方法 ( 57 )摘要
本发明涉及隐性孔雀石绿的检测方法 ，具体 涉及，淡水鱼中隐性孔雀石绿的快速提取和检测 方法 ，首先 ，快提淡水鱼中孔雀石绿 和隐 性孔雀 石绿，加入硼氢化钾粉末将孔雀石绿转化成隐性 孔雀石绿 ，色谱-光谱联 用采集其多波长色谱数 据，经处理得到不含隐性孔雀石绿的本底光谱数 据库N，第二，建立隐性孔雀石绿的标准光谱数据 库V ，第三 ，快速提取市售淡水鱼样本 ，加入 硼氢 化钾粉末后采集样品紫外-可见光谱c，第四 ，采 用向量-子空间夹角判据算法快速计算待测样品 中隐性孔雀石绿总量。本发明解决了现有孔雀石 绿 和隐 性孔雀石绿提取方法繁 琐 ，操作复 杂 ，提 取率低的问题，实现了淡水鱼中隐性孔雀石绿快 速检测。
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权 利 要 求 书
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品加乙腈后在10000r/min匀浆机中匀浆，加酸性氧化铝(200-300目)净化，然后用快速混匀 器振荡，在4000r/min高速离心机离心5min，上清液过0 .45um微孔滤膜。
7 .根据权利要求1所述的快速提取和检测方法，其特征在于：步骤1和步骤3中，1mL 10μ g/mL的孔雀石绿可以完全转化成6 .5μg/mL隐性孔雀石绿，孔雀石绿的转化当量为0 .65，加 入过量的硼氢化钾不影响隐性孔雀石绿的含量。
8 .根据权利要求1所述的快速提取和检测方法，其特征在于：步骤1和步骤3中，加入硼 氢化钾粉末将孔雀石绿转化成隐性孔雀石绿后，样品应进行高速离心，取上清液进行检测。
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说 明 书
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淡水鱼中隐性孔雀石绿的快速提取和检测方法
技术领域 [0001] 本发明涉及隐性孔雀石绿的检测方法，具体涉及淡水鱼中隐性孔雀石绿的快速提 取 和检测方法。
权利要求书2页 说明书14页 附图7页
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权 利 要 求 书
ห้องสมุดไป่ตู้
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1 .淡水鱼中隐性孔雀石绿的快速提取和检测方法，其特征在于，包括： 步骤1 ，将淡水鱼放在含有孔雀石绿的 水中培养24h ，可食部分去除 鱼鳞、鱼皮 和骨头 ， 鱼肉中加入乙腈，快速提取，得到含有隐性孔雀石绿和孔雀石绿的样品，加入硼氢化钾粉末 将孔雀石绿转化成隐性孔雀石绿； 将液相色谱-光谱仪联用，采集完全分离后的多波长色谱数据阵列，扣除待测组分隐性 孔雀石绿的色谱数据，得到数据量大的本底数据库B，对B进行主成分分析和奇异值分解降 低维度，得到数据量小的本底数据库N； 步骤2 ，建立隐 性孔雀石绿标准品数据库V ，用分析天平称取隐 性孔雀石绿标准品 ，乙腈 溶解，配成标准储备液，再将标准储备液分别稀释成不同浓度的标准品，采集全波长下的紫 外-可见光谱数据，经最小二乘回归法得到多波长标准隐性孔雀石绿紫外-可见光谱数据库 V； 步骤3 ，取市售鱼肉的 可食部分 ，加入乙 腈快速提取得到样品 ，在样品提取液中 加入 硼 氢化钾粉末，将孔雀石绿完全转化成隐性孔雀石绿，采集待测鱼肉样品全波长下的紫外-可 见光谱数据，得到待测鱼肉样品光谱数据库c； 步骤4，采用向量-子空间夹角判据方法计算样品的隐性孔雀石绿总含量。 2 .根据权利要求1所述的快速提取和检测方法，其特征在于：所述本底数据库N的样品 为不同品 种的 多个鱼肉 样品 ，对应的 本底数据库N为不同品 种的 多个鱼肉 样品的 光谱数据 库的集合。 3 .根据权利要求1所述的快速提取和检测方法，其特征在于，所述向量-子空间夹角判 据方法包括： (1)根据定量精度设定扣减步数Δ； (2)在算式yi＝aix+bi中带入较大的x1值，得到v1，yi表示i波长下隐性孔雀石绿的吸光度 值 ，ai 、bi指代常数 ，x表示隐 性孔雀石绿的 浓度 ，v1即为浓度为x1下隐 性孔雀石绿的 多波长 吸光度y1 ，v1是所有yi的值所组成的矩阵 ； (3)从待测鱼肉样品光谱数据库c中扣除v1/Δ，扣除后的变量记为dc；将本底数据库N和 变量dc合并，记为对照空间R，计算对照空间R与v1的夹角； (4)从待测鱼肉样品光谱数据库c中一步一步扣除v1 ，重复步骤(3) ，计算R与v1夹角值 ； (5)重复步骤(4) ，当待测鱼肉样品光谱数据库c中隐性孔雀石绿完全被扣除后，对照空 间R 和v1的空间夹 角会出现最大值θmax ，记录θmax出现时所对应的 扣减步数λmax ，通过隐 性孔 雀石绿的 浓度x1 和扣减步数λmax ，计算待测鱼肉 样品中隐 性孔雀石绿的 含量y1 ；计算方法为 y1＝x1×λmax/Δ，得到的y1值即为待测鱼肉样品中隐性孔雀石绿的含量，若空间夹角所对应 的扣减步数为1，或者空间夹角值随扣减步数单调递增或递减，则样品中不含待测组分隐性 孔雀石绿。 4 .根据权利要求1所述的快速提取和检测方法，其特征在于：所述液相色谱-光谱仪联 用中的高效液相色谱的流动相为乙腈:乙酸-乙酸铵缓冲溶液，乙腈:乙酸-乙酸铵体积比为 70-80:20-30，pH为4 .6。 5 .根据权利要求1所述的快速提取和检测方法，其特征在于：所述检测方法的隐性孔雀 石绿检出限为100μg/kg，0 .01μg/mL。 6 .根据权利要求1所述的快速提取和检测方法，其特征在于：所述快速提取，具体是样
(74)专利代理机构 北京国坤专利代理事务所 (普通合伙) 11491
代理人 王峰刚
(51)Int .Cl . G01N 30/06(2006 .01) G01N 30/02(2006 .01)
(10)申请公布号 CN 110208441 A (43)申请公布日 2019.09.06
( 54 )发明 名称 淡水鱼中隐性孔雀石绿的快速提取和检测
( 19 )中华人民 共和国国家知识产权局
( 12 )发明专利申请
(21)申请号 201910044618 .0
(22)申请日 2019 .01 .17
(71)申请人 广西科技大学 地址 545006 广西壮族自治区柳州市城中 区东环大道268号 申请人 广西壮族自治区计量检测研究院
(72)发明人 刘柳 韦媛媛 徐传杰 忻欣 林华 韩莹 粟晖 董华秀