l点样器:
一般采用微升毛细管（定量点样毛细管： 0.5ul、1.0ul、2.0ul、5.0ul、10ul等）、微升注射
器或半自动、全自动点样器材，手动点样时建议
采用微量毛细管。
l展开缸
应用适合薄层板大 小的薄层色谱专用展开 缸（箱），展开缸有水 平式和直立式两种类型。 日常用的最多的是直立 式展开缸。它又分平底 展开缸或双槽展开缸。 双槽展开缸具有节省溶 剂、便于预平衡、可控 制展开缸内相对湿度等 有点，故此常推荐使用。 水平展开用专用的水平 展开缸。
Ø 限度检查 采用定量配制的对照品对照或对照品稀释 对照。供试品溶液色谱中待检查的斑点应与相应的 对照品溶液或系列对照品溶液的相应斑点比较，颜 色（或荧光）不得更深；或照薄层色谱扫描法操作， 峰面积不得大于对照品的峰面积值。必要时应规定 检查的斑点数和限量值。
Ø含量测定 照薄层色谱扫描法，测定供试品中相应成分 的含量。
高效薄层板（HPTCL）所使用的固定相较普通薄层 板平均粒度小，颗粒分布范围窄，因此在相对短的 展开距离中可以达到更好的分离效果。
传统薄层板与高效薄层板的比较
平均粒度（um） 颗粒分布（um） 点样量（ul） 展距(cm) 分离时间(min) 检测限：可见光（ng）
荧光（ng） 薄层厚度（mm）
TCL 10-40 宽 大 10-15 30-200 100-1000 1-ห้องสมุดไป่ตู้00 0.2-0.3
l 定义：薄层色谱法，或称薄层层析(thin—layer chromatography），系将适宜的固定相涂布于玻 璃板、塑料或铝基片上，成一均匀的薄层；将供 试品与相应的对照物点于薄层板的一端，在展开 容器内用适宜的溶剂（展开剂）展开，使供试品 中所含成分分离，采用适合的显色剂或显色方法 显色，将供试品色谱与对照物色谱比较，或采用 薄层扫描仪扫描，以进行鉴别、检查，或含量测 定的方法。
HPTCL 5-10 窄 小 5-8 3-20 10-100 0.1-10 0.1-0.2
4、按来源分为：
Ø 市售薄层板
青岛海洋化工（玻璃）
天津斯利达（铝箔）
进口薄层板（Merck等） Ø 不同品牌的薄层板，所用的硅胶
粒度、粘合剂不同，薄层行为和薄层
色谱效果存在差异，因此实验时必须明确品牌。
Ø 自制薄层板
六、显色与检测
色谱斑点本身有颜色者，可直接在日光下观察可见光谱；斑点在 紫外光激发下可以发射荧光者，可直接在365nm紫外灯下观察荧光色 谱；对于可见光下无色，但在紫外光下有吸收的成分可用带有荧光剂 的硅胶板（如硅胶GF254板），在254nm紫外光灯下观察荧光板面上的 荧光猝灭物质形成的色谱。
需要加试剂方能显色或发射荧光者，需要将试剂均匀喷洒于薄层 板面，直接观察或加热显色后观察。
Ø 蒸气熏蒸显色：可用双
槽展开缸或适宜大小的干燥
器代替，如碘蒸汽。
l检视装置
为装有可见光、 254nm（荧光萃灭）及 365nm紫外光光源及相 应的滤光片的暗箱， 可附加摄像设备供拍 摄图像用，暗箱内光 源应有足够的光照度。
l薄层色谱扫描仪
系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点， 或经激发后能发射出荧光的斑点，进行扫描，将 扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定量 的分析仪器。
《中国药典》2015版一部点样要求
TLC
HPTLC
距底mm
10～15
点间距mm
以互不干扰为宜 8
点直径mm
≤4
条带长mm
5 ～10
展开剂与原点间距mm 5
展距cm
8-15
8 ～10
以互不干扰为宜 5
≤2 4～8
5 5-8
以点样方式的不同可分为接触式点样和喷雾点 样两种 Ø接触式点样 将吸有样品溶液的毛细管或针头与 薄层板表面接触，从而使样品在薄层板上形成圆 点状的点。多采用毛细管微量注射器手动点样， 有的仪器也可以进行接触式点样。 Ø喷雾点样 点样针针杆匀速向下推，针头部形成 小液滴被喷头喷出的气流垂落在薄层板上，机械 推动薄层板匀速摆动，则形成均匀的条状原点。 必须采用仪器进行。
用浸渍法，具有板面显色均匀的特点，但有的样品经试剂浸渍后， 斑点容易被浸润而扩散或拖尾。
加热显色需注意加热时间和温度，如含羟甲基纤维素钠的手工自 制薄层板代替预制板，注意加热温度过高或加热时间过长，容易引起 板面焦化，如用硫酸等显色剂更易造成板面的炭化而影响显色效果， 需要特别注意。有的成分加试剂（如挥发油或甾醇类经香草醛硫酸、 硫酸醋酐等）显色后，加热温度高低和时间长短不同或放置时间不同， 斑点的显色可能随时间而有所改变。
l显色装置
薄层色谱法可针对不同的样品采用不同的显色 方法和显色剂进行显色，从而可以专门针对某一 化合物进行检视，或对紫外光和可见光下无吸收 的化合物进行检视。极大的提高了薄层检视的专 属性与灵敏性。这是薄层色谱法灵活性的一个集 中体现。即同一薄层板可生成可见光、紫外光谱、 荧光光谱和荧光淬灭光谱。
Ø 检测灵敏度 用于限量检查时，采用供试品溶液和对照品溶液与 稀释若干倍的对照品溶液在规定的色谱条件下，于同一薄层板 上点样、展开、检视，后者应显清晰的斑点。
Ø 分离度 用于鉴别时，对照品溶液与供试品溶液中相应的主斑 点，应显示两个清晰分离的斑点。用于限量检查和含量测定时， 要求定量峰与相邻峰之间有较好的分离度，分离度（R）的计 算公式为：R=2（d2-d1）/(W1+W2) 式中：d2为相邻两峰中后一峰与原点的距离； d1为相邻两峰中前一峰与原点的距离； W1及W2为相邻两峰各自的峰宽。 除另有规定外，分离度应大于1.0。
在保证色谱质量的前提下，如需对薄层板进行特别处理 和化学改性，以适应供试品分离的要求时，也可用实验室自制 的薄层板。最常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅 胶HF254、微晶纤维素等，其颗粒大小，一般要求粒径为10～ 40μm。
(自制薄层板由于操作粗放，硅胶质量不高和手工操作个体差 异大致使色谱质量不高，分离度、重现性均难以达到满意效果，所 以一般只针对需特别处理和化学改性的薄层板。)
Ø 供试品溶液溶剂残留：若供试品溶液溶剂残留， 会改变展开的选择性，特别是供试品溶液的溶剂 极性与展开的溶剂极性相差较大时更为明显；再 者，亲水溶剂残留在原点吸收大气中的水分（特 别是高湿环境）对色谱质量的影响也不可低估。
四、点样操作
l 点样前薄层板准备
Ø薄层板表面应均匀、平整、光滑，无麻点、无气 泡、无破损及污染。铝基片薄层板可根据需要剪 裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的硅胶层不得 有破损。
Ø临用前一般应在110℃活化30分钟。聚酰胺薄膜不 需活化。
Ø如在存放期间被空气中杂质污染，使用前可用异 丙醇、二氯甲烷、甲醇或二者的混合溶剂（8:2） 在展开缸中上行展开预洗，取出，晾干，110℃活 化，置干燥器中备用。（注意标记方向）
Ø展开前如需溶剂蒸气预平衡，可在展开缸中加入 适量的展开剂，密闭，保持15～30分钟，待溶剂蒸 气平衡后，应迅速放入点有样品的薄层板，立即 密闭，展开。 如需使展开缸达到溶剂蒸气饱和的状态，则 须在展开缸的内侧放置与展开缸内径同样大小的 滤纸，密闭一定时间，使达到饱和再如法展开。
Ø展开用的溶剂需要使用分析纯并要求临用前配制， 不可多次反复使用。展开剂如需分层，则放置分 层后按要求分取上层或下层，备用。
鉴别时可用供试品的主板点与
对照品溶液主板点的比移值进
行比较，或用比移值来说明主
斑点或杂质斑点的位置，除另
有规定外，比移值（Rf）应在 0.2-0.8之间（含量测定时比移 值（Rf）应在0.3-0.7之间）。
九、测定法
Ø鉴别 取适宜浓度的对照溶液与供试品溶液，在同一薄 层板上点样、展开与检视，供试品溶液所显主斑点的 颜色（或荧光）和位置应与对照溶液的斑点一致。
主要的显色方法有：喷雾显色、浸渍显色与蒸 气熏蒸显色。
三氯化铝：黄酮类专属显色剂
碘化铋钾：生物碱专属显色剂
硫酸：许多成分激发荧光的通用试剂
Ø 喷雾显色应：使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾 器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷 出。
Ø 浸渍显色：使用浸渍槽也可用适宜的展开 缸代用，使用时，将展开的薄层板平稳垂直的 放入浸渍槽中一至数秒后取出，擦去薄层扳背 面残存的试剂，显色后的图像供分析用（需要 时可以加热）。
三、仪器和器材
薄层板 点样器 展开缸 显色装置 检视装置 扫描仪
薄层板
1、吸附材料不同分为：硅胶板薄层板、聚酰胺薄层
板
硅胶薄层板是目前应用最广泛的薄层板，最常用的 固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254
2、薄层板涂布的背材不同分为：玻璃板、铝箔板、
聚酰胺薄膜板
3、吸附材料的粒径分为：普通板与高效板
l 特点:高效、快捷、方便、直观、经济。
l 分型： ü 薄层吸附层析（吸附剂） ü 薄层分层层析（纤维素） ü 薄层离子交换层析（离子交换剂） ü 薄层凝胶层析（分子筛凝胶） Ø 一般中药分析中应用较多的是以吸附剂为固定相的
薄层吸附层析
Ø薄层吸附层析法：
它是利用各成分对同一吸附剂吸附能力不 同，使在移动相（展开剂）流过固定相（吸附 剂）的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再 吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离 的目的。
喷雾点样的优点：1、点样过程中，点样器不与薄层板接 触，防止薄层板物理损伤；2样品密集，有利于展开后检视； 3、减少样品扩散，样品斑点窄，展开后分离度提高；4、 自动化程度高，样品溶液不易在针壁上残留。
五、展开
将点样后的薄层板放入加有展开剂的展缸中，密闭， 展开，薄层板浸入展开剂的深度一般要求溶剂的液面距原 点约5mm，密闭展开，展开至规定规定的展距后，立即取 出薄层板，晾干，以备检测。多数品种展距为7～9cm,必 要时可用长度为15或20cm的板，展距可适当延长至12 ～ 14cm。高效薄层板上展开5～8cm。 Ø 薄层板展开方式主要有：上行展开、下行展开、水平展开 和环形展开，必要时也可进行二次展开或双向展开。