4.5质量控制 4.5.1革兰染色 4.5.2抗酸染色 4.5.3培养基 4.5.4试剂 4.5.4.1每批号、每周需做质控的试剂 4.5.4.2每批号、每次试验需做质控的试剂
3
5.1革兰染色报告 5.1.1痰标本报告原则（见表1） “痰/气管吸出物标本涂片革兰染色结果解释” 5.1.2 BAL细胞离心涂片报告
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内容
1.口咽部定植菌群变化对肺部感染的重要影响
肺部感染的影响因素 (定植菌变化：健康人G+
免疫、基础病/住院、用抗菌药物 G-b )
2.肺部感染的常见机制
主要机制：吸入定植菌；吸入气溶胶；血播性； 附录A:“下呼吸道感染的主要类型及主要病原菌”
3.痰涂片对下呼吸道感染病原菌诊断的重要作用
痰培养：敏感性低 / 培养+ 涂片：提高特异性和敏感性
4.支气管纤维镜标本定量培养的临床意义
特异性82%～91%，诊断价值远高于痰标本； 附录B :“适合诊断的病原及检验项目”
5.下呼吸道感染细菌培养的局限性
培养结果假阴性、假阳性的原因
汇总表 汇总表
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针对医疗机构微生物实验室 针对痰 (细菌) 培养项目：
常规细菌培养方法检测下呼吸道感染病原菌的检验流程 本规范的特色： （1）明确下呼吸道标本适合诊断的病原和检验项目； （2）要求细菌培养项目需同时做革兰染色涂片； （3）规范痰培养/气管吸出物的定性培养程序、气管镜采集标本的定
3.1 标本采集 3.1.1 咳痰 3.1.2 气管吸出物
注：仅当出现肺炎的临床表现（如发热或浸润）时采集气管吸出物标本， 否则勿培养气管吸出物，因气管在插管24h后即有定植菌，培养结果 可能与疾病不符。
3.1.3 血培养 注：当下呼吸道感染患者伴有高热症状时，送检血培养（具体参考血培养
标本采集和送检要求） 3.1.4 诱导痰（通常不用于细菌培养） 3.1.5 气管镜标本

4.2 气管镜标本处理
4.2.1 支气管肺泡灌洗液定量培养 4.2.2 保护毛刷定量培养 4.2.3 接种其他培养基并培养 4.2.4 革兰染色标本处理 4.2.5 剩余BAL标本可用于其他病原检测（标本珍贵）
对剩余BAL标本离心后，可根据需要进行病毒、分枝杆菌、军团菌和真 菌培养；或做病毒、卡氏肺孢子菌、抗酸染色和真菌涂片染色（见参考文献 4的第六篇相关章节）（修改解释）。
3.1.5.1 采集气管镜标本注意事项 3.5.1.2 支气管肺泡灌洗液标本(BAL) 3.5.1.3 保护毛刷(PSB)
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3.2 标本运送
注1：若送检标本超过2h，将导致有临床意义的致病菌数量减少，非苛养的口咽部定植 菌过度生长。为防止口咽部正常菌群的过度生长，可将标本放置2℃～8℃环境，但 培养分离到肺炎链球菌等苛养菌的机会和数量会减少。
5.2报告有临床意义的微生物 5.2.1应报告的病原菌 5.2.2培养和涂片相符合时报告的病原菌 5.2.3有临床意义的数量 5.2.4报告有临床意义数量的非优势菌 5.2.5报告有临床意义数量的优势菌
5.3对非致病菌的报告 5.3.1报告“肠杆菌科细菌” 5.3.2报告“非发酵细菌” 5.3.3只生长肠球菌和凝固酶阴性葡萄球菌 5.3.4报告“分离到口咽部正常菌群”
革兰染色。 4.1.2 接种标本 4.1.3 培养 4.1.4 标本涂片及革兰染色 注1：革兰染色脱色时间因选用不同的脱色剂而异。1）95%乙醇脱色时间为30s；2）丙酮-
乙醇（体积比为3:7,棕色瓶室温保存，有效期1年）脱色时间1s～5s，脱色效果一致性 好；3）丙酮（试剂纯）脱色时间最短，当标本中含大量宿主细胞时脱色效果好。 注2：使用革兰染色仪染色的实验室按照厂家操作说明书进行，注意条件优化，使涂片染色结果达到满意效果。 4.1.5显微镜观察革兰染色结果 注：低倍镜下细胞计数、油镜下细菌计数半定量指标；
4.3 连续培养并观察慢生长菌
4.4 分离并鉴定下呼吸道重要致病菌（参见附录C） “常见可疑菌落形态及经典快速鉴定方法(16种)”（修改解释）
4.4.1链球菌属 4.4.2苛养革兰阴性杆菌（在麦康凯平板上难生长） 4.4.3革兰阴性双球菌 4.4.4革兰阴性杆菌（在麦康凯平板上生长良好） 4.4.5葡萄球菌属 4.4.6肠球菌属 4.4.7革兰阳性杆菌 4.4.8鉴定丝状真菌 4.4.9涂片时可见但培养不生长的细菌
2 Murray P.R., Baron, E.J., Pfaller, M., Tenover, F., and Yolken, R. 2006. Manual of Clinical Microbiology, 9th ed. ASM Press, Washington, DC.
3 James V., Karen C.C., James H, J., Guido F., Marie L.L., David W.W.2011. Manual of Clinical Microbiology, 10th ed. ASM Press, Washington, DC.
2 美国微生物学会:《临床微生物学手册》(第9版).2006 3美国微生物学会:《临床微生物学手册》(第10版).2011 4 叶应妩, 等.全国临床检验操作规程(第3版). 2006
5 Nagendra, S., P.Bourbeau, S.Brecher, M.Dunne, Rocco, and G.Doern.2001.Sampling variability in the microbiological evaluation of expectorated sputa and endotracheal aspirates. J. Clin. Microbiol.39:2344-2347. 6 Roson,B.,J.Carratala,R.verdaguer,J.Dorca,F.Manresa,and F.Gudiol.2000.Prospective study of sputum Gram stain in the initial approach to community-acquired pneumonia requiring hospitalization.Clin.Infec.Dis.31:869-874. 7 Gleckman,R.,J.DeVita,D.Hibert,C.Pelletier,and R.Martin.1988.Sputum gram stain assessment in community-acquired bacteremic pneumonia.J.Clin.Microbiol.26:846-849.
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Standard for Bacterial Culture Procedures of Lower Respiratory Tract Infections
主要起草人：卫生部临床检验中心 胡继红
大多数微生物室每日近一半标本量：痰培养+药敏； 培养结果前后两天经常不一致； 培养生长的不同种类、数量细菌如何报告标准不统一； 定植菌、致病菌如何判断—标本是否合格如何判断？ 培养结果与临床诊断不符合；
卫生部临床检验中心 陕西省人民医院 安徽省立医院
胡继红 任健康 马筱玲
卫生部北京医院
胡云建
北京大学人民医院
王辉
中国医学科学院北京协和医院 徐英春
首都医科大学附属北京友谊医院 苏建荣
解放军总医院
罗燕萍
浙江省温州医科大学附属第二医院李向阳
1 美国微生物学会:《下呼吸道感染》临床微生物学检验技术技术及操作系列丛书.2004
养均不合格。 诱导痰 注：诱导痰标本只适用于检测卡氏肺孢子菌和结核分枝杆菌，对其他病原菌检出效果差。
4.1 痰及气管吸出物标本处理 4.1.1 标本处理要求
接种标本及涂片操作必须在Ⅱ级生物安全柜中进行； 应尽快处理所有标本，特别是来自急诊、新入院患者和有创方法采集的标本（如：BAL和肺
活检标本），以保证致病菌的活性，避免造成重复采集标本； 使用全自动接种前处理系统的实验室按厂家说明书处理标本，洗痰、液化后自动接种和涂片
量培养程序； （4）明确了报告的临床意义和格式内容。
分析前
标本的采集、运送
标本初筛、合格判断
分析中 定性、定量培养、涂片流程
病原菌筛查和鉴定、质量控制
分析后
染色、培养结果报告（致病菌、非致病菌）、结果解释
支气管肺泡灌洗 BAL 保护毛刷标本 PSB 库什曼螺旋纤维Curschmann’s spiral fibers 夏科雷登结晶 Charcot-Leyden Crystal 弹性纤维 elastic fibers 纤毛柱状上皮细胞 ciliated columnar epithelium cell 肺泡巨噬细胞 alveolar macrophages
5.4平板上无细菌生长 5.5结果解释
1 Susan E.Sharp, Ann Robinson and Michael Saubolle, ect. 2004. Cumulative Techniques and Procedures in Clinical Microbiology 7B, Lower Respiratory Tract Infections.ASM Press, Washington, D.C.
4 叶应妩,等. 全国临床检验操作规程(第3版). 2006. 5 Nagendra, S., P.Bourbeau, S.Brecher, M.Dunne, Rocco, and G.Doern.2001.Sampling
variability in the microbiological evaluation of expectorated sputa and endotracheal aspirates. J. Clin. Microbiol.39:2344-2347. 6 Roson,B.,J.Carratala,R.verdaguer,J.Dorca,F.Manresa,and F.Gudiol.2000.Prospective study of sputum Gram stain in the initial approach to community-acquired pneumonia requiring hospitalization. Clin. Infec. Dis.31:869-874. 7 Gleckman,R.,J.DeVita,D.Hibert,C.Pelletier,and R.Martin.1988.Sputum gram stain assessment in community-acquired bacteremic pneumonia.J.Clin.Microbiol.26:846849.