• 管路与连接件
• 脱气装置：在线脱气机或超声波清洗器
• 过滤器：溶剂过滤器和针筒式过滤器• 进样器：平头进样器
不同材质的管路
• 不锈钢管：耐腐蚀性好，有精密的同轴度， 一般用于高压部分 • 聚合物管：用在液相色谱系统中从储液瓶 到泵、检测器出口以后和进样器排液口等 低压部分 • PEEK（聚醚醚酮）管：是一种耐高温、高 性能的工程塑料，具有良好的惰性，适宜 于生物样品的分离分析
梯度洗脱
低 压 梯 度
B A D
比例阀
C
高压输 液泵
阻尼器 混合器
色谱柱 进样器 检测器
高 压 梯 度
高压输 液泵
色谱柱 进样器 检测器
高压输 液泵
梯度混合器
梯度洗脱的特点
• 优点
– 缩短分析时间 – 增加分离能力 – 提高检测灵敏度
• 缺点
– 仪器设备要求高 – 不适合某些检测方式(RI) – 柱需再生平衡 – 定量分析的重复性较低
功能特点：
• 使用波长范围宽
• 波长精度准确 • 能够实现多波长测定
LC-5500工作站
功能特点： • 具有仪器控制系统、数据采集和处理系统； • 可进行波长程序控制 • 可设定柱温 • 可对两台泵进行程序控制，进行梯度洗脱
LC-5510
高效 液相 色谱 仪
LC-5510 在线脱气机
• 在线脱气机主要由真空泵、脱气膜管、传感器、 控制电路、真空腔等组成 • 在线脱气机的主要目的是脱除流动相中的气泡
高效液相色谱系统
——液相色谱培训（二）
液相色谱流程图
色谱柱 储液瓶 高压泵 检测器 色谱工作站
进样器
高压输液泵
柱
输液系统功能： 溶剂输送 目标： 稳定 准确
双柱塞往复式串联泵
双柱塞往复式并联泵
重要指标： 耐压能力
压力脉动
流量精密度
柱
流量准确性
各品牌输液泵的基本参数
项目 Waters 515型 0.001~10 Agilent 1100 型 0.001~10 LC-10ATvp 型 0.001~9.99 9 0.001 Elite P200 II型 0.01~4.99 LC-5500 型 0.01～ 4.99 检定 要 求
原理：基于被分析组分对特定波长紫外光 的选择性吸收 定量基础：朗伯-比耳定律，A＝KCL
优点： 1）灵敏度高
2）对温度和流速不敏感
3）可用于梯度洗提
缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质
二极管阵列检测器
样品池 光栅
D2 / W 灯
每一组分可在每一波 长处得到一吸光度值
二极管阵列
二极管阵列检测器
色谱柱
分离系统 功能：
组分分离 目标： 分辨力强 效率高
液相色谱柱是高效液相 色谱仪的核心部分，是 分析好坏、成败的关键
键合相色谱柱
• 键合相: – 反相: 70%; C18, 65%; C8, 15%; 苯基柱 <5%, – 正相: 20%; 硅胶、 -NH2、 -CN、-OH
– 其它 (手性柱, 离子交换柱): 10%
LC-5510紫外-可见光检测器
功能特点： • 使用波长范围宽 • 波长精度高 • 噪声低漂移小 • 可用汞灯自动校正波长 • 采用LCD带背光的显示屏来显示波长的设 置参数和运行参数
LC-5510工作站
功能特点： • 具有色谱仪控制系统、数据采集和处理系 统； • 可进行波长程序控制 • 可对两台泵进行程序控制，进行梯度洗脱 • 功能健全，操作便捷
LC-5510紫外-可见光检测器
技术指标： • 波长范围：190～650nm • 波长精度: ±0.2nm • 波长重复性:优于0.2nm • 基线噪声：±6×10-5AU（动态，254nm） • 基线漂移：±2.5×10-4AU/h（动态，254nm） • 光谱带宽：8nm • 流通池体积：5ul • 最小检测浓度：＜1×10-8g/mL (萘的甲醇溶液)
LC-5500高效液相色谱仪主机
主机包括两部分：
• 柱温箱
• 紫外-可见光检测器
LC-5500柱温箱
技术指标： • 温度控制范围：室温＋10～80℃ • 温度控制精度：±1℃ 功能特点： • 控温精度准确 • 更换色谱柱方便 • 分析结果重现性好 • 保证检测稳定性
LC-5500紫外-可见光检测器
原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试 样中各组分浓度。 优点：通用型检测器，
缺点：
1）对温度变化敏感
2）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测
3）属于中等灵敏度的检测器
电导检测器
原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的 电导变化来测定电离物质含量。广泛应用于离 子色谱法 优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可 用于梯度洗脱
• 反相色谱是目前应用得最为广泛的高效液相色谱方法。 • C18 和 C8 在反相色谱中应用得最为广泛。
检测器
• 紫外检测器（包括二极 管阵列检测器） • 荧光检测器 功能： 检测组分浓度 目标：
• 示差折光检测器
• 电导检测器
• 蒸发光散射检测器
重要指标：
噪声、漂移、线性、检出限
准确
检出限低
紫外检测器
技术指标： • 波长范围：190～650nm • 波长精度: ±2nm • 波长重复性:优于2nm • 基线噪声：±1×10-4AU • 基线漂移：±5×10-4AU/h • 光谱带宽：8nm • 流通池体积：5ul • 最小检测浓度：＜4×10-8g/mL (萘的甲醇溶液)
LC-5500紫外-可见光检测器
蒸发漂移管
工作站
数据采集系统 功能： 采集处理数据 目标： 使用便捷 功能完善
梯度洗脱
●HPLC有等强度(isocratic)和梯度(gradient) 洗脱两种方式 等度洗脱是在同一分析周期内流动相组 成保持恒定，适合于组分数目较少，性质 差别不大的样品 梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制 流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度 和pH值等，用于分析组分数目多、性质差 异较大的复杂样品
LC-5500高压输液泵
技术指标
• 工作压力：0～40MPa
• 流量范围：0.01～5.0mL/min
• 流量准确性：≤1％
• 流量精密度： ≤0.5％
• 压力脉动： ≤1％
LC-5500高压输液泵
主要特点 • 采用双柱塞交替输液吸液，特殊设计的非圆凸轮运 动曲线，保证输出液体流速稳定 • 精密电机及电路设计，实现流量控制和流速的稳定 性 • 压力传感器避免了过压对色谱柱和泵的意外损害 • 性能良好的阻尼器有效消除了输液脉冲 • 采用LCD带背光的显示屏来显示泵的设置参数和运 行参数。 • 梯度洗脱流量程序智能化，流量准确
• 常配的进样器规格为10、25、50、100 μL • 最常使用的为50 μL和100 μL的进样器
LC-5500和LC-5510 高效液相色谱仪介绍
LC-5500高效液相色谱仪
LC-5500高压输液泵
• P-101型高压液 相平流泵由泵 体、过滤器、 缓冲器、步进 电机、步进电 机驱动器、控 制电路板、键 盘以及液晶显 示器等部件构 成
流速范围
调节精度
0.001 RSD 0.1% ±1.0% 4000 Psi
0.001
0.01
0.01
流量精密度
0.15% （<0.3 0.3% %） ±1.0% 40 MPa ±2.0% 39.2 MPa
0.5%
0.5%
1.5% ±2.0 %
流量准确度 最高压力
±5.0% 40.0 MPa
±1.0% 40MPa
荧光检测器


原理：基于被分析组分发射的荧光强度进行检测
优点： 1）灵敏度极高，是最灵敏的检测器之一 2）选择性好 3）对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱 缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质 可检测物质：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸、色氨酸 、卟啉、儿茶酚氨等（具有对称共轭体系）

示差折光检测器
进样器
• 隔膜进样
• 停留进样
• 阀进样
• 自动进样
进样器
• 对进样器的要求
密封性好 死体积小 重复性好 保证中心进样 进样时对色谱系统的压力、流量影响小
进样器原理－六通阀
手动进样器－六通阀
• 一般HPLC分析常用六 通进样阀（以美国 Rheodyne公司的7725 和7725i型最常见），其 关键部件由圆形密封垫 （转子）和固定底座 （定子）组成。耐高压 （35~40MPa），进样 量准确，重复性好，操 作方便
缺点：对温度变化敏感（每升高1度，电导率 增加2%-2.5%) 主要用于离子色谱检测水溶性无机和有机离子
蒸发激光光散射检测器（ELSD）
• 通用型检测器（适合
于挥发性比流动相低 的任何组分）；响应 值与组分质量有关； 可用于梯度洗脱
激光光源 光二极管检测器 散射室 样品液滴 HPLC柱 喷雾气体
梯度洗脱注意的问题
• 注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能 用作梯度洗脱的流动相 • 所用的溶剂纯度要求高 • 所用的溶剂要彻底脱气，防止混合时产生 气泡 • 混合溶剂的黏度常随组成而变化，因而在 梯度洗脱时常出现压力变化 • 每次梯度洗脱后必须对色谱柱进行再生处 理，使其恢复初始状态
高效液相色谱的配件
二极管阵列检测器的优点
1）采集三维谱图
2）峰纯度检验
3）光谱库检索
4）可以发现单波长检测时未测到的峰
紫外-可见检测器
大多数有机化合物有一定程度的吸光度，所以紫 外-可见检测器可以测定大多数的化合物，是目 前实验室中使用最多的检测器
--多数公司售出的检测器中75%以上是吸 光度检测器（其中50%以上是紫外-可见检 测器，25%是PDA）