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苯酚硫酸法测定多糖的含量

多糖浓度测定及标准曲线谭夕东
苯酚-硫酸法
1. 对照品的溶液的制备取干燥至恒重的无水葡萄糖0.1g,精密称定,置100ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取10ml,置100ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得。

供试品的溶液的制备精密量取本品50ml,置250ml量瓶中,加30%硫酸锌溶液5ml,在水浴中加热5分钟后,在振摇下立即加入亚铁氰化钾试液5ml,冷却后加水至刻度,摇匀,滤过,弃取初滤液,取续滤液25ml,置500ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得。

测定方法精密量取对照品溶液与供试品溶液各2ml,分别置10ml量瓶中,各加2%苯酚溶液0.5ml,硫酸5ml,摇匀,置水浴中加热15分钟,放冷,用水稀释至刻度,摇匀,照分光光度法测定。

2.标准曲线的绘制:
精密称取千燥恒重的葡萄糖100mg,用水溶解并稀释至100ml,备用。

精密吸取备用液10ml加水稀释至100ml定容,得葡萄糖标准液。

精密吸取标准液100、200、…700微升,分别置于试管内,各加水使成2ml,再各加5%苯酚试剂1.0ml,各管迅速滴加浓硫酸5.0ml,立刻摇匀。

沸水加热15分钟,迅速冷却,另取2ml水,同法操作加入试剂作空白对照.用紫外可见分光光度计在入=490nm测定吸光度。

以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程
海藻酸钠样品1g,用100mL蒸馏水溶解并定容。

壳聚糖溶液的配制:
①先将50mL冰醋酸溶于1000mL的蒸馏水中制成5%的乙酸水溶液1000mL待用。

②称取壳聚糖5g溶于500mL5%的乙酸水溶液中配成10g/L的壳聚糖乙酸溶液。

或精密称取壳聚糖40 mg于100 mL量瓶中,用0. 5 mol·L-1’醋酸溶解并定容。

几丁质不溶于水、稀酸、稀碱及绝大部分溶剂中,据目前所知,几丁质仅能溶于少数溶剂,如六氟异丙酮,六氟丙酮水合物、吡咯烷酮的氯化锂溶液,一些氯醇和浓酸等。

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