海洋鱼皮胶原低聚肽对人体抗氧化作用研究海洋鱼皮胶原低聚肽对人体抗氧化作用研究【摘要】目的探讨口服海洋鱼皮胶原肽对人体的抗氧化作用。
方法选择年龄在45~65岁的身体健康志愿者100人，分别随机分为试验组和对照组（各50例），进行口服抗氧化功能试验。
受试者每天摄入海洋鱼皮胶原肽2.7 g，连续90 d。
在试验开始前和试验后分别测定血清抗氧化指标，包括超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)，以及测定血常规、大小便常规和血生化指标，并在试验的前中后期调查受试者疲劳感、烦躁、睡眠、干涩等不适症状的变化。
结果健康受试者口服海洋鱼皮胶原肽后，血清SOD的水平由（78.38±18.94）U/ml增加至（80.99±19.86）U/ml，前后对比差异无统计学意义（P>0.05），与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）；血清GSH-Px的水平由（79.03±15.12）U/ml增至（89.95±14.16）U/ml，自身对照及组间对照差异有统计学意义（均P<0.01）；血清MDA的水平由（9.46±3.18）降至（6.87±3.57），自身对照及组间对照差异有统计学意义（均P<0.01）。
对照组受试者3项指标在试验前后差异均无统计学意义(均P>0.05)。
口服海洋鱼皮胶原肽受试者健忘、腰酸膝软等不适症状较对照组有明显改善，并且其症状积分在试验前、中、结束时均的逐渐降低,试验结束时的症状积分与试验前相比有统计学意义（P<0.05）。
口服海洋鱼皮胶原肽受试者血常规、大小便常规和血生化检查结果均无明显异常，亦未见过敏反应。
结论口服海洋鱼皮胶原肽具有抗氧化作用，并有助于改善疲劳感、烦躁、睡眠、干涩等不适症状。
海洋鱼皮胶原低聚肽是以海洋三文鱼皮为原料，利用生物酶解技术制备的小分子蛋白质，其平均分子量小于1000D[1]。
研究发现，海洋鱼皮胶原低聚肽具有多种生理调节功能，如改善皮肤水分、祛除黄褐斑、促进伤口愈合、抗皮肤老化、降血脂等[1~4]，关于海洋鱼皮胶原低聚肽的抗氧化作用的研究和报道也很多，且主要集中在体外试验和动物试验[1,4~7]，但其在人体内的抗氧化作用如何尚未见报道。
为更有利于以海洋鱼皮胶原低聚肽为原料进行营养与功能食品的开发和利用，进行关于海洋鱼皮胶原肽的人体试验研究，结果报告如下。
1 对象与方法1.1 一般资料按自愿原则选择45~65岁，身体健康状况良好，无明显脑、心、肝、肺、肾、血液疾患，无长期服药史，志愿受试保证配合的人群。
排除标准如下：妊娠或哺乳期妇女，对本保健食品过敏者；合并有心、肝、肾和造血系统等严重疾病患者；短期内服用与受试功能有关的物品，影响到对结果的判断者；不符合纳入标准，未按规定食用受试物，无法判定功效或资料不全影响功效或安全性判断者。
所有受试对象均本着知情同意的原则，并经中国中医科学院伦理委员会审批通过。
1.2 试验制剂研究使用的海洋鱼皮胶原肽（MCP）由北京中食海氏生物技术有限公司提供，是以深海鲑鱼的鱼皮为原料，经过清洗、复合偶联酶解、酶失活、脱脂、多级膜分离、渗透浓缩、脱色、干燥等工艺制备而成。
分子质量范围主要在100～860Da之间。
1.3 主要仪器和试剂 MEK-6318K型血球计数仪（日本光电工业株式会社）；MIDIRON尿十项分析仪（德国宝灵曼公司）；RA1000全自动生化分析仪（美国泰而康公司）；AMS FT-2型分光光度计（意大利美森公司）；生化试剂盒全部由中生公司提供。
1.4 试验设计与对象分组抗氧化试验选择受试者100例，根据超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）的水平，按完全随机设计的方法分为试验组和对照组（每组各50人）。
采用自身及组间两种对照形式。
试验组人员每人均口服海洋鱼皮胶原肽2.7g/d，时间为90 d。
对照组为空白对照。
受试者在试验期间保持平日的生活和饮食习惯，并停止使用与试验目的有关的药物或保健食品。
1.5观察指标及其判定1.5.1 安全性指标①红细胞计数、白细胞计数、血红蛋白、尿常规、大便常规检查；②生化指标测定，包括血清白蛋白、总蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素、肌酐、血糖、总胆固醇、甘油三酯；③腹部B型超声、心电图、X线胸部检查；④过敏及不良反应观察。
1.5.2 功效性指标①一般状况指标：精神、睡眠、饮食、大小便、血压等。
详细询问病史，了解受试者饮食情况，观察主要临床症状（疲劳感、烦躁、睡眠等）。
按症状轻重（重症3分、中度2分、轻症1分）在试验前后统计积分值，并就其主要症状改善（每一症状改善2分显效，改善1分为有效），计算改善率；②血清抗氧化指标检测，包括SOD、GSH-Px、MDA。
在试验前后，分别采集受试者静脉血，检测上述三项指标并计算试验前后各项指标的变化值及下降或升高的百分率。
1.5.3 结果判定有效：超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、丙二醛含量三项实验中任一项实验结果阳性，即试验前后自身比较和试验后组间比较有统计学意义，可判定该受试样品具有抗氧化功能作用。
无效：超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、丙二醛含量三项实验中无一项结果阳性。
1.6 统计学方法采用STATE 6.0统计软件计算分析数据。
自身对照资料的比较采用配对t检验。
2组均数比较先进行方差齐性检验，对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态分布、方差齐性后，用转换的数据进行t检验；若转换数据仍不能满足正态分布、方差齐性要求，改用t´检验或秩和检验；但变异系数（CV）太大如（CV>50%）的资料采用秩和检验。
功效指标的比较采用χ2检验。
以P值＜0.05为有统计学意义。
2 结果2.1 受试对象一般状况试验组和对照组共观察受试者100例（每组50例），观察组男性11例，女性39例，年龄最小45岁，最大65岁，平均56.84±5.55岁。
对照组男性8例，女性42例，年龄最小47岁，最大65岁，平均55.14±5.00岁。
试验组和对照组SOD、GSH-PX、MDA在试验前无明显差异（tSOD=0.153,t GSH-PX =0.691,tMDA=0.047,均P>0.05），2组具有可比性，见表1。
2.2 血清超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、丙二醛的含量变化与试验前相比，试验后试验组超氧化物歧化酶升高2.62±18.48 U/ml，升高百分率3.34%，自身对照与组间对照差异无统计学意义（t自身 =0.668, t组间 =0.983，均P>0.05）。
谷胱甘肽过氧化物酶升高10.93±19.74U/ml，升高百分率13.83%，自身对照及组间对照差异有统计学意义（t自身 =3.727, t组间=2.911，均P<0.01）。
丙二醛降低2.59±3.67nmol/ml，下降百分率27.38%，自身对照与组间对照差异均有统计学意义（t自身 =3.866, t组间 =3.094，均P<0.01）。
对照组超氧化物歧化酶升高0.26±8.77U/ml，谷胱甘肽过氧化物酶升高0.56±13.74U/ml，丙二醛降低0.34±3.27nmol/ml。
对照组在试验前后3项指标变化均不明显（表1）。
2.4 口服海洋鱼皮胶原肽对血生化指标和血、大小便常规的影响试验组和对照组在试验前后血生化指标均无明显变化（表4）。
大小便常规检查结果正常。
腹部B超、心电图、X线胸部透视检查结果均在正常范围内，试验前后血压变化不明显。
口服海洋鱼皮胶原低聚肽后，也未见过敏及其它不良反应。
3 讨论3.1海洋鱼皮胶原肽在人体内应用是安全的该研究中的受试物海洋鱼皮胶原肽是利用现代生物酶解方法提取制备的小分子物质，王璐等人的毒理学研究证实了海洋鱼皮胶原低聚肽的安全性[8~10]。
以前的动物试验和人体试验未发现与其有关的不良反应[2,11]。
按照规定的剂量口服海洋鱼皮胶原肽90 d，未对受试者的血生化指标和血、大小便常规等指标造成不良影响，再一次证实了海洋鱼皮胶原肽的安全性。
3.2海洋鱼皮胶原肽在人体内的抗氧化作用及机制与在动物体内不尽相同通过受试物引起受试者血清SOD、GSH-Px和MDA水平的变化，判断受试物的抗氧化作用，已被作为规范性方法应用[12]。
试验前，试验组和对照组的SOD、GSH-Px和MDA 3者的水平均没有显著性差异，而试验后对照组SOD、GSH-Px和MDA 3项指标与试验前相比均没有显著性差异。
而试验组试验前后比较，而GSH-Px水平明显上升，MDA水平明显下降，两项指标在统计学上均有显著性差异，并且试验后试验组与对照组比较也有显著性差异。
而SOD组内与组间比较均无显著性差异。
根据抗氧化作用有效性的判定原则，可以认为海洋鱼皮胶原低聚肽具有抗氧化作用。
但海洋鱼皮胶原低聚肽抗氧化功能的人体试验与王军波、裴新荣等报道的动物试验在具体抗氧化指标的结果方面有一定的差异。
动物试验的结果显示[1,4]，海洋鱼皮胶原低聚肽可以使大鼠血清SOD水平明显升高，在较高剂量时可使用MDA水平明显下降，但对大鼠血清GSH-Px没有影响。
可见海洋鱼皮胶原低聚肽在人体内和动物体内都具有抗氧化作用，但在具体的抗氧化指标方面可能存在一定的差异。
3.3海洋鱼皮胶原肽在人体内表现出多个方面的健康改善作用以前国内外关于胶原蛋白和胶原肽作用的报道主要集中在对于皮肤与肌腱、骨骼等的保护和改善作用[13~16]。
研究发现，每天食用一定量的海洋鱼皮胶原低聚肽可以明显改善食用者的疲劳感、烦躁、睡眠、健忘、腰酸膝软等症状。
在之前的试验中也有类似的观察结果[2]。
由此可以看出，海洋鱼皮胶原肽对人体的健康作用是多个方面的。
这一方面与胶原蛋白在人体内分布广泛、胶原肽可以促进身体多个组织中胶原蛋白的合成有关[17]，另一方面可能与海洋鱼皮胶原肽中含有某些活性成分（如抗氧化肽、抗疲劳肽、催眠肽等）有关[18,19]。
另外，海洋鱼皮胶原低聚肽本身属于小分子易吸收的氮类营养成分，有利于改善机体的营养状况，可能这也是海洋鱼皮胶原低聚肽具有多方面的身体改善作用的原因之一。
研究过程中分别在试验第30 d、第60 d和试验结束时调查受试者的症状变化情况。
研究发现在3个试验阶段的症状积分均比试验前显著降低，并且随着试验时间的延长，症状积分呈逐渐降低的趋势；试验组3个阶段的症状积分均显著低于对照组。
说明随着食用海洋鱼皮胶原低聚肽的时间延长，疲劳感、烦躁、睡眠、健忘、腰酸膝软等不适症状会逐步得到改善。
3.4海洋鱼皮胶原肽抗氧化肽段的分离提纯将更有利于其抗氧化效果的研究与应用海洋鱼皮胶原肽是将海洋鱼皮蛋白质经生物活性酶水解后获得的多种小肽的混合物，其抗氧化功能可能与其中的某些抗氧化组分有关。