・检验技术・检测早期梅毒螺旋体感染的４种方法比较ＣｏｍｐａｒｉｓｍｏｆＦｏｕｒＫｉｎｄｓｏｆＭｅｔｈｏｄｓｉｎＤｅｔｅｃｔｉｏｎｆｏｒＥａｒｌｙＳｙｐｈｉｌｉｓＩｎｆｅｃｔｉｏｎ张永乐，章松平，马兰，时代强，郑爱媚ＺＨＡＮＧＹｏｎｇ—ｌｅ。
ＺＨＡＮＧＳｏｎｇ・ｐｉｎｇ，ＭＡＩ＿ａｍ，ＳＨＩＤａｉ—ｑｉａｎｇ．ＺＨＥＮＡｉ—ｍｅｉ［摘要】目的探讨检测早期梅毒螺旋体感染的最适方法。
方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（ＦＱ—ＰＣＲ）、梅毒螺旋体血凝试验（ＴＰＨＡ）、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（ＴＰ．ＥＬＩＳＡ）、快速血清反应（ＲＰＲ）法对１０２例早期梅毒患者、３０例非梅毒患者的分泌物、血清进行梅毒螺旋体感染（１１Ｐ）检测，比较４种检测法灵敏度及特异性。
结果１０２例早期梅毒患者ＦＱ．ＰＣＲ检出９２例（９０．２０％），ＴＰＨＡ检出８６例（８４．３１％），ＴＰ－ＥＬＩＳＡ检出８８例（８６．２７％），ＲＰＲ检出７０例（６８．６％）。
３０例非梅毒患者ＦＱ．ＰＣＲ和ＴＰＨＡ检测均（一），ＴＰ－ＥＬＩＳＡ检出１例（＋），ＲＰＲ检出６例（＋）。
结论早期梅毒患者诊断首选ＦＱ．ＰＣＲ进行分泌物或溃疡创面渗出物检测ＴＰ．ＤＮＡ，其次选用ＴＰＨＡ和ＴＰ—ＥＬＩＳＡ进行血清学检测，ＲＰＲ在梅毒感染早期检出率较低，易出现漏栓现象。
［关键词］梅毒螺旋体；实时荧光定量聚合酶链反应；血凝试验；酶联免疫吸附试验；快速血清反应［中图分类号］Ｒ７５９．１［文献标识码】Ｂ［文章编号］１００１－７０８９（２００８）０２一０１１８—０２为了提高早期梅毒的诊断率，笔者采用４种不同方法对１０２例早期梅毒患者和３０例对照者进行临床检测比较分析，结果报告如下。
１材料和方法１．１病例选择１０２例早期梅毒患者为２００６年２月一２００７年１月本院皮肤性病门诊就诊者，所选病例外生殖器均有典型硬下疳表现，且暗视野显微镜检查出梅毒螺旋体，经临床确诊为早期梅毒患者，其中男５２例，女５０例，平均年龄３０岁。
３０例对照者来源于本院２００７年１月～２００７年２月产科住院患者。
１．２试剂仪器ｒＱ．ＰＣＲ试剂购于中山大学达安基因股份有限公司，ＴＰＨＡ试剂为Ｅｔ本富士株式会社提供，ＴＰ・ＥＬＩＳＡ试剂购于广州中山生物，ＲＰＲ试剂购于兰州生物制品研究所；ＡＢｌ７９００核酸自动检测仪，美国ＢＩＯ．ＲＡＤ伯乐酶标仪，芬兰原装Ｐｒｏｌｉｎｅ移液器。
１．３方法１０２例患者和３０例对照者同时对其分泌物及血清采用ＦＱ．ＰＣＲ、ＴＰＨＡ、ｒＩ’Ｐ．ＥＬＩＳＡ、ＲＰＲ４种检测方法进行检测。
患者用无菌棉拭子取溃疡或糜烂部位分泌物，对照者取尿道口或阴道口分泌物，分别置于无菌试管备用。
同时采集全血２ｍＬ离心分离血清备用。
ＶＱ．ＰＣＲ检测向无菌棉拭子标本中加入１ｍＬ生理盐水振荡１ｒａｉｎ，转入１．５ｍＬ的离心管中，１３０００ｒ／ｒａｉｎ离心５ｒａｉｎ，弃上清，向沉淀物中加入核酸提取液５０灿振荡混匀５ｓ，１００℃干浴１０ｒａｉｎ，转入４。
Ｃ放置３０ｒａｉｎ，１３０００ｒ／ｒａｉｎ离心５ｒａｉｎ，取上清２斗Ｌ进行ＰＣＲ检测，扩增条件为９３。
Ｇ２ｒａｉｎ１个循环，９３℃４５ｓ、５５℃６０ｓ４０个循环。
血清ＴＰＨＡ、ＴＰ—ＥＬＩＳＡ、ＲＰＲ的检测严格按照试剂盒说明书进行操作。
Ｉ．４统计学处理采用ｘ２检验。
［作者单位】浙江中医药大学附属杭州市第六人民医院，浙江杭州３１００１４［作者简介】张永乐（１９７６一），男，陕西省安康市人，医学学士，主管检验师，从事临床分子诊断研究工作。
２结果２．１４种检测方法的结果ＲＰＲ检测检出率分别与ＦＱ－ＰＣＲ、ＴＰＨＡ、ＴＰ．ＥＬＩＳＡ３种检测法比较ｘ２值分别为１４．５ｌ、６．３４、９．１１，Ｐ均＜０．０５差异有统计学意义，而ｒＱ．ＰＣＲ、ＴＰＨＡ、ＴＰ・ＥＬＩＳＡ、３种方法检出率比较ｘ２＝１．６０８，Ｐ＞０．０５无统计学差异，见表ｌ。
２．２４种检测方法敏感性及特异性比较见表ｌ。
ＦＱ—ＰＣＲ的敏感性、特异性比其他３种检测法高，ＴＰＨＡ、ＴＰ．ＥＬＩＳＡ的敏感性、特异性比ＲＰＲ检测法高。
表１１０２例患者和３０例对照检查者４种检测结果比较例注：敏感性＝梅毒患者阳性例数／梅毒患者总的检测数，特异性＝非梅毒患者阴性数／非梅毒总数。
３讨论ＲＰＲ检测法是一种将牛心磷脂抗原结合在标准的活性炭上，因梅毒患者血清中含有抗类脂抗原的抗体（反应素），这种抗原与梅毒患者血清中反应素结合形成肉眼可见的凝集颗粒，通过观察是否有凝集颗粒来判断是否存在梅毒感染。
因白蛋白对胶体颗粒有保护作用，形成亲水薄膜，胶体颗粒受到保护失去吸附免疫球蛋白的作用，可能导致不能形成较大的凝集颗粒，血清中如果出现白蛋白多于球蛋白时将会出现假阴性反应，同时梅毒患者血清中抗类脂抗原的抗体产生在梅毒感染３～４周后才出现，在此前检测也可能出现假阴性反应。
这也正是早期梅毒患者ＲＰＲ阳性不高的主要原因，本文早期梅毒阳性率６８．６０％，与文献报道一致…。
同样在很多疾病过程中机体也会产生抗类脂抗原的抗体旧Ｊ，此时如果与牛心磷脂抗原结合也会出现凝集阳性反应，此时就需要排除相关疾病。
ＴＰＨＡ检测是间接血凝法测定人血清中梅毒螺旋体的特异性抗体，具有快速、敏感、特异强的特点，被称为梅毒的确诊实验旧Ｊ。
ＴＰ．ＥＬＩＳＡ为双抗原夹心法，同时检测ＩｇＭ／ＩｇＧ抗体，是近年来应用‘ｒＰ基因工程研制成功后建立的方法．灵敏度、特异性较高Ｈ１。
在梅毒感染早期ＩｇＭ抗体最早出现，所以ＴＰ．ＥＬＩＳＡ检出率要较ＴＰＨＡ和ＲＰＲ检出率要高，但是在ｌｇＭ尚未出现时也存在漏检现象。
ＩｇＧ出现较晚，一旦出现将可终身存在。
ＦＱ—ＰＣＲ（荧光定量ＰＣＲ）技术是近年来新兴技术¨Ｊ，其敏感度，特异性均较高，试剂成本较低、操作简单，标本（分泌物）留取无创伤，患者乐意接受，且结果报告迅速。
因在传统ＰＣＲ基础上加了荧光探针，无需电泳和紫外线观察，杜绝了产物污染的来源，有效的防止了假阳性的产生。
通过该实验我们可以看出，早期梅毒患者诊断首选ＦＱ—ＰＣＲ进行分泌物或溃疡创面渗出物检测ＴＰ—ＤＮＡ，其次选用ＴＰＨＡ和ＴＰ—ＥＬＩＳＡ进行血清学检测，ＲＰＲ在梅毒感染早期检出率较低，易出现漏检现象。
［参考文献】［１］郭兑山，郭津津，张劲东，等．梅毒螺旋体抗体ｉｇｃ酶联免疫吸附试验的建立［Ｊ］．中华皮肤科杂志，２００１，３４（３）：２２４—２２５．［２］宫晓红，张连萍，韩峰．早期梅毒实验室检测方法的评价［Ｊ］．实用医技杂志，２００７，１４（６）：７０９—７１０．［３］王芳，成海．梅毒螺旋体实验室检测技术［Ｊ］．中国皮肤性病学杂志．２００３，１７（２）：１３５—１３６．［４］Ｃ∞ｔｒｏＲ，ＰｒｉｅｔｏＥＳ，ＳａｎｔｏＩ，ｅｔａ１．ＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｍｅｎｚｙｍｅｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｔｅｃｈｎｉｑｕｅｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆａｎｔｉｂｐｄｉｅａａｇａｉｎｓｔＴｒｅｐｏｎｅｍａＰａｌｌｉｄｕｍ［Ｊ］．ＪＣｌｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００３，４１（１）：２５０—２５３，［５］任广睦，王英元．实时荧光定量ＰＣＲ技术的研究进展［Ｊ］．临床医药实践杂志，２００７。
１６（４）：２４３—２４５．［收稿日期］２００７－０７－３０［修回日期】２００７・１０－２５高频电灼联合干扰素、５一氟尿嘧啶治疗尖锐湿疣１６２例疗效观察祁淑英１临床资料１６２例患者均为女性，为２００４年９月一２００６年１月本科以外阴赘生物就诊者，详细询问病史，行妇科检查，取组织活检，病理确诊为“尖锐湿疣”。
年龄１７～５５岁，平均３６．７岁，发病部位大多数位于大小阴唇、舟状窝附近、阴道前庭、尿道口，其次为阴道壁、宫颈、肛周及直肠。
将１６２例患者随机分为治疗组、对照组各８ｌ例，两组患者在年龄、病情等方面具有可比性。
’１．２治疗方法两组均在月经结束３—５天，采用０．５％碘伏原液消毒病灶，２％利多卡因局麻，治疗组采用疣底部注射５．Ｆｕ（上海旭东制药有限公司生产）、疣体部位高频电烧灼，功率为３５—４０ｗ（从疣体中心至近皮肤处功率顺次由大到小逐渐调节），力求彻底消除湿疣组织，术后注射基因工程重组人ａ－２ｂ干扰素（商品名：安达芬，安徽安科医药科技有限公司生产）１００万Ｕ，隔日肌注１次，连续４周为１疗程。
对照组仅对疣体进行高频电烧灼。
术后两组患者均口服抗生素５天，保持外阴清洁，两组病人均在治疗时一次性去除所有病灶，术后每个月复查，共６个月。
如有复发则重复治疗。
１．３疗效判定标准ｕ剖治愈为病变全部消退，６个月内无新皮损出现。
复发为治疗后６个月内无再感染史，在原发皮损部位及其周边５Ｈｉｍ内出现新的疣体。
１．４统计学处理采用×２检验。
２结果２．１治疗结果见表１。
治疗组治愈率明显高于对照组（ｘ２＝９．９７，Ｐ＜０．０１）。
治疗组复发的８例患者经第２次治疗后均治愈；对照组复发的２４例中，１例高频电灼４次、６例高频电灼３次、１７例高频电灼２次后治愈。
２．２不良反应两组病例均有局部疼痛及轻度水肿。
治疗组使用干扰素当天有轻度发热，流鼻涕感冒症状，第２、３天逐渐减轻，以后无异常，未作特殊处理。
表１两组尖锐湿疣治疗效果比较例（％）３讨论尖锐湿疣是ＨＰＶ所致皮肤及黏膜感染引起的鳞状上皮增生性疣状病变，传统的治疗方法临床复发率较高。
笔者采用高频电灼治疗尖锐湿疣，探头可以直接接触疣体组织，电波能够产生瞬时高热，碳化了增生的疣组织，并破坏疣组织生长部位的皮肤或黏膜的基底部，从面破坏疣组织的生长；面干扰素能调节患者机体免疫功能，提高患者自身抗ＨＰＶ感染能力，防止ＨＰＶ微粒的重新感染及亚临床感染，限制ＨＰＶ病毒的复制，减慢病变部位细胞的分裂速度。
氟尿嘧啶是一种能够抑制细胞和选择性作用于代谢旺盛的细胞合成的抗代谢药物，通过免疫刺激作用抑制病毒复制，氟尿嘧啶单一用药时，起效较慢，去疣效果并不理想，但防止复发，其疗效是肯定的旧Ｊ。
本研究采用５－Ｆｕ基底部注射，达到了使病损局部药物高浓度持续作用的目的，从而使尖锐湿疣的复发率大大降低。
结合本研究结果，笔者认为，高频电配合干扰素、５．Ｆｕ治疗尖锐湿疣可明显提高治愈率，减少复发，值得推广。
［参考文献】［１］孙力，丁秋允，闫立．电灼术联合消疣灵治疗尿道口内尖锐湿疣［Ｊ］．中国皮肤性病学杂志，２００４，１８（８）：５０８．［２］晏洪波，刘辉，吴宁．氟尿嘧啶棉拭子预防尿道口尖锐湿疣复发［Ｊ］．中华皮肤科杂志，２０００，３３（３）：１９７．［中图分类号］Ｒ７５２．５＋３［文献标识码】Ｂ［文章编号】１００１—７０８９（２００８）０２一Ｏｌｌ９—０１【收稿日期］２００７－０６－２５［修回日期］２００７－０９－３０［作者单位】青海省人民医院妇科，青海西宁８１０００７。