1方法
薄板层析法(TLC)。
2原理
利用不同大小的糖分子在硅胶薄板上的扩散速度的大小不同,将发酵豆粕中的寡糖分开。
3仪器及试剂
3.1硅胶板:10*10cm;
3.2层析缸(可供放置硅胶板)与硅胶板配套;
3.3烘箱;
3.4移液枪(10μl)以及其配套枪头;
3.5高速离心机;
3.6250ml 具塞锥形瓶;
3.7乙醇(分析纯)
3.8正丙醇(分析纯)
3.9乙酸(分析纯)
3.10
α-萘酚(分析纯)3.11正磷酸(分析纯)
4试剂的配制
4.1展开液:正丙醇:乙酸:水=1:1:0.1(V/V/V)
4.2显色液:α-萘酚
1ml 正磷酸
10ml 乙醇
989ml 共1000ml
5实验方法及步骤检测技术规范与标准方法编号:QB/HHS JC002-2013
修订:第1版
第1次修改发酵豆粕中不良寡糖的定性检测方法起草:赵丽霞审核:刘永垒
批准:
执行日期:2013年06月15日
5.1寡糖标样:用豆粕代替。
5.2样品的预处理
准确称取发酵豆粕样品5.0g于250mL三角瓶中,加入50.0mL80%的乙醇溶液,70℃水浴浸提1h。
取2mL浸提液,10000r/min离心10min,4℃保藏备用。
5.3样品的测定
在预制硅胶板上点样,点样量为5μL,点样干燥后在展开液中展开,展开至离硅胶板前沿2cm处。
自然晾干后,喷淋显色液,在140℃下烘5min显色。
6结果判定
对比硅胶层析板上,样品和标样的条带,直接判读发酵豆粕中寡糖的降解情况。
不同发酵豆粕样品的TLC图谱
6.1样品中寡糖的定性检测结果:
1-4号:++++
5-6号:+++
7号:—
8号:++
6.2定性判定标准如下:
++++:完全没有降解;(图谱斑点与豆粕相同,表现为三个斑点)
+++:基本没有降解;(除了豆粕中的三个斑点外,蔗糖上方还多了一个单糖)
++:降解不完全;(与豆粕相同有三个斑点,但亮度较暗,如8号样品)
+:基本降解;(对应豆粕中的三个样品亮度较暗或很浅)
—:完全降解;(图谱上无斑点,表现为图谱中非常干净)。