空气消 毒灭菌
培养材料 的接种
（6）外植体灭菌
流水冲洗10—20min 或更长时间
0.1%—0.2%氯化汞 液中浸泡10min左右
在10%的次氯酸钠、 饱和漂白粉浸泡 30min左右
70%—75% 酒精中浸泡 30s
蒸馏水冲洗 4—5次
备用
常用消毒剂消毒灭菌比较表
消毒剂
使用浓度 （%）
去除难易
消毒时间 （min）
除菌、过滤、离心、沉淀等
化学方法： 消毒剂、抗菌素灭菌
2、灭菌
（1）培养基灭菌：高温高压湿热灭菌法 压力在9.8×104—10.8×104Pa 温度在121℃ 灭菌20—30min
（2）玻璃器皿灭菌：蒸汽高压消毒灭菌 干热消毒灭菌
饱和蒸汽压力与其对应的温度
饱和蒸汽压力
kg/cm2
1b/m2
温度（℃）
缓冲室
培养室
无菌室（一）
无菌室（二）
二、仪器与设备
1、基本设备 冰箱、电炉、酸度计、纯水器、
天平、培养基分装器、搅拌器等。
冰箱 电炉
酸度计
天纯 平水
器
培养基分装器
搅拌器
2、灭菌设备
蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、 过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。
蒸汽压力灭菌锅
干热消毒柜
无菌瓶顶过滤装置
实验室 组成
基本实验室
准备室 缓冲室 无菌操作室 培养室
细胞生物学实验室 辅助实验室 温 室
生化分析实验室
基本实验室布局平面图
搁 水槽 架
搁
实
4.0m 架
验
台
电 炉
门
准备室 4.5m
冰箱
药 品
无菌台
搁
拉 窗
培养架
及 无菌台 仪
培养架
器无菌室
柜
架 培养室
培
培
养
养
缓冲室
架
架
3.0m
3.5m
组织培养准备实验室
植物组织培养实验室及操作技术
第一节 实验室设置及基本技术 第二节 组织培养所需的环境条件及营养成分 第三节 培养基的配制与灭菌
第一节 实验室设置及基本技术
一、实验室组成 二、基本设备 三、培养器皿及实验用具 四、洗涤技术 五、灭菌技术 六、无菌操作
一、实验室组成
组织培养实验室布局的总体要求
便于隔离 便于操作 便于灭菌 便于观察
效果
次氯酸钙 次氯酸钠
漂白粉 溴水 过氧化氢 升汞 酒精 抗生素 硝酸银
9~10 2
饱和溶液
1~2 10~12 0.1~1 70~75 4~5（mg/L
1
易 易 易 易 最易 较难 易 中 较难
5~30 5~30 5~30 2~10 5~15 2~10 0.2~2 30~60 5~30
很好 很好 很好 很好 好 最好 好 较好 好
1、玻璃器皿
三角瓶 培养皿 培养瓶
2、金属材质用具
接种针 镊子 解剖刀
四、洗涤技术
1、玻璃器皿洗涤
新购置玻 璃器皿
1%稀HCl
浸渍12h
已用过的 玻璃器皿
洗衣粉 洗涤
清水 冲洗
晾干 备用
2、塑料用品洗涤
新的塑料器皿打开即用
已用过的 塑料器皿
2%NaOH浸泡 12h
蒸馏水 冲洗
清水 冲洗
晾干备用
1.266
20
126.0
1.406
22
127.8
1.543
24
129.6
1.681
30
134.5
50
147.6
（3）塑料器皿灭菌： 多采用高压蒸汽消毒灭菌
（4）金属用具灭菌：灼烧灭菌 浸入95%酒精，后置于酒精火焰上灼烧，冷却后使用
（5）接种室灭菌
接种室
紫外灯 照射
超净工 作台
紫外灯 照射
70%—75% 的酒精擦洗
植物体内至少含有几十种化学元素，其中大部分元素 在植物体内起到一定的生理作用：
a、组成各种化合物，参与机体的建造，成为结构物质； b、构成一些特殊的生理活性物质，参与活跃的新陈代谢； c、元素之间相互协调，以维持离子浓度平衡、胶体稳
5、用沾有70%—75%酒精的纱布擦拭盛培养 基的培养器皿，放进工作台。
6、把解剖刀、剪刀、镊子等器械浸泡在95% 的酒精中，再在火焰上消毒，放在器械架上。
7、在酒精灯火焰附近切割备用的接种材料。
8、打开瓶口，用火焰烧瓶口，转动瓶口使瓶 口各部分都烧到。
9、取下接种器械，在火焰上消毒。
10、把培养材料放入培养瓶，盖上瓶口。
清水 冲洗
2%—5%盐 酸浸泡 30min
3、金属用品洗涤
热洗衣粉水 洗净
冲洗
擦干
清洁液配方
配方成分
弱液 次强液 强液 常用配方
重铬酸钾（g） 50
100
60
100
浓硫酸（ml） 100
200
800
200
蒸馏水（ml） 1000 1000
200
800
五、灭菌技术
1、灭菌方法
物理方法： 物理灭菌干热、湿热、射线处理、物理
饱和蒸汽压力
kg/cm2
1b/m2
温度（℃）
0.0 0.141 0.281 0.442 0.563 0.703 0.844 0.984
0
100
2
103.6
4
106.9
6
109.8
8
112.6
10 115.2
12 117.6
14 119.9
15
121.0
1.055
16
122.0
1.125
18
124.1
11、接种结束后，清理和关闭超净工作台。
注意：操作期间应经常用70%—75%的酒精擦拭工 作台和双手；接种器械应反复在95%的酒精中浸泡 和在火焰上消毒。
第二节 植物组织培养所需的环境
条件及营养成分
一、所需环境条件
与自然条件一样，组织培养中的材料的生长要 受到温度、光照、湿度等各种物理条件，不同气体、 培养基的组成、pH值和渗透压等各种化学条件，以 及外植体部位、大小、细胞密度等各种生物条件等 环境条件的影响。如何根据需要来控制培养条件是 组织培养中的一个重要问题。
温度
植物材料一般最适温度在25±2℃之间
光照
最常用的光周期是光照16h，黑暗8h
湿度
环
境
条 件
气体
一般情况下，培养器内相对湿度应达100%， 培养室内环境的相对湿度在70%—80%
氧气是愈伤组织生长所必需的
培养基的渗透压
调节渗透压常常从糖入手
pH值
植物组织培养时培养基的pH值大多在5.0—6.5
二、营养成分
（参考图）
喷雾消毒器
（参考图）
3、无菌操作设备
超 净 工 作 台
无菌接种箱
4、细胞培养设备 摇床
培养架
光 照 培 养 箱
150C 250D HZC-250
箱
恒 温 振 荡 培 养源自5、细胞学鉴定设备 光学研究显微
镜、实体显微镜、倒 置显微镜
光 学 显 微 镜
倒置显微镜
三、培养器皿及实验用具
六、无菌操作
实验员消毒 实验室、无 菌台灭菌
实验台 卫生
实验器材 的灭菌
消毒
无菌接种
培养室 培养
1、消毒，更换实验服、帽子与鞋子，进入接 种室。
2、打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯， 照射40min左右，后关闭。
3、开启过滤室风机，使无菌风吹拂工作台面 和四周的台壁。
4、用70%—75%的酒精擦拭工作台和双手。