Medivet In House
Adipose Stem Cell Procedure Kit
Procedure Manual
脂肪干细胞套组
操作步骤
美联申德美联申德（（南通南通））进出口有限公司
操作要点
1. 所有操作步骤都要遵从无菌操作的原则，人员必须穿戴灭菌手套、口罩、头套
2. 开始进行操作之前，工作台必须先以70%酒精擦拭干净
3. 离心机的设定请遵守下列规范设定：Rotor →3, Acceleration →9和
Deceleration →1
4. 为避免离心机故障损坏，使用前请确保放置样本的离心管对侧，存有相同重量的离心管
5. 水浴槽请设定在37℃以及震荡设定钮设定到 3.5，而且使用前请提早预热20分钟
6. 使用前请确保药瓶与溶液混合均匀
注意事项
1. 脂肪干细胞增殖套组(ADIPOSE STEM CELL KIT)整盒需冷藏保存为宜
2. 其中药剂B液(vial B Medistem)特别需要冷冻保存
第一步骤‐ 准备富含血小板血浆(Platelet Rich Plasma, PRP)
(Platelet Rich Plasma, PRP) 富含血小板血浆含有大量的生长因子，而且取自于病患自身的血液，这些生长因子可以活化干细胞并且促进干细胞增殖。

操作如下：
1. 将三支ACD‐A试管装满5 ml血液，并且上下翻转混合8次。

2. 将试管以1000g (2500rpm)的条件离心4分钟。

3. 以微量滴管吸取三支试管的血浆层(上层)，置入15 ml试管中，吸取的过程中避免接近血
球层，每管可留下约5 mm高度的血浆，避免吸到血球。

4. 将装有血浆的15 ml试管放入离心机，以1000g (2500rpm)的条件离心8分钟，通常离心后
可见底部存有少量的血小板。

5. 以微量滴管将上层血浆抽出移除，留下约3 ml高度的血浆，接着将底层的血小板与剩下
的3 ml血浆混合均匀，这就是富含血小板血浆。

6. 以1 ml针筒抽取药剂G 0.5 ml，并加入富含血小板血浆之中，混合均匀。

经过大约5
– 15分钟活化后可见富含血小板血浆呈现果冻状。

当果冻状富含血小板血浆出现后，就可以暂时放置在室温中，若1 – 2小时后要使用富含血小板血浆时见到少量溶解，属于正常现象。

或者可放置在Medivet水浴槽37℃可加快活化作用。

第二步骤‐ 准备溶液
1. 以3 ml针筒，抽取2 ml注射用无菌蒸馏水加入药剂 B (vial B Medistem)，接着换新的针
筒抽取3 ml的药剂A(solution A)放入药剂B(solution B) ，混合均匀。

2. 以1 ml针筒，抽取0.5 ml的Gentamicin/Genoticin (40 mg/ml)放入药剂D (solution D)瓶中，
并且混合均匀。

3. 以10 ml针筒，抽取5.0ml的药剂D(solution D)放入药剂F(solution F)瓶，并且混合均匀。

第三步骤‐ 消化脂肪组织提取干细胞
1. 将脂肪组织放入灭菌样本瓶后，以灭菌尖剪刀剪碎脂肪组织剪至2 – 4 mm宽，此时脂
肪会呈现泥状。

2. 移除脂肪之外的其它组织，例如肌肉。

脂肪剪越碎，消化越好。

3. 将剪碎的脂肪组织倒入50 ml试管中。

4. 确认脂肪组织数量位于5 – 20 ml之间。

5. 以灭菌1 ml 针筒精准的抽取将药剂B 0.4 ml的溶液，抽取前先将药剂B先混合均匀。

6. 以3 ml 针筒抽取2.0 ml的药剂D放入脂肪组织瓶中。

7. 以20 ml 针筒抽取20ml 药剂A持续添加入脂肪组织试管中，加到40 ml高度。

8. 翻转试管，混合内容物，并且将试管放入已经预热到37℃的Medi‐bath水浴槽和震荡，震
荡设定钮设定3.5, 放置45分钟，每隔10 – 15分钟将试管取出翻转混合均匀一次。

9. 再以10 ml 针筒，抽取4.0 ml的药剂E(solution E)注入其中，并上下翻转混合均匀。

10. 在37℃的Medi‐bath水域槽震荡15分钟，但在7分钟时先取出试管混合均匀后再放回。

11. 将脂肪组织放入离心机，以350g (1500rpm)离心10分钟。

12. 离心后可见试管中的脂肪分为三层，上层为清澈黄色、中间层为白色纤维层、底层为细
胞沉淀的红色层(干细胞层)。

13. 将附件灭菌软管针接上10cc无菌针筒，沿着管壁缓缓伸入细胞沉淀的红色层，尽可能将
红色层抽取干净，但避免抽取到中间白色纤维层。

14. 接着将抽出的内容物放入新的50 ml试管中。

15. 以无菌操作的方式取出100um 无菌过滤器(SCNY000100)，旋转装置上并转紧在含有内
容物的试管上方。

16. 将上述装置完成的试管翻转，再装上新的50 ml试管。

此时内容物在上，新的试管在下，
中间隔着无菌过滤器。

17. 将手持真空泵管连接到无菌过滤器的连接口，使用泵产生真空，压力差会促使上层液经
过过滤器流到下层。

注意：使用真空泵的过程需记戴防护眼镜。

18. 过滤完成后，拆除过滤器与上层试管，将含有溶液的试管加盖。

19. 将含有溶液的试管以800g (2300rpm)离心10分钟。

20. 离心后，以吸管将“上层红色液体层吸出移除”，最后留下约1-3 ml的液体，避免抽取
到底部的细胞层。

21. 利用吸管抽吸将剩下的1-3 ml液体与细胞层重新混合均匀，不可有任何团块状。

22. 以20 ml针筒抽取20 ml的药剂F 加入试管
中，并混合均匀。

23. 将试管置入离心机以800g (2300rpm)离心10分钟。

24. 同样的，以吸管将“上层红色液体层吸出移除”，最后留下约1-3 ml的液体，避免抽取到
底部的细胞层，而且利用吸管将剩下的1-3 ml液体与细胞层重新混合均匀。

25. 用20 ml针筒抽取12 ml的药剂F加入试管中，上下翻转试管，混合均匀，不可有任何
团块状，若过程中见到透明或白色状纤维不必担心，下一个步骤就会去除。

26. 取出60um 无菌过滤器(SCNY00060)，旋转装置并转紧在含有内容物的试管上方，同样
将装置完成的试管翻转，再装上新的50 ml试管。

此时内容物在上，新的试管在下，中间隔着无菌过滤器。

27. 将真空泵管连接到无菌过滤器的连接口，使用泵产生真空，压力差会促使上层液经过过
滤器留到下层。

注意：使用真空泵的过程需配戴防护眼镜。

28. 将所有溶液抽出，放置在新15 ml试管中。

29. 将15 ml试管放入离心机，以800g (2300rpm)离心10分钟。

30. 用吸管“移除上层液“，避免抽取搅动底部的细胞层，留下约0.2 ‐ 0.5 ml的液体(约在
脂肪干细胞
细胞层上方5 mm高度的位置)。

即为最重要的脂肪干细胞
第四步骤-将PRP与脂肪干细胞混合并激化
1. 抽取少量的富含血小板血浆(RRP)溶解液，加入试管中，将容量添加到0.5 –
2.0 ml (至少
0.5 ml)。

添加量取决于要注射的关节数量，一个注射部位通常最多注射0.5 ml。

而且添加
的富含血小板血浆至少要等于或大于细胞液的量。

2. 重新将试管混合均匀。

微量吸管将细胞混合液移至2.0 ml 低温保存管(cryotube)。

3. 使用微量吸管
4. 将低温保存管置入Medi‐Light (LED灯)并激活20分钟。

5. 取出成品，可开始用于注射。

兽医师问题和答复：
1.针对关节冶疗如何使用呢？打一次多久后见效？可消炎止痛多久呢？
答：取得之2cc 干细胞其中1cc 点滴静脉注射，另1cc 可分成2~6份，分别为0.2~0.5cc 左
右注射到需治疗之关节腔及其周区，打入干细胞后3－4周明显见效。

维持时间依病情严
重度而不同，至少有9到12个月疗效才会渐渐减退，有些病例只需做一次即可长期有效。

2.小号脂肪干细胞套组(small kit)增殖后2cc 内共有多少干细胞数量呢？
答：见网站提供此信息，共至少有二亿个干细胞数量，为目前市面上培养法和增幅法中数量
最多的干细胞治疗产品。

3.若动物病况需要多点注射＇是否可改用大号套组(large kit)吗?可增殖多少细胞数目和cc 数呢？
答：你如果要用大的试剂组，你就要采50公克的脂肪，这样子的话当然采集到的干细胞数量
会比较多，不过当然也比较贵，这样想法确实是可以去推广的。

4.肾脏．肝脏．心脏冶疗如何使用呢？静脉注射即可或需加局部脏器注射呢？ 答：静脉注射即可，研究中还有更多的治疗方法和治疗目的。

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