• 液体食品．如牛奶、果汁、菜汁等通常不需要前 处理．可直接取样检测。检验操作几十分钟至几 个小时内即可完成，净化和浓缩可进一步提高检 出限。
• 单克隆抗体可通过用毒素载体蛋白结合物免疫小 白鼠等．之后建立杂交瘤细胞系来生产。单克隆 抗体虽然生产成本高、技术复杂，但其特性稳定， 交叉反应少，并可大批量生产，在生产商品试剂 盒上很有价值。 ·
食品农药残留免疫学检测技术的 应用
自从10多年前开始尝试把免疫学技术应用于食品农 药残留检测以来，食品农药残留免疫学检测技术 研究工作取得了极大的进展，已有大量检测农药 (杀菌剂、除草剂、杀虫剂)的研究文献报道。
• 在美国有关官方机构，如环境保护署(EFA)，农业 部食品安全检验司(PSIS—USDA)和AOAC已制定厂 农药残留免疫学检验商品试剂盒评定和认可的建 议准则。
• 随着农药残留免疫学检测技术不断被完善和商品 化(生产出试剂盒)，免疫学检测技术会成为食品农 药残留和食品安全质量控制的有效快速的检测手 段。
• 10多年前，一些研究者开始尝试把放射免 疫和免疫酶技术用于食品农药残留检测， 并取得极大成功。
• 其中应用最多的是固相放射免疫饱和分析 技术和酶联免疫吸附检测技术。
• 在这些检测技术中其核心反应都是抗原抗 体反应。所谓抗原是指一切具有抗原性的 物质：
• 抗体(又称免疫球蛋白)，是由抗原刺激机体 而产生的特异性球蛋白。
农药免疫学检测技术的原理
• 农药免疫学检测应用最多的两种固相免疫技术是 固相放射免疫技术和酶联免疫吸附检测技术。
• 固相放射免疫技术是采用标记抗原与未知抗原竞 争限定量的固相抗体结合位点，然后通过测定抗 原一抗体结合物中放射性强度的改变，确定未知 抗原的存在及含量。
酶联免疫（ ELISA）
• ELISA是通过在合适的载体上，酶标限定量 抗原与未知抗原竞争固相抗体结合位点或 固相抗原与未知抗原竞争限定量的标记抗 体结合位点，形成抗体复合物。在一定底 物参与下，复合物上的酶催化底物，使其 水解、氧化或还原成另一种带色物质。由 于酶的降解底物与显色是成正比的，通过 眼观或分光光度计测定，从而确定是否存 在未知抗原或含量。
检测的食品范围很广．包括水果、蔬菜、饮料、啤 酒、葡萄酒、鱼、肉、猪油、奶、植物油、蜂蜜、 豆类、谷物及谷物加工产品等。
• 该方法不仅可用来定性筛选，而且也可以用来定 量分析，其检测水平在很多农药可达到纳克(ng)甚 至皮克(pg)水平。
• 另外一些检测的商品试剂盒也研制开发出来，并 可用于食品中一些农药的残留检测。
种农药属于这类物质，不具有免疫原
性．因此农药残留的免疫学方法检测要较
医学等领域中致病微生物等完全抗原的免酶联免疫，首先要把农药与载体 蛋白连接起来，形成农药一载体蛋白结合 物免疫原，才可用来免疫动物制备抗体。 因此能否合成稳定、具有良好免疫原性的 农药一载体蛋白结合物是整个农药残留免 疫学检测技术研究的关键。
• 除草剂类农药残留免疫学检测技术研究的一些文 献报道(国内尚未见有关的研究报道)，简述了方法 类型、检出限、抗体类型、检测食品范围和检测 农药种类等有关情况，另外还列出了一些已获得 应用的商品试剂盒。
• 农药残留免疫学检测技术与传统的色谱、质谱法 相比所需设备简单(如ELISA方法只需一台酶标仪)， 或者不需检测设备．加样后直接进行眼观判定即 可，适合于现场应用，前处理程序简化(不需净化)， 检验快速，检测容量大．检验成本低。
免疫学检测方法
• 免疫学检测方法主要包括酶联免疫吸附检 测和放射免疫技术,该方面的研究取得了长 足的发展。由于该方法操作简单，前处理
简化，检测快速、准确、敏感，检验成本
低，检测容量大，可同时进行大批量样品 检测。因此．具有潜在的广泛应用价值。
• 免疫学检测技术是近几年发展起来的新技 术，主要包括放射免疫技术、免疫酶技术、 免疫荧光技术和免疫电镜技术等，现已广 泛地应用于各个领域中。
• 作为抗原(完全抗原)需要包括两个方面的特 性：免疫原性和反应原性。
• 免疫原性是指能够刺激机体产生抗体或诱 导机体形成免疫回答反应的特性。
• 反应原性是指能够与其诱导产生的抗体或 致敏淋巴细胞发生反应的特性。完全抗原 是一些大分子物质(分子量大于l万)，如蛋白 质等。
• 如果一种抗原只有反应原性而没有免疫原 性则称为不完全抗原(半抗原)，它通常是一 些小分子物质(分子量小于1000)，必须与其 它大分子物质结合后才具有免疫原性。各
• 但由于放射免疫技术涉及放射材料的使用 和经常制备放射标记物，检测设备也比较 昂贵，所以越来越多地被较为安全、简便 的ELISA方法取代。
• 在利用免疫技术进行农药定量检测时，需 要制备标准曲线，之后根据制备好的标准 曲线即可对农药残留进行定量。
免疫原的合成及酶标抗原的制备
• 由于农药属半抗原，不具有免疫原性，因此在 制备抗体前首先要合成农药一载体蛋白结合物免 疫酶原。由于各种农药分子结构不同．各研究者 所采用的方法也不一样，但在绝大部分情况下由 于农药分子不具备连接反应基团，农药分子首先 要经过衍生，之后通过连接物与载体蛋白连接。
抗农药抗体的制备
• 抗农药的多克隆抗体可用农药一载体蛋白 结合物直接免疫兔子等动物．之后每间隔 一个月加强免疫．一股6个月左右可获得满 意效价的抗血清。如果结合物免疫原性较 差，则需要甚至长达1年的免疫才能获得满 意效价的抗血清。
• 多克隆抗体虽然具有生产成本低、生产方法简便 等特点，但由于其特性随动物种类及个体差异而 有变化，而且生产数量也受限制，因此不利于生 产大批量商品试剂盒。
• 常用的裁体蛋白有牛血清白蛋白、人血清白蛋白 和卵清蛋白等。
农药衍生和连接的化学反应条件
• 不能导致半抗原分子结构发生明显改变，否则抗 原性将发生变化。
• 另外，制备好的半抗原结合物在免疫动物前，要 测定结合物中半抗原数目．因为结合中半抗原分 子数目太多或太少，诱发抗体的能力都很差。 用 于合成农药一载体蛋白结合物的方法，在不引起 酶失活情况下通常都可用来连接酶与农药分子， 制备酶标农药抗原。