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胶体金试纸条检测技术 ppt课件
2020/10/15
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精品资料
胶 体 金 ( Colloidal gold) 是 氯 金 酸
(HAuCl4)的水溶胶,氯金酸在还原剂的 作用下,聚合成特定大小的金颗粒,并由于
静电作用成为一种稳定的胶体状态。
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➢基础金核
➢双离子 内层负离子(AuC12-) zeta电位 外层离子层 H+分散在胶体间的溶液中
简捷快速:操作简单,一般只要5-10min 就会出 结果,而其它方法如ELISA需要1-2h,PCR 需要 时间更长。
结果易于判定:阴、阳性呈色很明显,肉眼很容易 判断。
特异性好:因为该技术大多用单克隆抗体标记,这 决定了它具有很好的特异性。
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胶体金快速诊断技术的应用
病毒性疾病:传染性法氏囊病、禽流感、新城疫、 犬细小病毒、猪瘟等。
胶体金试纸条诊断技术
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一、简 介
胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析 技术研制而成,该技术是90年代初在免疫渗 滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫 学检测技术,最先用于人绒毛膜促性腺激素 ( HCG) 的 测 定 和 乙 型 肝 炎 病 毒 表 面 抗 原 (HBsAg)等检测。
9பைடு நூலகம்
胶体金试纸条示意图
样品垫
连接垫 (胶体金垫)
质检线
吸收垫
背衬 (底板)
检测线
硝酸纤维素膜
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测定
测定时将试纸条下端浸入液体 标本中,下端吸水材料即吸取 液体向上端移动,流经C处时使 干片上的免疫金复合物复溶, 并带动其向膜条渗移。
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测定
若 标 本 中 有 待 测 特 异 抗 原 , 即 可与免疫金复合物中的抗体结 合,此抗原抗体复合物流至测 试区即被固相抗体捕获,在膜 上显出红色反应线条(T)。
zeta电位可以使胶体金颗粒之间相互排斥,以维持 胶体金的稳定状态。
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胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附功
能,而不被坏其生物活性,可以与蛋白质 等(葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白)等非 共价结合,形成胶体金标记物。
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➢胶体金的质量判定标准
✓质量好的胶体金:溶液呈红色,胶体金颗粒为球 形,大小均一,无棱角。
✓质量差的胶体金:溶液呈紫色,大小不一,形状 各异。
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胶体金标记的原理:胶体金在碱性条件下带 负电荷,与蛋白质分子的正电荷基团藉静电 吸引而形成牢固结合。
胶体金标记技术(Immunogold labeling technique)是以胶体金作为示踪标记物应 用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
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二、胶体金试纸条诊断技术的原理
以硝酸纤维素膜为载体,利用了微孔膜的毛细 血管作用,滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端 渗移,通过抗原抗体结合,并利用胶体金呈现颜 色(红色)反应,检测抗原/抗体。有三种反应模 式:夹心法,间接法,竞争抑制法。
最常用的是双抗夹心法检测抗原
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寄生虫疾病:血吸虫病、旋毛虫病、囊虫病、恙 虫病。
细菌性疾病:霍乱弧菌、类鼻疽。
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H5亚型AIV尿 囊液阳性结果
阴性对照
H5AIV细胞 毒阳性结果 阴性对照
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谢谢观看!
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测定
过剩的免疫金复合物继续前行, 至 参 照 区 与 固 相 抗 小 鼠 IgG 结 合(免疫金复合物中的单克隆 抗 体 为 小 鼠 IgG), 而 显出红 色质控线条(R)。
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测定
阴性标本则无反应线条,而仅显示质控线条。
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胶体金快速诊断技术的特点