实验三乙型肝炎病毒表面抗原检测
一、目的
掌握ELISA原理和方法
二、实验原理
采用EIA双抗原夹心法检测人血清或血浆中的抗-HBs。

并采用HBsAg包被反应板，加入待测标本，同时加入HBsAg-HRP，进行孵育，当标本中存有抗-HBs 时，该抗-HBs与包被的HBsAg结合并与酶结合形成酶结合物HBsAg-抗-HBs-HBsAg-HRP复合物，洗去反应物，加入显色剂后，将有明显的颜色变化；当标本中没有抗-HBs时，加入底物后没有或只有很轻微颜色变化。

三、试剂与器材
1.试剂
酶结合物、抗-HBs阳性对照，浓缩洗涤液、显色剂A、显色剂B、终止液（2mol/L H2SO4）、7号待测样品、8号待测样品
2.器材
预包被反应板（9孔）、封板胶条、移液枪、摇床
四、操作步骤
1.取7号待测样品分别填装到4孔中，每孔50μL。

同样取8号待测样品分别
填装到4孔中，每孔50μL。

剩余一孔装填50μL抗-HBs阳性对照。

2.加酶结合物，每孔50μL，并充分混匀，贴上标签纸，置于37℃孵育30min。

3.手工洗板：弃去孔中液体，在吸水纸上拍干，用洗涤液350μL灌注每孔，
静置5-10秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复五次。

4.加显色剂：先加显色剂A，每孔50μL；再加显色剂B，每孔50μL；充分混
匀，放置37℃避光孵育15,min。

5.终止反应：每孔加入终止液50μL，混匀。

6.观察颜色变化。

五、实验结果分析
从实验结果看出7、8号待测样品皆无明显的颜色变化，但是阳性对照组再加入显色剂A、B后立即显现蓝色，再加入终止液后立即显现黄色。

表明7、8号待测样品皆无抗-HBs。

而反应显色原因为底物过氧化氢脲溶液和TMB，在HRP酶的作用下，产生蓝色的阳离子根；加入终止液后，一方面，硫酸破坏了HRP酶的活性，使酶的催化功能丧失，另一方面，pH降低，即可使蓝色的阳离子根转变为黄色的联苯醌。

但本实验并未用上酶标仪，故测定联苯醌的消光系数也无法进行。