醇清洗的步骤。

DNA长度小于20kb *样品太旧或者不正确的存放，反复冻融等，造成DNA降解-建议：选用新鲜的样品。

*操作不当，造成对基因组DNA的剪切-建议：混匀轻柔，不可以用手剧烈振荡离心管，选用大口径的枪头转移或者混匀DNA。

DNA沉淀难以重新溶解水化*晾干DNA沉淀时过度了-建议：晾干时密切观察，不要干燥过头，注意应该观察管底的DNA沉淀，有时候管壁上的残留乙醇已经挥发，但留下一些水分还没有干，只要管底DNA干了就可以加入DNA 溶解液。

可在65℃温育帮助重新溶解（不要超过一小时）然后室温或者4℃放置过夜，期间可以颠倒轻弹帮助溶解。

下游酶切切不开或者PCR反应受抑制* DNA未干燥完全，残留乙醇太多-建议：敞开离心管口，在65℃温育几分钟，让乙醇挥发。