慢性束缚应激对大鼠血清皮质酮和前额叶皮质p-CREB表达的影响【摘要】目的：探讨慢性束缚应激对大鼠血清皮质酮水平和前额叶皮质p-creb表达的影响。
方法：将30只雄性sd大鼠随机分为对照组，慢性束缚应激1周组和2周组。
比较应激前后大鼠血清皮质酮水平和前额叶皮质p-creb表达的变化。
结果：束缚应激1周组和2周组大鼠血清皮质醇浓度分别为（356.78±112.21）ng/ml、（558.49±98.32） ng/ml，均高于对照组（198.21±101.35）ng/ml），有统计学差异。
束缚应激1周组（3.78±0.12）和2周组（2.39±0.08）大鼠前额叶皮质的p-creb水平低于对照组（6.08±0.19），p<0.01。
结论：慢性束缚应激引起大鼠血清皮质酮水平增高和前额叶皮质p-creb水平降低。
【关键词】束缚应激；皮质酮；p-creb【中图分类号】r285.5【文献标识码】a【文章编号】1008-6455（2011）08-0020-02effect of chronic restraint stress on serum corticosterone concentration and expression of prefrontal cortex p-creb in the ratmeng shanshan1 liu hongwen1 jia fei2【abstract】objective：to observe the change of serum corticosterone concentration and prefrontal cortex p-crebexpression in the rat induced by chronic restraint stress. method thirty male sd rats were randomly divided into control group, 1 week and 2 weeks restraint stress groups. before and after restraint stress, the changes of serum corticosterone concentration were examined, and the level of p-creb in the prefrontal cortex was analyzed by western blotting. results the serum corticosterone level in 1 week [（356.78±112.21）ng/ml] and 2 weeks [（558.49±98.32） ng/ml] restraint stress groups were markedly higher than that in controlgroup[（198.21±101.35） ng/ml, p<0.05]. the p-creb level in prefrontal cortex in 1 week （3.78±0.12） and 2 weeks （2.39±0.08） restraint stress groups were markedly lower than that in control group（6.08±0.19, p<0.01）. conclusion chronic restraint stress significantlyincreases serum corticosterone level and reduces p-creb level in prefrontal cortex of rat.【key words】restraint stress; corticosterone; p-creb 机体长时间处于应激状态下会导致抑郁症的发生[1]。
慢性束缚应激作为一种慢性应激模型，已被广泛的应用到应激相关的精神疾病基础研究中[2]。
我们采用慢性束缚应激模型，观察应激后大鼠的血清皮质酮和前额叶皮质环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（p-creb）磷酸化水平的变化，为探索应激发生的分子病理机制提供线索。
1 材料与方法1.1 材料：雄性sd大鼠30只，体重180-200g，购自哈尔滨医科大学动物中心。
动物置于自然昼夜节律光照条件下，自由进食水，每笼2-3只，控制室温（22±2）℃。
动物随机分为对照组，慢性束缚应激1周组和慢性束缚应激2周组，每组10只。
所用试剂均购于sigma公司。
1.2 方法1.2.1 建立模型：对照组不做任何应激处理,仅在应激组应激阶段禁食水；慢性束缚应激组将大鼠置于束缚管中，确保通风良好，大鼠在束缚管中有限的空间活动，但不会造成肉眼可见的躯体上的伤害。
动物每日应激6h，连续进行1周和2周，应激阶段禁食水。
1.2.2 血清皮质酮测定：最后一次实验结束后第2天上午10:00-11:00,麻醉处死动物、断头取血，置于离心管内，室温下4000×g离心10min，取上清液置-20℃冰箱保存，采用ellisa法测定皮质醇浓度。
1.3 前额叶皮质p-creb表达：各组大鼠在断头取血的同时取双侧前额叶皮质标本，冰上裂解、匀浆，取上清液。
经蛋白定量后采用蛋白免疫印迹法按说明书进行操作，扫描免疫印迹条带并进行分析。
1.4 统计学方法：采用spss12.0统计软件进行分析，实验数据以均数±标准差（x±s）表示。
2 结果2.1 大鼠血清皮质酮水平的变化:对照组、束缚应激1周组和2周组大鼠血清皮质醇浓度分别为（198.21±101.35）ng/ml、（356.78±112.21） ng/ml和（558.49±98.32） ng/ml，应激各组均高于对照组，结果有统计学差异（表1）。
表1 大鼠血清皮质酮水平（ng/ml）注：与对照组和应激2周组比较，*p<0.05；与对照组比较，**p<0.01。
2 p-creb表达的变化慢性束缚应激1周和2周组大鼠前额叶皮质的p-creb蛋白表达相对水平分别为3.78±0.12和2.39±0.08，与对照组（6.08±0.19）相比较，结果有统计学差异（p<0.01）（图2）。
3 讨论应激性事件是人类抑郁症的明显促发因素，并且慢性、低强度、长期的日常压力是引发抑郁的主要原因[3]。
束缚制动作为一种挫折应激，能够较好地突出心理情绪因素，是一种较好的负性心理应激动物模型。
慢性束缚应激可抑制大鼠体质量的增长，其诸多原因中皮质酮升高是一个重要原因[4]。
研究显示腹腔注射皮质酮明显抑制了大鼠体质量的增长[5]，皮质酮水平增高抑制体重增长可从皮质酮的生物学作用进行解释，皮质酮促进蛋白质分解，抑制其合成，同时也影响了糖和脂类的代谢，最终导致体重增长缓慢。
本实验也观察到，慢性束缚应激引起血浆皮质酮水平明显升高。
慢性应激时脑内可产生广泛的神经化学及形态学改变，最终导致大脑器质性损害。
其中，p-creb与抑郁症的发病机制和治疗相关，强迫游泳可引起大鼠海马和前额叶皮质p-erk和p-creb分子水平的降低[6]。
研究发现，慢性束缚应激明显抑制了大鼠前额皮质磷酸化的erk1/2的表达。
p-creb是erk通路的下游分子，有研究表明慢性温和应激明显抑制了大鼠海马齿状回bdnf蛋白的表达和p-creb的磷酸化[7]。
本实验结果显示，慢性束缚应激组大鼠前额叶皮质的p-creb含量较正常对照组明显降低，提示p-creb信号通路的下调可能参与了应激发生的机制。
目前研究认为，p-creb信号通路参与介导了神经营养因子的表达，因此推测creb通路磷酸化水平的下调可能与bdnf表达下调有关，bdnf是一种主要的神经营养因子，在海马和皮层中高水平表达，是神经元再生的关键因素[7]，bdnf的下调参与慢性应激对前额叶皮质的损害。
参考文献[1] 李云峰, 罗质璞. 应激诱发抑郁症机制的研究进展. 生理科学进展. 2002, 33（2）:142-144[2] buynitsky t, mostofsky di. restraint stress in biobehavioral research: recent developments. neurosci biobehav rev. 2009, jul;33（7）:1089-1098[3] 刘顺发. 我国抑郁症患病情况的流行病学研究现状. 医学文选. 2006, 25（4）:861-863[4] christiansen sh, olesen mv, w？rtwein g, et al. fluoxetine reverts chronic restraint stress-induced depression-like behaviour and increases neuropeptide y and galanin expression in mice. behav brain res. 2011 jan 20;216（2）:585-591[5] gregus a, wintink aj, davis ac, et al. effect of repeated corticosterone injections and restraint stress on anxiety and depression-like behavior in male rats. behav brain res. 2005, jan 6;156（1）:105-114[6] qi x, lin w, li j, et al. fluoxetine increases the activity of the erk-creb signal system and alleviates the depressive-like behavior in rats exposed to chronic forced swim stress. neurobiol dis. 2008,aug;31（2）:278-285[7] g rnli j, bramham c, murison r, et al. chronic mild stress inhibits bdnf protein expression and creb activation in the dentate gyrus but not in the hippocampus proper.pharmacol biochem behav. 2006, 85（4）:842-849。