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神经元细胞培养步骤

神经元细胞培养
灭菌准备:
1、将玻璃培养皿(3个)、滤器(清洗、换滤片、锡纸包裹)放入盒中、将盒拿到桶中灭菌
2、将显微镜搬至超净台灭菌
3、将直头镊(1个)、弯头镊(1个)放入盛有酒精的小烧杯,放入超净台
材料准备:17天孕鼠、冰块、75%酒精、50mL离心管、PBS、胰酶、培养基、双抗、注射器、灭菌的显微镜、灭菌的玻璃培养皿(3个)、10cm培养皿(1个)、计数器、包被好的培养板
1、处死孕鼠,取小鼠,放入50mL离心管(冰块上),移至超净台,
2、将小鼠倒入盛有PBS的玻璃培养皿中,关灯,开显微镜
3、将头取出(左手直头镊,右手弯头镊),放入盛有PBS的玻璃培养皿中
4、夹取皮层(皮质及髓质),放入盛有PBS培养皿中,移去显微镜
5、将PBS倒入50mL离心管
6、用枪弃去PBS,再以PBS洗3次,晃匀
7、弃去PBS,加入5mL胰酶,放于37℃细胞培养箱内5分钟
8、弃去胰酶,以PBS洗2次,吸掉
9、加入5mL PBS,对着底面吹打成悬液
10、吸至50mL离心管中,
11、灭菌后的滤器置于15mL离心管,用注射器将细胞加入,抽空气再吹数次
12、离心,25℃,1500rpm,5分钟
13、配制培养液,混匀
14、弃上清,将离心管中加入5mL培养液,吹打成悬液
15、再加入5mL培养液,再次吹打
16、加1滴加至计数器中央,显微镜下观察,
17、20—50个/每16小格,即20—50 ×104 = 2—5×105,若密度加大,则加入培养液稀释
18、加100uL至96孔板中(四边不用),晃匀,
19、放37℃细胞培养箱。

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