凯基生物是专业从事生物试剂研发、生产、销售和技术服务的国有公司
凯基生物现具有四条产品线：生命科学通用工具库、医学研究工具库、药物 发现和开发工具库、核质与核信号研究工具库，五千余种产品，上万种品种 规格供客户选择
• 抗体 (Ab):是B 细胞受抗原刺激后，分化为 浆细胞合成并分泌的一类能与相应抗原特 异结合的球蛋白。
流式实验流程介绍
1，将荧光抗体和细胞一起培养
2，抗体结合到细胞表面所 对应的特殊抗原上
3，过流式细胞仪的时候， 在激发光的照射下，抗 体的荧光部分发出荧光
4，抗体发出的发射光被 流式仪所收集
根据目前可见的三种激发光分
• 蓝色激发光405nm • 绿色激发光488nm • 红色激发光635nm
流式细胞术的 诊断：
• 已知抗体查未知抗原；血型、乙肝、SARS、 肿瘤相关抗原等
• 已知抗原查未知抗体；HIV、伤寒、自身免疫 病等
• 预防： 应急预防（破伤风，Rh不合的新生儿 溶血等）
• 治疗： 感染、抗移植排斥、抗炎、抗肿瘤 • 科研：
western blot ELISA FACS IHC IP …
•荧光强度往往比较强 •荧光颜色可以随时更换 •耗时
•非特异性染色干扰实验结 果，特别是阳性率低的时候。
Biotin染色：
•特异性较强的荧光识别 •灵活选择颜色
•只能使用一种带生物素的抗 体
•在全血中会有非特异性染色
荧光抗体的介绍
• 用各种方法将单克隆抗体和流式仪能够检测到的 荧光蛋白结合在一起就是流式操作中所用的荧光 抗体
流式细胞仪的科研应用
免疫功能研究 癌症病人的多药耐药性 细胞动力学功能研究 动物性别筛选 海洋与环境微生物分析 染色体分选
Annexin V-FITC/PI双染色法
B淋巴细胞检测
淋巴细胞
R1
B淋巴细胞
Dynabeads （chip isolation
activation)
抗体的选择
• 一抗： • （1）确定抗体的名字，注意中英文名字、它名、
抗原：小鼠 一抗：兔来源 二抗：不能是兔来源的
免疫组化
传统方法
即用型快捷免疫组化
• 聚合物: • 辣根过氧化物酶标羊抗鼠、兔（一抗） • 碱性磷酸酶酶标抗鼠、兔（一抗）
免疫组织化学的应用
• 1.确定细胞类型 • 2.确定细胞类型 • 3.确定细胞类型 • 4.确定细胞类型 • 5.确定肿瘤分期 • 6.寻找感染病因 • …..
Western blot
Primary antibody
选择？
Secondary antibody
• 酶标二抗： 辣根过氧化酶（HRP) 碱性磷酸酶（AP) 葡萄糖氧化酶（GOT)
种属性:兔(与一抗来源相同） 来源：山羊（不能与抗原来源相同）
ELISA
与western blot 不同点
二抗：必须能与抗原结合 但是不能与一抗 （包被抗体）结合
亚型等信息 • （2）确定你的实验类型，ELISA，WB，IHC，
ICC，还是FACS。 • （3）确定实验样本的种属，Human，Mouse，
还是Rat • 二抗 • （1）种属来源 • （2）标记物的选择
保存注意事项
• 收到抗体后12000rpm离心3min后再打开管 盖进行分装和保存！
• 大部分抗体是保存在-20度。 • 酶联抗体：保存在4度 • 荧光抗体：避光保存4度
细胞结构
细胞功能
细胞大小
细胞表面/胞浆/核的
细胞粒度
特异性抗原
细胞表面面积
细胞活性
核浆比例
细胞内细胞因子
DNA含量与细胞周期酶活性
RNA含量
激素结合位点
蛋白质含量
细胞受体
染色体分析
细胞凋亡
在上述信号基础上的细胞分选
流式细胞仪的临床应用
HIV免疫分型，CD4绝对计数 白血病和淋巴瘤的免疫分型 肿瘤的细胞周期和倍体分析 网织红细胞计数 细胞移植的交叉配型和免疫状态监测 干细胞计数 残量白血病细胞检查 HLA-B27检查 血小板功能及相关疾病
FACS
液流系统：将细胞单个压入流动室 光学滤镜
激光发射器
发出所需要的波长的激光
侧向散射光检测器
前向散射光检测器
目前流式仪可以检测的类别
细菌
浮游生物
红细胞
DM：1um ——15um
淋巴细胞
中性粒细胞 单核细胞
荧光标记法
直接染色法：
•省时，一步染色 •特异性强 •可以同时进行多种颜色 的染色
间接染色法：