中国医药指南 2010 年 2 月第 8 卷第 6 期Guide of China Medicine, February 2010, V ol.8, No.621论 著和预后的辅助指标。
综上所述，采用免疫组织化学SP法检测p53、VEGF、PCNA在膀胱移行细胞癌组织中的表达，对于判断膀胱移行细胞癌恶性程度和预后有较好的临床应用价值。
参考文献[1] Lane DP. P53 guanlian of the genoma [J].Nature,1992,358(6381):15-16.[2] 阎洪涛,龚百生,廖勇,等.膀胱移行细胞癌组织中P53和血管内皮生长因子表达的关系及临床意义[J].中华泌尿外科杂志,2006, 27(3):178-180.[3] Ferrara N,Henzel WJ. Pituitary follicular cells secrete a novelheparin-binding. Growth factor. Specifi c for vascular endothelial cells [J]. Biochem Biophys Res Commun,1989,161(2):851-858.[4] 郭雪涛,崔明玉.P53、P16、TGF-α、EGFR、VEGF在膀胱移行细胞癌组织中的表达及意义[J].现代泌尿外科杂志,2007,14(4): 225-228.[5] Miyachi K,Frilzler MJ,Tan EM,et al. Autoantibody to a nuclearantigen in proliferating cells [J].J Immunol,1978,121(6):2228-2234.[6] 卢童,杨为民,章群. 膀胱移行细胞癌组织中P16、P53和PCNA的表达及其意义[J].临床泌尿外科杂志,2008,23(1):58-60.复方丹参片是2005年版《中国药典》一部收载的品种，由丹参、三七和冰片三昧药组成，有活血化瘀、理气止痛之功效，用于心血管疾病可显著扩张冠状动脉，增加血流量，减少心肌耗氧量，改变血液流变性。
同时也能改善糖尿病患者心、脑血管及神经系统并发症的症状及体征。
三七是复方丹参片的重要药物组成，国内文献报道[1-3]。
对不同厂家生产的本品的含量比较只是针对丹参中主要成分丹参酮ⅡA和丹酚酸B。
三七总皂苷含量变化幅度较大，致使药品质量和疗效存在很大的差异。
三七中的主要有效成分是人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1，已有文献报道采用HPLC法测定以上成分的含量来控制制剂的质量[4,5]。
本文采用HPLC法，同时对复方丹参片中的三七总皂苷3种主要有效成分进行了含量测定，可用于控制复方丹参片的质量，保证其临床用药有效性提供参考。
1 资料与方法1.1 资料仪器与试剂：Agilentl100高效液相色谱仪（美国惠普公司）；Agilentl100系列可变波长检测器；Diamonsil C18柱（5μm，250mm×4.6mm，迪马公司）；BP211D电子分析天平（北京塞多利斯天平有限公1 广东省肇庆市第一人民医院药剂科（526021）2 广东省肇庆医学专科学校（526021）HPLC测定复方丹参片中三七总皂苷的含量曾荣华1邓雪媚1卢慧娴1莫肇江1刘燕2【摘要】目的建立复方丹参片中三七有效成分的含量测定方法。
方法采用HPLC法测定本品中三七中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的含量。
结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1线性范围分别依次为0.850~8.524、0.922~9.013、0.377~3.317μg；平均回收率分别为101.1%、101.2%、103.2%，RSD分别为1.5%、1.6%、1.8%。
结论本方法简便可靠，结果稳定，可用于丹心舒胶囊中三七的有效成分的含量测定。
【关键词】复方丹参片；人参皂苷Rg1；人参皂苷Rb1；三七皂苷R1；含量测定中图分类号：R927.2 文献标识码：B 文章编号：1671-8194（2010）06-0021-03Determiation the Contents of Panax Notoginseng Saponins in Compound Danshen Tablets by HPLCZENG Rong-hua1,DENG Xue-mei1,LU Hui-xian1,MO Zhao-jiang1, LIU Yan2(1 Department of Pharmacy, The First People' s Hospital of Zhaoqing, Zhaoqing 526021,China;2 Zhaoqing Medical College, Zhaoqing 526021, China)[Abstract]Objective To analyze the active compounds of Panax notoginseng and Salviae miltiorrhizae in Compound Danshen Tablets. Methods HPLC was used to analyze the contents of ginsenoside Rg1, ginsenoside Rb1 and notoginsenoside R1 in Compound Danshen Tablets. Results The linear ranges of ginsenoside Rg1, ginsenoside Rb1, and notoginsenoside R1 were 0.850~8.524, 0.922~9.013, 0.377~3.317μg. With average recoveries of 101.1%(RSD=1.5%), 101.2% (RSD =1.6%), 103.2% (RSD=1.8%). Conclusion The method is simple, reliable and stable, which could be used for the quality control of Compound Danshen Tablets.[Key words]Compound Danshen Tablets; Ginsenoside Rg1; Ginsenoside Rb1; Notoginsenoside R1; Determination司）；KQ100型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
人参皂苷Rg1（批号：110703-200637）、人参皂苷Rb1（批号：110704-200634）、三七皂苷R1（批号：110745-200619），对照品均供含量测定用，由中国药品生物制品检定所提供。
实验中乙腈为色谱纯，水为纯净水，甲醇为分析纯；复方丹参片（广州白云山中药厂）。
1.2 方法1.2.1 色谱条件色谱柱：Diamonsil C18柱（5μm，250mm×4.6mm）；以乙腈为流动相A，0.05%磷酸水溶液为流动相B，进行二元梯度洗脱，洗脱程序[6]：0→12min流动相A 22%，12→20min流动相A 22%→28%，20→60min流动相A 28%→43%；流动相B 81%→64%；流速：1.0mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：203nm，进样量为10μL。
1.2.2 供试品溶液的制备取复方丹参片20片(除去包衣)，研碎，精密称取约0.8g，加乙醚DOI:10.15912/ki.gocm.2010.06.02410mL ，超声5min ，过滤，弃去滤液，残渣挥干溶剂，加20mL 甲醇于水浴上回流60min ，放冷，过滤，滤液蒸干，加水微热溶解，定容至5mL ，摇匀，精密吸取上清液1.00mL ，加于Strata TM C 18-E 固相萃取小柱上（小柱先用5mL 甲醇和5mL 纯水预先冲洗处理）[7]，分别用5mL 纯水和5mL 20%甲醇水溶液洗脱，弃去洗脱液，再用5mL 70%的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，用甲醇定容至1mL ，用微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液。
1.2.3 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1对照品适量，分别加甲醇制成：人参皂苷Rg1质量浓度为0.462mg/mL 、人参皂苷Rb1质量浓度为0.368mg/mL ，三七皂苷R1质量浓度为0.105mg/mL 的溶液，将三者混合作为对照品溶液。
2.1.4 缺三七阴性对照溶液的制备按2005年版中国药典中复方丹参片中的处方，取处方中除三七外的其余药材按制剂工艺制成缺三七的阴性对照品，按2.2项下的供试品制备方法处理得缺三七阴性对照液，精密吸取溶液10μL 进行测定结果显示：在该色谱条件下，人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1能够达到基线分离，阴性对照液在三七皂苷R1和人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的相同保留时间位置上未见色谱峰，说明其他成分对测定无干扰。
2 结 果2.1 线性关系试验精密吸取混合对照品1、5、9、13、17μL 注入液相色谱仪测定，以进样量(μg)为横坐标（X ），峰面积为纵坐标（Y ），绘制标准曲线，计算回归方程，结果如表1所示。
表1 标准曲线结果表对照品回归方程相关系数(r)线性范围(μg)人参皂苷Rg1Y=414.7X+9.2200.99970.850~8.524人参皂苷Rb1Y=235.0X+26.7150.99980.922~9.013三七皂苷R1Y=198.0X+17.280.99970.377~3.3172.2 精密度试验分别精密吸取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1对照品溶液，于测定条件下进样10μL ，分别重复进样5次。
以3种组分峰面积分别计算，结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的RSD 分别为3.02%、3.18%、3.35%，结果表明仪器精密度良好。
2.3 重现性试验取同一批号的供试品，按供试品溶液制备项下操作，平行制备6份，按“2.1”项色谱条件测定，按外标法以峰面积计算样品含量。
结果样品中测得人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1平均含量分别为5.47、5.13、1.608mg/g ，人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的RSD 分别为3.17%，4.24%、2.31%。
测定结果表明，本方法重现性符合要求。
2.4 稳定性试验取同一批号供试品，室温下放置，分别在0、2、4、8、10、24h 进样，结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的RSD 分别为2.46%、3.57%、3.46%。