沉积物特殊功能微生物生物量的测定
（1）好氧微生物生物量测定
硝酸盐细菌、亚硝酸盐细菌、硫化细菌采用液体培养基。
1）液体培养基培养方法
称取10g沉积物样品于500mL三角瓶中，然后加入90mL无菌水，塞紧瓶塞；将三角瓶放在振荡机上振荡10min，达到混匀的目的；取1mL到装有9mL 稀释液的试管中，即稀释了十倍，根据土壤微生物的估计，稀释到合适的数量级。
选择5个连续的稀释度进行接种培养，每管3～5个重复。
根据培养微生物的生理特点，培养一定时间后，检测微生物在每个试管中的生长状况，根据试管中是否有待测微生物生长或根据指示剂的反应，确定数量指标，通过查表得出近似值。
稀释法计算要求在稀释系列中稀释度最大的所以重复必须没有微生物生长。
计算公式：菌数/g干土= 数量指标第一位稀释倍数×近似值/干土%
2）固体培养基培养方法
悬液的制备：取新鲜土壤样品10g，倒入装有100mL灭菌水的250mL容量瓶中，振荡10～20min后，即得到悬浮液母液（稀释10倍）。
从母液中取1mL 加入装有9mL灭菌水的试管，即得到稀释10倍的稀释液，依次类推，就可获得不同稀释度的悬液。
平板接种：先把45～50℃灭菌好的培养基倒入培养皿，每个培养皿倒15～20mL培养基，培养基过少容易在涂抹悬液时被刮刀刮破或失去水分后干掉。
在培养皿上标记好培养基类型、样品编号、稀释浓度和抗生素类型等。
培养基冷却凝固后在培养基表面加入1滴（0.05mL）稀释液，用刮刀轻轻的将接种液体涂抹均匀。
接种好的平板倒过来放进恒温箱培养，一般细菌30～32℃培养2～3d，真菌、放线菌28℃培养5～7d，便可得到明显的菌落。
计算公式：菌数/g干土=稀释倍数×菌落平均数×20/干土%
（2）厌氧微生物生物量测定
硝酸盐还原菌、硫酸盐还原菌（SRB）采用液体培养基，无机磷解磷细菌、有机磷解磷细菌、亚硝酸盐还原菌、铁还原菌采用固体培养基。
液体培养基接种方法同好氧微生物液体培养基接种方法，但要利用焦性没食子酸在碱性溶液中能吸收游离氧气，创造厌氧条件，具体方法如下：每克焦性没食子酸在过量碱液中能吸收100mL空气中的氧。
先加入焦性没食子酸若干克，然后按焦性没食子酸/NaOH=1:10（W/V）加入10% NaOH，立即将试管培养物和加热褪色后的美蓝氧化还原指示剂放入真空干燥器中，盖紧密封后置于30℃培养。
美蓝氧化还原指示剂配方：0.006mol/L NaOH，0.015% 美蓝溶液，0.6% 葡萄糖溶液等量混合，加热使美蓝褪色后迅速放入厌氧培养容器中。
固体培养基采用平板夹层厌氧法：
先把45～50℃灭菌好的培养基倒入培养皿，每个培养皿倒15～20mL培养基。
在培养皿上标记好培养基类型、样品编号、稀释浓度和抗生素类型等。
培养基冷却凝固后在培养基表面加入1滴（0.05mL）稀释液，用刮刀轻轻的将接种液体涂抹均匀。
然后再把45～50℃灭菌好的培养基倒入培养皿，每个培养皿倒15～20mL培养基。
接种好的平板倒过来放进恒温箱培养。
厌氧微生物液体培养基和固体培养基的计算方法分别与好氧微生物液体培养基和固体培养基的计算公式相同。
（3）特殊功能微生物培养基和相关试剂配方及检测方法
1）液体培养基
①亚硝酸细菌培养基：
MnSO4·4H2O 0.01g NaH2PO40.25g
CaCO3 5.0g K2HPO40.75g
MgSO4·7H2O 0.5g 蒸馏水1000mL
(NH4)2SO4 2.0g pH 7.2
培养2周后，取培养液用格里斯试剂检测亚硝酸是否存在，呈红色表明亚硝酸存在，有亚硝化作用。
②硝酸盐细菌培养基：
NaH2PO40.25g MgSO4·7H2O 0.03g
K2HPO40.75g MnSO4·4H2O 0.01g
NaNO2 1.0g 蒸馏水1000mL
Na2CO3 1.0g pH 7.2
培养两周后吸取0.4mL培养液至白瓷显色板上，滴加0.2mL氨基磺酸铵溶液，反应5分钟（紧接着滴加格利斯试剂，如果不出现粉红色，说明NO2-已被彻底除掉）；然后滴加0.2mL二苯胺溶液，再加2滴浓H2SO4，反应10分钟左右，若显蓝色，说明培养液中存在NO3-，即该试管中存在硝酸盐细菌[98]。
③硝酸盐还原菌：
柠檬酸钠 5.0g KH2PO4 1.0g
KNO3 2.0g 蒸馏水1000mL
K2HPO4 1.0g pH 7.2～7.5
MgSO4·7H2O 0.2g
检测是否存在亚硝酸根和氨（利用格里斯试剂），只要有存在其一，就表明有反硝化作用，若格里斯试剂检测表明没有亚硝酸根存在，再用二苯胺试剂检测有无硝酸根存在，若也呈负反应，表明硝酸根直接被还原为NH3，有较强的反硝化作用。
④硫化细菌培养基：
Na2S2O3·5H2O 5.0g NH4Cl 0.1g
NaHCO3 1.0g MgCl20.1g
NaH2PO40.2g 蒸馏水1000mL
接入土壤悬液，培养20天左右后，加入1% BaCl2溶液，若有白色沉淀出现则表明有硫化作用。
⑤硫酸盐还原菌（SRB）：
KH2PO40.5g NH4Cl 1.0g
Na2SO40.5g CaCl2·2H2O 0.1g
MgSO4·7H2O 2.0g 乳酸钠（或80%3.5ml）3.5g
酵母膏 1.0g 硫酸亚铁铵0.3g
Vc（抗坏血酸）0.1g pH 7.0-7.4
蒸馏水1000mL
在30℃左右培养21天，若试管中有黑色沉淀生成并伴有硫化氢臭味，说明该试管中存在硫酸盐还原菌。
2）固体培养基
①亚硝酸盐还原菌：
葡萄糖 3.0g NaNO20.3g
KCl 0.05g 蒸馏水1000mL
K2HPO40.1g pH 7.0
MgSO40.05g FeSO40.001g
琼脂粉 1.5g
②无机磷细菌
葡萄糖10g 酵母粉0.5g
无水CaCl20.1g MgSO4·7H2O 0.3g
蒸馏水1000mL 琼脂粉20g
③有机磷细菌：
牛肉膏3g 琼脂粉15g
蛋白胨10g NaCl 5g
蒸馏水1000mL pH 7.0
④铁还原菌：
琼脂粉15.0g NaHCO3 2.5g
NH4Cl 1.5g KH2PO40.6g
KCl 0.1g Vitamins混合液10mL
微量元素混合液10.0mL 乙酸钠（无水） 1.5g
无定型Fe(OH)350mmol/L 刃天青（0.1%）1.0mL
过滤后湖水1000mL pH 7.0
3）相关试剂配方
①格里斯试剂：用于特征检验亚硝酸根，在水质和食品快速检测领域非常重要，配制方法法：（1）称取0.5g对氨基苯磺酸，溶于50mL 30% 的乙酸中（加热条件下），存于棕色瓶。
（2）称取0.4g 1-萘酚于100mL去离子水中，加热沸腾后，倒出上清液，并加入6mL 80% 的乙酸，储存备用。
使用时两溶液按体积1:1混合即可。
②二苯胺试剂：称取1.0g二苯胺，溶于20mL去离子水中，然后缓缓加入100mL浓硫酸，储存在棕色瓶中。
③氨基磺酸铵试剂：称取氨基磺酸铵0.2g，溶解到1000mL去离子水中，储存到玻璃瓶中备用。
④BaCl2溶液：称取10g BaCl2溶于500mL去离子水中。