pUCm T-载体试剂盒组成编号规格SK2211 1 µgSK2212 5 µg保存方法及注意事项该产品低温运输，-20°C保存，有效期为一年。
产品介绍pUCm-T Vector是一种高效克隆PCR产物（T Cloning）的专用载体。
本载体由pUC系列载体改建而成，在pUC载体的多克隆位点处插入特殊的限制性内切酶识别位点，酶切后能在载体的3’端形成悬挂的“T”末端。
很多DNA 聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3’端加上一个突出的碱基A。
这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中，形成含有目的片断的重组载体。
大大提高了3’末端A突出PCR产物的连接、克隆效率。
pUCm-T载体图谱及多克隆位点序列pSG-TS19载体试剂盒组成编号规格SK2221 1 µgSK2222 5 µg保存方法及注意事项该产品低温运输，-20°C保存，有效期为一年。
产品介绍pSG-TS19 Vector是用于克隆含有A末端PCR产物的理想载体。
该载体基于pUC19的T simple载体，与现行T载体相比，消除了多克隆位点区大多数酶切位点，避免载体上存在的位点和插入片段中设计的位点发生干扰。
在T突出两端设计两个Hin d III位点，可以用单一的酶Hin d III进行插入子鉴定，该位点的设计使得载体具有如下特点：A、对于有插入片段的载体，Hin d III酶切后将切下和插入片段大小一致的片段；B、对于掉T自连的载体，Hin d III不能切割；C、对于酶切不完全自连的载体，Hin d III酶切后掉下25 bp片段，大小可以在琼脂糖凝胶上分开。
由于Xcm I酶切不完全或者因为两端掉T的情况，载体自连所产生的转化子均为蓝斑，从而降低假阳性率。
插入位点两侧的距离经过优化，如使用M13通用引物进行测序，在获得良好的序列读取的同时，尽量减少载体序列残留。
pSG-TS19载体图谱及多克隆位点序列pUCm-B载体试剂盒组成编号规格SK2231 2 µg 1.5 ml 选择液SK223210 µg7.5 ml 选择液保存方法及注意事项该产品低温运输，-20°C保存，有效期为一年。
产品介绍pUCm-B Vector是一种高效快速克隆平末端DNA片段的载体。
它是由Sma I酶切后产生的即用型线性载体。
Sma I位点位于自杀基因之中，载体自身连接转化后不能生长，最后得到的转化子几乎都是含有平末端DNA 插入片段的重组子。
该试剂盒使用方便，可以直接用于连接反应，免去繁琐的酶切、电泳检测、纯化、去磷酸化、再纯化等步骤。
可用于克隆酶切产生的平末端DNA、Pfu酶扩增的PCR片段、cDNA 片段、3'和5'RACE 片段、Taq酶扩增的PCR 片段(部分为平末端）等。
pUCm-B 载体图谱及多克隆位点序列Acc I MluT-载体PCR产物克隆试剂盒试剂盒组成组分SK2213，20次SK2214，100次T Vector 1 µg 5 µg10×Ligation Buffer50 µl200 µl50% PEG 400050 µl200 µlT4 DNA Ligase, 5 U/µl100 U500 USterilized ddH2O 1 ml 1 ml操作手册1份1份保存方法及注意事项该产品低温运输，-20°C保存，有效期为一年。
产品介绍pUCm-T Vector是一种高效克隆PCR产物（TA Cloning）的专用载体。
本载体由pUC系列载体改建而成，在pUC载体的多克隆位点处插入特殊的限制性内切酶识别位点，酶切后能在载体的3’端形成悬挂的“T”末端，大大提高了3’末端A突出PCR产物的连接、克隆效率。
本载体在插入位点两端独特设计了两个Pst I 识别位点，可以用Pst I 单酶切对插入片段进行检测，大大方便了客户的酶切检测步骤。
经本载体克隆的PCR片段，可以用M13通用引物和T7启动子引物进行测序。
16实验准备☑ PCR产物3’末端带有突出的A碱基：Taq、Tth、AmpliTaq、KlenTaq DNA聚合酶扩增的PCR产物3’末端均带有突出的A碱基。
建议扩增的PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳进行回收，再进行连接转化实验，可以使用生工产品柱式DNA胶回收试剂盒（SK8131/8132）。
如果PCR扩增产物特异性很高，可直接使用生工产品柱式PCR产物纯化试剂盒（SK8145/8146）纯化PCR产物。
☑ PCR产物3’末端没有突出的A碱基：Pfu、Pwo、Tli或DeepVent等DNA聚合酶具有3’→5’外切酶活性，其扩增的PCR产物末端可能不带有3’ A，要对这种平末端PCR产物进行克隆，应先对其进行3’末端加A，再进行连接转化实验。
建议选用生工产品dA-T ailing Kit（SK2291/2292）进行加Ａ实验。
☑ 自备试剂：SOC培养基、IPTG、X-gal等。
标准操作步骤1.在0.2 ml PCR管中配制下列连接体系：反应组分10 µl 反应体系插入的目的片段X µl（0.2 pmol）pUCm-T Vector 1 µl（50 ng）10×Ligation Buffer 1 µl50% PEG 4000 1 µlT4 DNA Ligase 1 µlSterilized ddH2O补足至10 µl2.16 °C连接1-12 h。
3.将100 µl感受态细胞置于冰上解冻后，加入上述10 µl连接液，轻轻混匀，冰上放置30 min。
4.42°C水浴热激90 sec，再冰上放置5 min。
5.加入900 µl SOC培养基，37°C振荡培养1 h。
6.4000 rpm离心3 min，用枪头吸掉750 µl上清液，用剩余的培养基将细胞悬浮。
7.将细菌悬液均匀涂布在含20 µl IPTG（100 mM ）和100 µl X-gal（20mg/ml）的氨苄青霉素抗性的LB平板上。
8.将平板于37°C培养1 h，然后倒置培养过夜。
9.用牙签挑取白色菌落，以M13通用引物或基因特异性引物进行PCR扩增，确认载体中插入片段的长度大小。
或将白色菌落挑至含氨苄青霉素的液体培养基中37°C培养过夜，提取质粒后进行酶切鉴定。
16操作提示1.PCR产物的纯度A.连接反应前需用琼脂糖凝胶电泳检测PCR反应产物，如果电泳检测PCR产物条带弥散，或出现非特异条带，则需要切下目的条带，用胶回收试剂盒对目的片段进行回收。
若PCR产物电泳检测只有预期大小的明显条带，也应使用PCR产物纯化试剂盒直接纯化PCR产物，以除去引物二聚体。
不经纯化的PCR 产物在某些条件下可直接用于连接，但由于引物二聚体和PCR产物中其它物质的影响，造成含有插入片段的阳性克隆数减少，因而需要筛选很多克隆方可得到含有目的PCR产物的阳性克隆。
2.平端PCR产物A.具有校正活性的热稳定性DNA 聚合酶如Pfu、Pwo、Tli在进行PCR扩增时产生平端PCR产物。
这种平端PCR 产物可以进行3’末端加A尾后连接到pUCm-T载体中，采用这种方法进行连接，可大大提高克隆的效率。
3.优化插入片段和载体的摩尔比A.pUCm-T载体优化的插入DNA片段和载体的摩尔比为3:1，采用3-10:1 的连接比例也可成功进行连接。
如果你的PCR产物开始连接的不理想，则有必要优化连接比例。
B.PCR 产物的量可采用以下公式进行换算：PCR片段的量（ng）= [ 加入载体的量（ng）×插入片段大小（kb）/载体大小（kb）] × 插入片段和载体的摩尔比4.筛选含插入片段的转化子A.插入片段成功克隆到pUCm-T载体中，可阻断β 半乳糖苷酶的编码序列，因而重组克隆可在指示培养基上通过颜色进行筛选。
大多数情况下含有PCR产物的克隆菌为白色，如果PCR片段和LacZ 基因在同一读码框内，即PCR片段碱基数是3的整数倍（含3’-A），并且读码框无终止密码子，则重组克隆菌可能为蓝色。
快速DNA连接试剂盒试剂盒组成组分SK2241SK2242Fast DNA Ligase20 µl100 µl5×Rapid Ligation Buffer200 µl 1 mlSterilized ddH2O 1 ml 5 ml操作手册1份1份保存方法及注意事项该产品低温运输，-20°C保存，有效期为一年。
产品介绍快速DNA连接试剂盒是通过T4 DNA连接酶催化双链DNA的3'-OH 和5'-P形成磷酸二脂键，把载体DNA和要克隆的目的DNA片段连接在一起，T4 DNA连接酶对粘末端DNA和平末端都能进行有效连接，成为一个完整的重组分子。
本试剂盒操作简单、快速。
全过程只需30分钟即可完成。
实验准备☑ 连接反应体系中，插入DNA与载体DNA的浓度比率为1:10，可获得相当数量重组体DNA。
☑ 自备试剂：载体等。
标准操作步骤1.在1.5 ml 无菌干净的离心管中配制下列连接体系：反应组分20 µl 反应体系5×Rapid Ligation Buffer 4 µl插入片段0.5 µg载体50 ngFast DNA Ligase 1 µlSterilized ddH2O补足至20 µl2.在离心机上微离3-5 s，室温放置20 min。
3.将混合物置于冰上，可直接用于转化，也可-20°C保存备用。
16双链DNA补平和连接试剂盒试剂盒组成组分SK2245，10次SK2246，20次Klenow DNA polymerase, 3 U/µl15 µl30 µl10×Klenow Reaction Buffer100 µl200 µl0.5 mM dNTP Mix20 µl40 µlT4 DNA Ligase, 2 U/µl20 µl40 µl10×Ligation Buffer100 µl200 µl50% PEG 4000300 µl600 µl Sterilized ddH2O 1.5 ml 1.5 ml操作手册1份1份保存方法及注意事项该产品低温运输，-20°C保存，有效期为一年。