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毒理学研究
急性毒性研究 急性毒性研究
一次或24小时内多次给予 一次或 小时内多次给予 •动物 动物 •给药途径 给药途径 •阴性对照组 阴性对照组 •判断安全范围 判断安全范围
2010-11-4
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急性毒性研究 急性毒性研究
最大无反应剂量
未见反应剂量（ 未见反应剂量（NOEL） ：No Observed Effect Level ） 未见不良反应剂量（ 未见不良反应剂量（NOAEL）： No Observed Adverse ）： Effect Level
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局部用药特殊毒性研究
刺激性 给药部位的可逆性炎症改变 过敏性（变态反应或超敏反应） 过敏性（变态反应或超敏反应）
特异性免疫反应，表现为组织损伤或生理功能紊乱， 特异性免疫反应，表现为组织损伤或生理功能紊乱，异常或病理性的
Ⅰ型，快发或速发过敏型，IgE介导 快发或速发过敏型， 介导 Ⅱ型，细胞毒型或溶细胞型，IgG介导 细胞毒型或溶细胞型， 介导 免疫复合物型或血管炎型， Ⅲ型，免疫复合物型或血管炎型，IgG、IgM介导 、 介导 迟发型或结核菌素型， 淋巴细胞介导 Ⅳ型，迟发型或结核菌素型，T淋巴细胞介导 光敏性 光毒性（光刺激性） 光毒性（光刺激性） 光过敏性（光变态反应） 光过敏性（光变态反应） ——Ⅳ型变态反应 溶血性
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一般药理学（ Pharmacology） 一般药理学（General Pharmacology）研究
对主要药效学（ 对主要药效学（Primary Pharmacodynamic） ） 作用以外的广泛的药理学研究 次要药效学（ 次要药效学（Secondary Pharmacodynamic ） 安全药理学（Safety Pharmacology ） 安全药理学（ 中枢神经系统 心血管系统 呼吸系统
间、性质、程度及其可逆性 性质、
2. 确定临床监测的安全性参数 3. 推算人体使用的安全起始剂量以及随后的剂
量递增方案
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一般原则
具体问题具体分析——品种特点 品种特点 具体问题具体分析 最大限度暴露毒性（ 最大限度暴露毒性（如果临床上存在某些方面的安全 性担忧时则应进行该方面的非临床安全性研究） 性担忧时则应进行该方面的非临床安全性研究） 执行GLP 执行 毒性暴露结果向临床过渡，利弊权衡 重在“ 毒性暴露结果向临床过渡，利弊权衡——重在“评价” 重在 评价” 药理毒理研究的整体性、综合性、 药理毒理研究的整体性、综合性、阶段性 说明书： 严进” 说明书：“严进”、“宽进” 宽进”
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免疫毒性研究
评价潜在的免疫原性
检测血清抗体滴度 免疫复合物形成 间接引起生物活性分子释放
病理毒性（结合在长毒中观察） 病理毒性（结合在长毒中观察）
淋巴器官称重 血液学，血细胞分类计数 血液学， 免疫器官组织病理学检查 免疫器官组织病理学检查
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免疫毒性研究
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何谓具体问题具体分析？ 何谓具体问题具体分析？
CASE（要素） CASE（要素）
产品的设计思路 分子结构 作用机制、 作用机制、活性特点 安全性担忧 相关动物 免疫原性 临床适应症、 临床适应症、用药人群 临床用药周期 已有相关安全性信息 技术、 技术、经济可行性等等
2010-11-4
相关动物 给药途径 剂量 毒代动力学——药代研究在毒理学研究的延伸 药代研究在毒理学研究的延伸 毒代动力学 阶段性——以不同给药期限的长期毒性研究来 以不同给药期限的长期毒性研究来 阶段性 分别支持药物进入Ⅰ 期或Ⅲ 分别支持药物进入Ⅰ 期、Ⅱ期或Ⅲ期临床试验 （生产） 生产）
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对免疫功能的影响
对脾抗体形成细胞（PFC）的影响（ 对脾抗体形成细胞（PFC）的影响（体液免疫功能 HMI） HMI）——溶血空斑试验 溶血空斑试验 对小鼠迟发性变态反应的影响（DTH，细胞免疫功能 对小鼠迟发性变态反应的影响（DTH， CMI） 放免/DNFB CMI）——放免/DNFB二硝基氟苯 放免/DNFB二硝基氟苯 淋巴细胞增殖试验：有丝分裂原（PHA，ConA， LPS， 淋巴细胞增殖试验：有丝分裂原（PHA，ConA， LPS， PWM） PWM）刺激成淋巴细胞化作用 NK细胞活性测定：乳酸脱氢酶（LDH） NK细胞活性测定：乳酸脱氢酶（LDH）释放法 细胞活性测定
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一般药理研究的特殊情况
追加的 补充的 可免做的
2010-11-4
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药代动力学研究
药物在体内的处置， 药物在体内的处置，ADME的过程及特点 的过程及特点 吸收（ 吸收（Absorption） ） 分布（ 分布（Distribution） ） 代谢（ 代谢（Metabolism） ） 排泄（ 排泄（Excretion） ）
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药代动力学研究
动物 剂量 多次给药
药代动力学研究 组织分布研究
生物样本的药物测定方法
色谱法 放射性核素标记法 免疫学方法 微生物学方法
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药代动力学研究
方法学确证
选择性 灵敏度 准确度 精密度 重现性 稳定性 标准曲线——质控样品 标准曲线 质控样品
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急性毒性研究试验方法
最大耐受量法 最大耐受量法 最大给药量法 半数致死量（ＬＤ５０）法 半数致死量（ＬＤ５０） （ＬＤ５０ 固定剂量法 上下法（阶梯法，序贯法） 上下法（阶梯法，序贯法） 近似致死剂量法 累积剂量设计法（金字塔法） 累积剂量设计法（金字塔法）
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长期毒性研究 长期毒性研究
空白、溶剂、阳性对照 空白、溶剂、 S9代谢激活 代谢激活
啮齿动物（小鼠） 啮齿动物（小鼠）微核试验
阴性及阳性对照
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生殖毒性研究
一般生殖毒性试验 Ⅰ段 一般生殖毒性试验
雌性受孕、分娩、活胎与死胎、外观、 雌性受孕、分娩、活胎与死胎、外观、骨骼与内脏等 雄性生育能力
致畸敏感期毒性试验 Ⅱ段 致畸敏感期毒性试验 胚胎毒性和潜在的致畸性 围产期毒性试验 Ⅲ段 围产期毒性试验 子代动物
非临床安全性评价的主要不同
生物制品
科学的， case-by-case” 1. 科学的，“case-by-case 的
2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.
小分子化合物
大多数品种的研究内容相似 通过代谢来选择相关动物 要求采用啮齿和非啮齿类动 物进行试验 通常没有免疫原性 要求进行遗传毒性研究 要求进行代谢研究 要求进行两年的致癌性试验 有仿制品
2010-11-4
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致癌性研究
创新药 短期致癌试验
哺乳动物培养细胞恶性转化试验 小鼠肿瘤诱发试验
长期致癌试验
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药物依赖性研究
具有精神神经作用的药物需要提供 身体依赖性试 镇痛药、 镇痛药、镇静催眠药 催促试验 诱导试验 自然戒断试验或替代试验 精神依赖性试验 自身给药
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CASE（评价） CASE（评价） 研究内容（重点） 研究内容（重点） 研究阶段性 试验设计 结果评价
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药理学研究
主要药效学研究
体内和体外两种以上实验方法， 体内和体外两种以上实验方法，其中一种必须 是整体的正常动物或模型动物 空白对照及已知阳性药物对照 作用机制研究 作用机制研究
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支持临床疗程超过2 周的药物II 期和III 支持临床疗程超过 周的药物 期和 期临床试验所需动 物长期毒性研究的最短给药期限
Hale Waihona Puke 2010-11-421
检测指标
常规指标（一般症状、体重、摄食量） 常规指标（一般症状、体重、摄食量） 血液学指标 ：10项 项 血液生化学指标 ：12项（非啮齿类 项） 项 非啮齿类16项 尿液分析指标： 项 非啮齿类） 尿液分析指标：9项（非啮齿类） 体温、血压、呼吸、心电图及眼科检查（ 齿类） 体温、血压、呼吸、心电图及眼科检查（非啮 齿类） 组织病理学检查 脏器系数： 项 脏器系数：12项 组织病理学检查： 项 非啮齿类33项 组织病理学检查：30项（非啮齿类 项） 恢复期
设计思路 通过药理作用来选择相关动物 可采用一种动物 免疫原性非常重要 遗传毒性通常不要求 代谢研究通常不要求 两年的致癌性试验通常不要求 没有仿制品？ 没有仿制品？
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2010-11-4
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经皮给药
豚鼠最大化试验（ 豚鼠最大化试验（GPMT） ） Buehler试验（BT） 试验（ ） 试验
吸入给药
豚鼠吸入诱导 刺激试验
皮肤光毒性试验 皮肤光过敏性试验 阳性和阴性对照
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溶血性
体外试管法（肉眼观察） 体外试管法（肉眼观察） 分光光度法 阴性对照 阳性对照（视情况） 阳性对照（视情况）
主要药代动力学参数
血药浓度－时间曲线下面积（ 血药浓度－时间曲线下面积（AUC） ） 半衰期（ 半衰期（t1/2） ） 吸收速率常数（ ） 吸收速率常数（Ka） 消除速率常数（ ） 消除速率常数（Ke） 峰浓度（ 峰浓度（Cmax） ） 达峰时间（ 达峰时间（Tmax） ） 表观分布容积（ ） 表观分布容积（Vd） 清除率（ ） 清除率（CL） 生物利用度（ ） 生物利用度（F）
最小毒性反应剂量 最大耐受量（ ）：Maximal Tolerance Dose 最大耐受量（MTD）： ）： 最小致死剂量（ ）：Minimal Lethal Dose 最小致死剂量（MLD）： ）： 半数致死量（ ）：Median Lethal Dose 半数致死量（LD50）： ）：