模拟试卷五及参考答案一、名词解释 (10分)1.同尾酶；2. 基因文库;3. gene therapy；4. gel retardation；5. 反义RNA技术二、填空 (20分)1. 质粒是存在于细菌细胞中能独立于染色体DNA而自主复制的、、的双链DNA分子。

2. 1973年，Cohen等获得了抗四环素和新霉素的重组菌落，标志着基因工程的。

3. 基因工程的应用主要在、、分离鉴定生物体的遗传信息、研究基因的表达调控等方面。

4. 带有两种宿主复制子，因而能在两种生物体内复制的载体分子，称为。

5. λDNA两端各有12个核苷酸的突起，而且可以通过碱基互补配对形成环状分子，配对的区域称为。

6. EB-CsCl梯度离心法可以纯化质粒DNA，其中EB的作用有两个：、。

7. 建立生物基因文库所需克隆的数目，可通过公式进行估算。

8. 将噬菌体DNA转入细菌的方法主要有、两种。

9. 利用lacZ’基因的插入失活鉴定需要在培养基中添加IPTG和两种物质，根据蓝白斑选择重组克隆。

其中IPTG的作用是。

10. PCR反应的每一次循环都包括、、三个步骤，通过25-30cycles，可以扩增大量的目的片段。

11. 植物基因直接转移技术的原理是：。

12. 按照限制性内切酶的命名原则，Bam H I中，Bam表示，H表示，I表示。

13. PCR反应中的一个引物序列为AGTCATCAGAGAAACCCTTT，其Tm值大约是。

14. 常用的标记探针的方法有、、，杂交后，可用放射性自显影等方法显示杂交带。

15. 通过、两种策略，可以达到改良植物性状的目的。

16. 在动物基因工程中，常用的载体主要有、、、__________ 。

17. YAC载体的中文名称是，包括着丝粒、、_________________等结构，才能保证其正常的复制。

18. 在连接反应中，平头末端的连接效率要粘性末端的连接效率。

19. 农杆菌侵染植物材料时，Ti质粒上的识别植物创伤信号，启动基因表达，将切割下来，转移到植物染色体DNA上。

20. 在大肠杆菌中，基因的表达调控主要有两种方式和。

三、选择题 (10分)1. 下列哪种方法不能用于重组菌落的鉴定？（）a.根据外源DNA的序列进行PCR分析b.菌落原位杂交c.酶切鉴定d.提取重组DNA分子，电泳分析。

2. oligonucletide-directed mutagensis 中，需要 DNA，因此一般用 _______作为克隆载体。

（）a. 单链，pUC19b. 单链，M13c. 双链，M13d. 双链，λ载体3. 要建立人类的基因文库，下列那种载体所需要的克隆数目最少？（）a. plasmidb. λ载体c. Cosmidd. BAC4. 在酵母载体中，的转化率最高，最稳定。

（）a. YEps, YIpsb. YRps, YIpsc. YIps, YEpsd. YEps, YRps5. 低等真核生物如酵母、丝状真菌等的染色体可以通过下列哪种方法进行分离。

（）a. 琼脂糖凝胶b. 聚丙烯酰胺凝胶c. OFAGEd. 变性琼脂糖凝胶6. 为了提高质粒DNA的产量，在细菌培养过程中，可加入（）增加质粒的拷贝数。

a. 噬菌体b. 氯霉素c. Kand. amp7. 在植物遗传转化中，可以利用P1噬菌体，它含有基因，可以识别靶序列并将其切割下来。

因此，我们可以将Kan抗性基因置于其靶序列中间，利用这一系统可将Kan抗性基因从转基因植株中剔除。

a. Creb. NPT IIc. trad. Cos2.下列那种酶可以降解RNA:DNA杂交分子中的RNA? ( )a. Reverse transcriptaseb. RNase Hc. DNase Id. 拓扑异构酶9. 大肠杆菌质粒克隆DNA片段的大小是下列哪种情况？（）a. <3kbb.10--20kbc. <8kbd. 40kb10. 下列哪种人体蛋白不能通过大肠杆菌来表达？（）a. 胰岛素b. 生长激素c. 重组因子VIIId. 生长激素抑制素四、问答题 (30分)1.怎样测定DNA的浓度和纯度？要求写出两种测定浓度的方法。

2.估算DNA分子量的方法有哪些？3.重组率指得是含有外源DNA片段的重组分子与加入的载体分子数之比，请问如何提高重组率？4.克隆PCR片段的方法有哪些？5.怎样鉴定DNA分子上的蛋白质结合位点？6.目前已在E. coli中合成了大量的人体蛋白，但不可能利用E. coli合成所有的人体蛋白，为什么？7.分子标记有哪些类型？在作物遗传育种中有哪些应用？8.植物基因转移的方法有哪些？各自有哪些优缺点？五、方案设计 (15分)1.从一双链DNA病毒上克隆了一个基因，请设计一个方案，对克隆的基因进行定位分析。

2.从人体中分离了一种重要酶，请设计一个方案，利用大肠杆菌来生产这种人体蛋白。

六、论述题 (15分)1.结合GMO的生物安全性，谈谈你对转基因技术发展前景的看法？标准答案一、名词解释 (10分)3.同尾酶：识别位点不同，但切出的DNA片段具有相同的末端序列。

4.基因文库：某种特定的生物所含有的能够包含所有基因的足够数目的克隆的集合。

5.gene therapy：基因治疗，用正常基因取代病人细胞中的缺陷基因，以达到战胜分子病的目的。

包括基因诊断、基因分离、载体构建、基因转移等步骤。

6.gel retardation：凝胶滞后。

DNA结合蛋白后，分子量将会增加，电泳时的迁移率降低。

7.反义RNA技术：与天然mRNA反向互补的RNA分子（1分），在基因工程中用来阻止内源mRNA的表达，从而改变生物的性状。

二、填空 (20分)1共价、闭和、环状； 2 诞生； 3 生产生物大分子、购建新物种；4 穿梭质粒；5 cos位点；6 降低DNA浮力密度分离超螺旋DNA和线状DNA，指示条带位置；7 N=ln(1-P)/ln(1-a/b) 8 转染、体外装配9 X-GAL、诱导物10 变性、退火、延伸11 超螺旋结构质粒DNA，可以随机整合到植物基因组12 发现酶的细菌，细菌的菌株或品系，第一种酶13 56；14 末端填充（End filling）、随机引物（Random Priming）、缺刻平移（Nick Translation）15 基因附加、基因扣除16 腺病毒、猿猴病毒、牛痘病毒、杆状病毒17 酵母人工染色体 18 低19 Vir、T－DNA 20 诱导、抑制三、选择题 (10分)1. d2. b3. d4. a5.c6. b7. a8.b9. c10.c每题1分。

四、问答题 (30分)9.怎样测定DNA的浓度和纯度？要求写出两种测定浓度的方法。

浓度：1）测定260nm的吸光值，1OD相当于50ug双链DNA/ml。

2）电泳检测纯度：A260/A280=1.8，<1.8 表示含有酚或蛋白质；>2.0说明含有RNA。

10.估算DNA分子量的方法有哪些？a. 根据DNA分子的迁移率，可以用公式计算出分子量D=a-b(logM)b. 通过与已知分子量的比较，粗略的估算。

11.重组率指得是含有外源DNA片段的重组分子与加入的载体分子数之比，请问如何提高重组率？连接反应条件外源片段：载体＝2:1-10:1（分子数），增加碰撞机会，减少自身环化。

载体除磷（磷酸酯酶5’除磷）。

TdT在3’端增加人工粘性末端，防止载体自我环化。

4. 克隆PCR片段的方法有哪些？a.T-A克隆b.在PCR反应时，引物的5’端增加限制性内切酶的识别位点，通过酶切插入载体的多克隆位点。

5. 怎样鉴定DNA分子上的蛋白质结合位点？a.凝胶滞后b.DNase I 足迹法8.目前已在E. coli中合成了大量的人体蛋白，但不可能利用E. coli合成所有的人体蛋白，为什么？A: 外源基因序列导致的问题a) 外源基因可能含有内元。

b) 外源基因可能含有在E. coli作为终止子的序列。

c) 基因的密码子可能不适合于E. coli中翻译。

B: E. coli合成重组蛋白的限制a) E. coli不能加工成正确的重组蛋白。

b) E. coli不能正确的折叠蛋白，形成无活性蛋白。

C) E. coli可能降解重组蛋白。

9.分子标记有哪些类型？在作物遗传育种中有哪些应用？类型：以Southern杂交为基础；以PCR为基础的应用：分子图谱的构建；品种、品系鉴定和杂交种纯度分析；亲缘关系分析；基因标记及标记辅助育种（Marker-assisted Selection，MAS）；数量性状因位点（QTL）的分子标记辅助选择。

10.植物基因转移的方法有哪些？各自有哪些优缺点？直接基因转移技术：基因枪法，适于单子叶植物原生质体法PEG介导的方法生物为媒介的方法：农杆菌介导转化法病毒为媒介的转化五、方案设计 (15分)3.从一双链DNA病毒上克隆了一个基因，请设计一个方案，对克隆的基因进行定位分析。

（7分）首先通过两种以上的酶进行酶切，构建限制性内切酶图谱。

然后通过Southern 杂交确定基因在DNA分子上的位置。

4.从人体中分离了一种重要酶，请设计一个方案，利用大肠杆菌来生产这种人体蛋白。

首先对酶进行测序，获得氨基酸序列，根据三联体密码子原则，转化成DNA序列，使用大肠杆菌偏爱密码子，然后插入表达载体进行生产。

六、论述题 (15分)2.结合GMO的生物安全性，谈谈你对转基因技术发展前景的看法？转基因过程中，广泛使用抗生素的抗性基因作为选择标记基因，存在着生物安全问题。

1）抗生素抗性基因可能渗入细菌中，使人体细菌获得抗性，造成疾病治疗困难；2）可能造成生态环境的破坏。

正是由于这些问题，科学家试图创造一些方法，在转化之后去除抗生素标记基因，目前已经获得了很多方法可以去除这些标记基因。

基因工程将在未来发挥越来越重要的作用，主要在以下三个方面：1）大规模生产生物大分子，如一些重要医药、工业原料等。

2）改良生物遗传性状，构建新物种。

3）搜寻、鉴定遗传信息，为疾病等的检测提供可靠的方法。

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