三七茎、叶中皂苷类成分的含量测定实习学生：杨正丹 2009级中药3班指导老师：* *摘要目的：建立三七茎、叶中皂苷类成分的比色测定方法，分析三七茎、叶中皂苷类成分的含量，为三七茎叶原料的质量评价提供依据。
方法：采用香草醛-高氯酸比色法分别测定三七茎、叶中皂苷类成分含量。
结果：测得三七茎和叶中皂苷类成分的含量分别为2.71%和12.79%，含量差异较大，三七叶中皂苷类成分含量为三七茎的5倍。
结论：本法可用于对三七茎叶的质量控制，为三七茎叶原料的质量评价及开发利用提供实验依据。
关键词三七茎叶；含量测定；三七茎叶皂苷；人参皂苷Rb1Abstract：To establish an analysis method of colorimetry of PnGL from the stalks and leaves of Panax notoginseng,and The results could provide the basis for rational development and utilization of resourcesof the stalks and leaves of Panax notoginseng. Methods：Determine theegnoside of the content of PnGL through colorimetry with vanillin and perchlorate respectively. Results: The contents of PnGL in Panpax Notoginseng stalks and leaves were 2.71% and 12. 79%. The contents of total saponins in Panax notoginseng stalks and leaves vary significantly.The contents of PnGL in Panpax Notoginseng leaves is 5 times more than the stalks. Conclusion:This method can be used for quality evaluation of Panax notoginseng stalks and leaves.Key Words:Panax notoginseng stalks and leaves; content determination;Panax notoginsegnoside of the leaves; ginsenoside Rb1.三七( Panax Notoginseng (Burk. ) F. H. chen)为五加科人参属多年生草本植物,是传统的名贵中药材,主产于我国云南、广西。
三七的干燥根,《本草纲目》中记载有散瘀止血、消肿定痛、补益气血等功效。
大量研究证明,三七根对血液和造血系统、心脑血管系统、中枢神经系统、免疫系统等都具有显著的作用,其主要有效成分为总皂苷( total saponins of Panax Notoginseng, PNS) 、三七素等[1]。
三七的干燥茎叶,含有与三七根类似的皂苷类有效成分,但却也存在差异，研究表明三七茎叶的活性成分三七茎叶总皂苷(Panax notoginsengoside of the leaves，PnGL)亦是达玛烷型四环三萜皂苷，具有明显的镇静、镇痛和消炎等作用,且其毒副作用小[2]。
目前市场上以三七茎叶皂苷类成分为原料主要开发的药品有七叶神安片、速效降脂灵胶囊、三七叶苷胶囊、七叶神安滴丸等；保健品有三七睡亦香胶囊、三七健眠软胶囊、金不换袋泡茶等。
《中国药典》2010版自2010年10月1日实施以来，要求所有中成药生产均以中药饮片投料，而三七茎叶在我省尚无质量标准。
为了更好地控制三七茎叶质量，开发三七茎叶，本实验通过测定三七茎、叶中三七茎、叶中皂苷类成分的含量的研究，对三七茎叶的质量进行综合评价，可为合理开发利用三七资源及三七茎叶中皂苷类成分的提取工艺研究提供依据。
1 材料与试剂1.1材料三年生春三七茎、叶（由云南特安呐制药股份有限公司提供），经鉴定为正品。
1.2主要仪器调温电热套（型号:ZDHW,产自北京中兴伟业仪器有限公司）、XY系列精密电子天平（型号:XY10MA,产自常州市幸运电子设备有限公司）、电子天平（型号BS224S,产自北京赛多利斯仪器系统有限公司）、紫外分光光度计UV-1800。
对照品（购自中国药品生物制品检定所，纯度1.3主要试剂人参皂苷Rb192.6%）；甲醇，香草醛，冰醋酸，高氯酸，石油醚，乙醇等试剂均为分析纯，市售。
2 测定方法为对照品测定三七茎、叶中采用香草醛-冰醋酸显色法[3]，以人参皂苷Rb1皂苷类成分的含量。
标准品（纯度92.6%）,2.1 对照品溶液的制备精密称取9.5mg人参皂苷Rb1加甲醇定容至10 mL。
对照品溶液、三七茎2.2 吸收波长的确定分别精密吸取适量人参皂苷Rb1叶总皂苷样品溶液适量，至磨口具塞试管中，热水浴挥干溶剂，加5%香草醛冰醋酸溶液（新配置）0.2 ml，高氯酸0.8 ml，于60℃恒温水浴15 min，立即取出置冰水浴内冷却，加冰醋酸5.0 ml 摇匀，以相应试剂为空白，紫外分光光度仪上扫描。
结果表明，人参皂苷Rb1对照品溶液和三七茎叶皂苷样品溶液显色后于551nm处有一明显吸收峰，因此选择551 nm为三七茎叶总皂苷的吸收波长。
2.3线性关系考察精密量取人参皂苷Rb1对照品溶液100μl、110μl、120μl、130 μl、140μl、150μl，分别置25 ml磨口具塞试管中，热水浴挥干溶剂，加5%香草醛冰醋酸溶液（新配置）0.2 ml，高氯酸0.8 ml，于60℃恒温水浴15 min，立即取出置冰水浴内冷却，加冰醋酸5.0 ml摇匀，以相应试剂为空白，在551 nm波长处测定吸收度，结果见表1。
表1 线性关系数据表取样量（μl）吸光度A100 110 120 130 140 150 0.318 0.354 0.389 0.424 0.458 0.495以人参皂苷Rb1含量(mg)为横坐标，吸光度（ABS）为纵坐标作图，得标准曲线：y=4.0014x-0.0337,r =0.9999，结果表明人参皂苷在0.08797～0.131955 mg范围内线性关系良好。
2.4 精密度考察精密量取人参皂苷Rb1照品溶液100μl，按香草醛-冰醋酸比色法，在紫外分光光度仪551nm处连续测定 6 次，测得吸光度RSD值为0.4286%,表明精密度良好。
2.5 回收率试验精密称取一定量的人参皂苷Rb1对照品加入到已测定含量的样品中，按香草醛-冰醋酸比色法测定含量，计算加样回收率，结果见表2。
表2 回收率数据表样品号含量（mg）加标量（mg）测定值（mg）回收率（%）1 0.0576 0.0565 0.1024 97.582 0.0696 0.0565 0.1261 100.43 0.0672 0.0560 0.1206 104.034 0.0648 0.0526 0.1184 98.715 0.0648 0.0523 0.1186 97.426 0.0624 0.0512 0.1126 99.63平均回收率为99.63%，RSD=2.24%。
3 样品测定3.1三七茎叶重量比的测定选取完整的三七植株，分别测定其茎叶干燥后的重量，计算其重量比。
结果见表3。
表3 茎叶重量比数据表测定次数茎（g）叶（g）茎（g）:叶（g）重量比平均值1 6.5681 2.5573 2.56842 6.7542 3.2235 2.09533 5.9456 2.9467 2.0177 2.173424 7.7445 4.0746 1.90075 7.4864 3.2763 2.285结果表明三七茎与叶的质量比约为2:13.2 三七茎叶皂苷类成分含量的测定分别精密称取的三七茎5g、三七叶5g，各加12倍量70%乙醇浸泡30min 后回流提取三次，每次回流提取2小时。
合并提取液，蒸馏除去乙醇溶液, 过滤，用D101大孔吸附树脂柱, 水洗脱, 去多糖等杂质, 弃去水洗脱液, 再用70%的乙醇洗脱得洗脱液, 采用阴离子交换树脂进行脱色。
脱色液蒸馏除去乙醇溶液，加纯化水定容至25ml.摇匀。
取1ml挥干，加甲醇定容稀释至适宜浓度作为供试品。
取供试品溶液100μl，按香草醛-冰醋酸比色法，在紫外分光光度仪551nm 处测定其吸光度A，用标准曲线法计算三七茎、叶中皂苷类成分的含量。
结果见表3。
表3样品次数皂苷类成分含量(g/100g) 平均含量(g/100g)1 2.572 2.85茎 3 2.72 2.714 2.625 2.786 2.701 12.062 13.51叶 3 12.71 12.794 12.845 13.116 12.51三七茎、叶中皂苷类成分的含量分别为2.71%、12.79%。
4 分析与讨论三七茎叶中的化学成分非常复杂，除含有人参皂苷Rbl 、Rb3、Rc；三七叶皂苷XIII、IX、XVI；三七皂苷Fa、Fc、Fe等20多种化学成分外，还含有糖类、黄酮、果胶、色素、脂质、蛋白质等化学成分[4-8]。
本实验在供试品制备中采用大孔树脂吸附分离[9]和阴离子交换树脂进行脱色[10]，排除三七茎、叶中黄酮类和糖类成分的干扰，使所用分析方法专属性更强，准准确性更高。
研究结果表明，三七茎、叶中所含皂苷类成分含量差异较大，三七叶中的含量高于三七茎，而且，约为三七茎的5倍。
而三七茎、叶的质量比为2:1。
由此可知，采购三七茎叶原材料时，为保证其质量，应选取含叶较多的三七茎叶，加大三七茎叶中叶的比列可对提高三七茎叶总皂苷生产率有一定的帮助。
由于时间关系，本课题只分析了产自云南特安呐制药股份有限公司9月GAP基地的三七茎叶。
在市场上三七茎叶还存在不同年限、不同月份及不同产地等多种规格，对各规格所含皂苷类成分含量的变化规律是否符合该研究，还有待进一步探讨研究。
【参考文献】[1]杨志刚,陈阿琴,俞颂东.三七药理研究新进展[J].上海中医药杂志, 2005, 39(4): 59-61.[2]雷伟亚,史栓桃,余思畅.三七叶总皂苷的毒性研究[J].药物研究，1984, 5(4): 241-242.[3]吴少雄,王保兴,郭祀远,李琳. 三七叶苷的提取分离与纯化[J]. 食品与发酵工业,2005,: 31(1)149-151.[4]韩凌.三七叶皂苷活性成分的化学研究[D].辽宁中医药大学,2007.[5]姜彬慧,王承志,韩颖.三七叶中微量活性皂苷的分离与鉴定[J].中药材,2004,27(7)[6]吕青远.三七叶苷的化学成分及药理作用[J].时珍国医国药,2006,17(10)[7]李海舟,张颖君,杨崇仁.三七叶化学成分的进一步研究[J].天然产物研究与开发,2006,18(4)[8]王军.三七茎叶资源综合利用的化学基础研究[D].云南中医学院,2009.[9]刘永宁,史作清,范云鸽,等．交联聚苯乙烯氨基树脂的结构与脱色性能研究[J]．高等学校化学学报,1994,15(I):154．[10] 范云鸽,施荣富.离子交换树脂对三七叶总皂苷的脱色精制研究[J].中国中药杂38(7):1026．。