医学实验动物
4.腋窝动静脉采血法大、小鼠用乙醚麻醉后,置于解剖台固定。右前肢腋窝皮肤经消毒后,用镊子将皮肤挟起,剪子将皮肤沿体轴纵形剪开,形成一个大的皮下口袋。在确认腋窝血管走行后用剪子将血管剪断,血液即储留在皮下口袋内。用吸管吸取所需血量,移入试管内。此法用于动物实验结束后需处死的动物。
5.心脏采血法常用于较大动物如大鼠、豚鼠等。麻醉后将鼠固定在解剖板上,或由助手抓取鼠,左手固定头部和两前肢,右手固定两后肢和尾部,使胸部突出。实验者用酒精消毒皮肤,在左侧第3~4肋间用左手食指触摸心脏搏动。右手持连有4或5号针头的注射器,选择心搏最强处穿刺。当针头刺入心脏内时,血液回流进注射器,即可进行采血。此法需要技术熟练,否则易误刺入肺脏,造成气胸和胸腔内出血,甚至死亡。
2.兔将兔放进保定栏中,助手用手轻轻压住免的背部,防止兔的挣扎,操作者用左手拇指和中指挤压家兔两颊,将下颌挤开使兔被动张口,右手将开口器从一侧口角插入口腔并固定,用泡在水中的14号细导尿管,经开口器的孔插入,向前推进约15cm可达胃内,确并固定,用泡在水中的一地,说明没有误入气管,即可注入药液。认泡在水中的导管另一端没有冒气泡,说明没有误入气管,即可注入药液。
四、号牌法
用金属制的号牌固定于实验动物耳上,或系于大动物的项圈上。对猴、犬、猫等大动物数量较少时可以不做特别标记,只记录它们的外表和毛色特征即可。
五、电子标签法
将电子芯片装入玻璃管内,通过无线频率标识系统对电子芯片进行标志,包括动物的各种信息,消毒后通过注射植入动物体内,让每只动物均有一个唯一的身份证。阅读时将阅读器紧近动物,即可阅读出各个动物的信息。
3.化学药物致死法通过注射一定量的化学药物而使动物迅速致死。常用的化学药有:
(1)10%氯化钾溶液:静脉注射,用量为犬20~30ml/只,兔5~10mL/只。
(2)10%甲醛溶液:静脉注射,用量为犬20mL/只。
四、兔
免比较温顺,不咬人,但爪较尖,不正确的抓取容易被其抓伤。抓取时不要抓其两耳,也不要拖拉四肢或提握腰部。正确的方法县当兔子安静下来时,用右手抓住颈部的被毛与皮肤,提起兔,然后用左手托住臀部,使兔身的重量大部分落在手上。根据实验需要进行固定,如需免耳静脉采血,采血时可用兔盒固定;如要测量血压、呼吸等实验和手术时,可将兔固定在兔手术固定台上。兔头可用兔头固定夹固定。
3.肌肉注射肌肉注射的部位一般选择肌肉丰满而无大血管通过的臀部或大腿外侧。不溶于水的油剂药物常采用肌肉注射。
4.腹腔注射多ห้องสมุดไป่ตู้下腹部两侧进针,这样可避免刺伤肝、脾或膀胱。
5.静脉注射
(1)大、小鼠的尾静脉注射法:将大、小鼠装入固定盒内固定好,尾巴置于45℃-55℃水浴中浸泡1~2分钟,使静脉充盈。用左手中指和拇指将尾拉直,食指托住尾部。消毒后右手持带有4号针头的注射器在尾巴下1/4处刺入尾静脉。先注入少许药物,观察针头是否确已进人尾静脉,然后即可缓慢注人。注射完毕拔出针头,用无菌棉球压迫止血。注射量小鼠为0.2~1.0mL,大鼠为0.5~2.0mL。
(2)免耳缘静脉注射法:将免置固定盒内固定好。拔去耳缘部被毛,用75%酒精局部消毒,再用干棉球擦干,然后用左手拇指和食指压住耳根部,右手持连有4号针头的注射器,顺血管平行方向刺人静脉,进针约1cm,如有血液回流,即可进行注射。注射完毕,拔出针头,用棉球压迫止血。
(3)大前肢内侧头静脉注射法:抓取和固定好犬。由助手将犬前肢根部用手握紧,或用胶皮管绑住,使静脉充盈。实验者左手托住犬前肢,右手持连有7号针头的注射器刺入内侧皮下的头静脉,进针1cm后回抽见血,即可注射。区,脑内注射将大、小鼠置实验台上,用左手拇指和食指固定鼠头,消毒额部后,在眼与耳造线的中点处垂直进针约2-3mm。注射量乳鼠为0.01-0.02mt,成年鼠为0.03-.05mL。此法常用于病原微生物的鉴定和诊断,观察接种后的病理变化。
三、剃毛法
常用于大动物的手术前准备。先将刹毛部位用肥皂水充分湿润,再用刹毛刀逆被毛方向剃毛。
四、脱毛法
采用化学脱毛剂将动物被毛脱去。此法常用于大动物的无菌手术,观察局部皮肤血液循环或过敏反应。将脱毛部位的被毛用剪刀剪短,以节省脱毛剂用量。用棉球蘸脱毛剂在脱毛部位涂成薄层,经2-3分钟后,用温水洗去该部脱下的毛,用于纱布将水擦干,涂上一层油脂。第五节实验动物给药和采血
(四)注射给药
1.皮下注射常用的皮下注射部位:大、小鼠为下腹部两侧,兔为背部脊柱两侧,那鼠为后大腿内侧,犬、猫为大腿外侧。
2.皮内注射此法用于观察皮肤血管通透性变化或皮肤反应。将注射部位的被毛剪去,用结核菌素注射器带4号针头刺入皮下,然后使针头向上挑起,进入皮内。当药物注入皮内时,可见皮肤表面马上鼓起橘皮样小泡。此小泡如不很快消失,则证明药物确定注射在皮内;如很快消失,就可能注射在皮下,应重换部位注射。
3.眼眶后静脉丛穿刺采血法用直径为7.0mm的玻璃管在煤气灯上拉成前端为0.5~1.0mm的毛细管,管长6~8cm。采血时左手从背部抓取动物,用拇指和食指轻卡头颈部,使头部静脉淤血。右手将毛细管从内侧眼角转动插入,刺破Tenon氏筋膜,然后由鼻侧眼眶壁平行地向喉头方向插入约4~5mm,到达眼眶后静脉丛,血液流出毛细管内。达到所需血量后,拔出毛细管,松开在头部加压的拇指和食指。用此法采血量较尾静脉切割法多,且可反复多次进行。
第八节实验动物处死
一、大鼠、小鼠
1.脊椎脱臼法将鼠置于实验台上,左手拇指和食指用力向下按住鼠头,右手抓住鼠尾用力向后拉,将脊髓与脑髓拉断,鼠便立即死亡。
2.急性失血法可采用摘眼球、剪断颈动静脉或股动静脉法造成急性大量失血而死亡。
3.麻醉致死法用挥发性或非挥发性麻醉药过量麻醉面致死。
4.气体窒息致死法将鼠装入塑料袋或塑料桶内,通入窒息气体如二氧化碳或氮气,动物因缺氧而窒息死亡。适用于大批动物需要销毁的场合。
第三节实验动物抓取与保定
一、小鼠
小鼠一般不会主动咬人,但抓取不当也会被其咬伤。抓取时先用右手将鼠尾提起,放在笼具盖或实验台上,轻轻拉尾。在其向前抓行时,用左手拇指和食指抓住小鼠两耳和头颈部废肤,将鼠体置于左手心中,把后肢拉直,用左手无名指和小指按住尾巴和后肢,即可作注射或其他实验操作用。操作熟练后,可采用左手一手抓取法更为方便。
三、采血方法
(一)大鼠、小鼠
1.摘眼球采血法左手抓取和固定鼠,右手持眼科镊子在眼球根部把眼球摘去,将鼠头朝下,眼眶内很快流出血来。由于采血过程中动物未死,心脏在不断跳动,因此采血量较断头法多。若想反复几次采血,眼眶内流出0.5~1.0mL血后即松手,饲养若干天后再摘另一眼球采血。
2.尾静脉切割采血法将鼠装入固定盒内,露出鼠尾。用75%酒精局部消毒,再用干棉球擦干,用锋利刀片切断一根尾静脉,血液即由伤口流出。尾部3根静脉交替切割,并由尾尖部向尾根部移行,可长期连续多次采血。切割后用棉球压迫止血。亦可直接用剪子剪去尾尖,尾静脉血即流出几滴。用此法采血量不多,可用作一般血常规等试验。
3.犬在给犬灌胃时,将犬固定于特制的固定架上,实验时将木制开口器从一侧口角放犬的口腔,用左手或绳子固定,右手持12号胃管由开口器的小圆孔向咽后壁方向不断插入,导管另一端置于一杯清水中,若连续出现气泡,说明插入了气管,应立即拔出胃管,重新操作。如无气泡,说明没有插入气管,插至约20cm即可到达胃内。犬的灌药量为每只每次200-500mL。
3.心脏采血法兔由于体型较大,心脏采血较大鼠、豚鼠容易。采血方法基本同前所述。次采取全血量的1/6~1/5,经一星期后,可重复进行。如采血致死,可采50~100mL。
4.颈总动脉、股动脉采血法此法常用于动物急性放血。
(三)犬
采用前肢内侧头静脉采血法。采血方法基本同犬前肢内侧头静脉注射法。采血量2~10mL。
6.颌下静脉采血法固定小鼠后,将采血注射针头刺入颌下静脉丛血管取血。单人操作约1分钟内可完成小鼠颌下静脉丛采血,采血量达到0.3~0.5mL。
(二)兔
1.耳缘静脉采血法可用针头刺破耳缘静脉,血液即从伤口流出。采血后用棉球压迫止血。
2.耳中央动脉采血法将免置于固定盒内固定好,左手固定兔耳,右手持连有7号针头的注射器,在耳中央的中央动脉末端,沿动脉平行向心方向刺入动脉,即可见动脉血进入注射器。采血后注意止血。一次采血约15mL。
第四节实验动物被毛去除
一、剪毛法
将动物固定后,用弯头手术剪紧贴动物皮肤依次将所需部位的被毛剪去。可先粗略剪,然后再细剪。为避免毛到处乱飞,剪毛部位实现可用纱布蘸生理盐水予以湿润。剪下的被毛应放入固定的容器内。
二、拔毛法
常用于被毛短而稀疏的部位,如免的耳缘静脉区。将动物固定后,用拇、食指将所需部位被毛拔去。涂上一层凡士林可更清楚地显示血管。
(一)经口灌胃法
1.小鼠和大鼠大、小鼠灌胃用专用灌胃器,由注射器和灌胃针组成,灌胃针尖端焊有一金属小圆球,金属球中空,用途是防止灌胃针插入时造成损伤;将灌胃针插头紧紧连接在注射器的接口上,吸入一定量的药液。灌胃时左手抓取和固定鼠,右手拿起准备好的注射器。将灌胃针针头尖端放入一侧嘴角,顺咽后壁轻轻往下推,灌胃针会顺着食管滑入胃。用中指与拇指捏住针筒,食指按着针栓的头慢慢往下压,即可将注射器中的药液灌入大、小鼠的胃中。在插入过程中应很通畅,如遇到阻力或动物强烈挣扎,表示针头未插入胃内,需将灌胃针取出重新插入。
二、耳缘打孔法
用打孔器在动物耳缘的不同部位打孔,以表示一定的编号。一般左耳代表十位数,右耳代表个位数。耳缘打孔法适用于长期实验中作终生标记。缺点是需要专用打孔器。
三、刺数钳烙印法
用刺数钳在动物耳上刺上号码,然后用棉球蘸着溶于酒精中的黑墨在刺号上涂抹。此号码永久固定,作为该动物的终身编号,适用于长期或慢性实验的大动物编号。犬、兔等耳较大的实验动物尤为适用。
二、猫、犬、兔
1.空气栓塞法从动物的静脉内注入一定量的空气,使之发生空气栓塞,形成严重的血液循环障碍而死亡。用此法时,免、猫需注入20~40mL空气,犬需注入80~150mL空气即可死亡。本法优点是方法简单、迅速,缺点是由于动物死于急性循环衰竭,各脏器凝血十分明显