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中药显微鉴别技术讲义3

按剂型不同,分别处理样品,按粉末 制片法装片观察。
1)散剂、胶囊剂 可直接取出粉末(内容物为颗粒状的 应研细)装片,或透化装片。
2) 片剂
可取2~3片,水丸、糊丸、水蜜丸、 锭剂等(有包衣者除去包衣)取数丸或 1~2锭,置于乳钵中研细,取出适量粉末 装片,或透化装片。
3) 蜜丸剂
样品可用两种方法处理: (1)用解剖刀沿蜜丸正中切开,从切面由外至内刮取少许 样品,置载玻片中央,滴加适宜的试液,用玻璃棒搅匀。 按上述粉末制片法装片,或透化装片。 (2)将样品切碎放入容器,加水搅拌洗涤,然后置离心管 中离心、沉淀。也可置超声仪中处理少时,以助样品分散。 如此反复以除尽蜂蜜后,取沉淀或透化后装片。
偏光下的草酸钙晶体与淀粉粒
5、倒置生物学显微镜
6、扫描电子显微镜
扫描电镜 工作原理
扫描电子显微镜(简称扫描电镜)
分辨率高,放大倍率5~100,000,能使物 质的图像呈现显著的表面立体结构特征,样 品制备操作又较简易。在药材鉴定,特别在 同科属种间的表面结构的鉴别比较上,已成 为一种新的手段。 如:扫描电子显微镜用于研究花粉粒、种 皮和果皮的表面纹饰,茎、叶表皮组织的结 构(毛茸、腺体、气孔、角质层、蜡层、分 泌物等) 的细微特征,木类药材的解剖以及 动物体壁、鳞片及毛等的鉴别。
制片的预处理——软化
软化方法可采用放在吸湿器中闷润,或在水中浸 软或煮软。经软化处理的材料,检查软化是否合适, 可用刀片切割材料,若较容易切下薄片,则表示软 化适宜。有些根、根茎、茎及木类药材,质地较坚 实,可将削平的切面浸水中片刻,待表面润湿时取 出,直接切片也能切成较完整的薄片。过于柔软的 样品,可将其浸入70%~95%乙醇中,约20分钟后可 变硬些,再切片。
2) 滑走切片机切片
此法不需要较高的技巧,只要了解掌握 操作方法,短时间内即可学会并切出较 薄的切片,适用于切质地坚实、形状较 大的药材样品,柔软的样品经冷冻处理 亦可切得较薄的切片。
切片前:
应检查切片机是否稳固,并调试刀具。 将切片刀夹持在夹刀器上夹紧,调整刀的角 。 。 度(约0 ~15 );调整厚度调节器至所需厚度。 把制备好的样品用两块软木夹住或直接放在 切片机的材料固定器上夹紧夹正,使样品露 出软木块或固定器上端0.5cm,调整好样品高 度,使刀刃靠近样品的切面且平行并略高于 刀刃约0.5~1mm。
7.3.2 粉末制片
主要用于粉末状的药材及药材粉末制成 的成方制剂的观察。 4.2.l 药材粉末制备 取干燥药材,磨或 锉成细粉(通常应过80目以上药筛),装瓶, 贴上标签。制备粉末时,注意取样的代表性。 例如:根类药材要切取根头、根中段及根尾 等部位,并全部磨粉,过4号筛,混合均匀, 不得丢弃渣头。干燥时,一般温度不能超过 60℃,避免淀粉粒糊化,有碍观察。
主要用途:
作为动物学、植物 学、昆虫学、组织学、 矿物学、考古学、地质 学和皮肤病学等的研究 和解剖工具。
电脑型连续变倍体视显微镜
SZX-16 研究用
电脑(数码相机)型连续变倍体视显微镜
它观察物体时能产生正立的三维空间像, 立体感强,成像清晰和宽阔,具有较长的工作 距离,,并可根据观察物的特点选用不同的反 射和透射光照明,是适用范围非常广泛的常规 显微镜。 对同一物体可实现连续放大倍率观 看,可能直接电视机或电脑上观察实物图像。
7.2.8 硝铬酸试液 此液为常用的“植物 组织解离液”。各检品的解离浸泡时间,按 材料的质地不同而异。 7.2.9 α-萘酚试液 此液可使菊糖染成紫 红色,并很快溶解。 3.1l 氯化锌碘试液 此液用于检查木质化 与纤维素细胞壁,前者显黄棕色,后者显蓝 色或紫色。
7.3 显微标本的制作
7.3.1 横切制片或纵切制片 7.3.1.1 药材的预处理 将应观察的部位、切 成适当大小的块或段,一般以宽lcm、长3cm为宜, 切面削平整。质地软硬适中的样品可直接进行切 片;质地坚硬的则需先使其软化后再切片。

在偏光显微镜下,药材的鉴别要素在色彩上 表现出一定的变化,可作为大多数植物、动物、 矿物类药材的显微鉴别 依据之一。如植物的 淀粉在偏光显微镜下呈现黑十字现象,不同类型 的淀粉其黑十字形象不同(图2);草酸钙结晶 类型多样,在偏光显微镜下呈不同的多彩颜色 (图2);石细胞在植物体内广泛分布,其细胞 壁在偏光显微镜下呈亮黄色或亮橙黄色;纤维、 导管在偏光显微镜下则呈强弱不同的色彩;动物 的骨碎片、肌纤维、结晶状物、毛茸等也呈现出 不同的偏光特性;矿物类物质多具有偏光特性。
3 试液——染色剂
7.2.4 苏丹Ⅲ试液 此液可使木栓化、角质化细胞 壁及脂肪油、挥发油、树脂等染成红色或淡红色。 7.2.5 钌红试液(临用新制)此液可使粘液染成红 色。 7.2.6 间苯三酚试液 此液与浓盐酸合用,可使木 化细胞壁染成红色或紫红色。 7.2.7 碘试液(临用现配。应置棕色瓶内保存)此 液可使淀粉染成蓝色或紫色;蛋白质或糊粉粒染成棕 色或黄棕色。
切片时
用右手握夹刀器柄,往操作者方向迅速拉动, 切下的切片附着于刀的表面上,用毛笔蘸水把切 片取下放于盛水的培养皿中。将刀推回原处,转 动厚度推进器,用毛笔蘸水润湿材料切面及刀刃, 再拉刀柄,往返推拉,可得到许多厚度均匀完整 的切片。若切片不成功,应检查切片刀是否太钝, 则应磨刀或换锋锐的切片刀,若切得太薄而破碎, 则逐渐增加厚度至能切得完整的薄片为度。注意: 夹持在材料固定器上的样品切面接近于固定器上 端时,必须注意防止切片刀刃碰撞固定器而损毁 切片刀。
7.2.2 粉末制片
用解剖针挑取样品粉末少许,置载玻片的中 央,加适宜的试液1滴,用针搅匀(如为酸或碱 时应用细玻棒代替针),待液体渗入粉末后,用 左手食指与拇指夹持盖玻片的边缘,使其左侧 与药液层左侧接触,再用右手持小镊子或解剖 针托住盖玻片的右侧,轻轻下放,则液体逐渐 扩延充满盖玻片下方。如液体未充满盖玻片, 应从空隙相对边缘滴加液体,以防产生气泡; 若液体过多,用滤纸片吸去溢出的液体,最后 在载玻片的左端贴上标签或书写上标记。
小 孢 子 囊 及 小 孢 子 微 形 态 差 异
十 三 种 卷 柏 大 孢 子 微 形 态 差 异
使用显微镜的注意事项
合理制片,盖玻片上不得有试液残留,避免污染 物镜及载物台,损伤镜头。 转动物镜转换器,由低到高逐级变换、选用合适 放大倍数的物镜观察。 使用40倍物镜时,可用细螺旋调节焦距,禁止用 粗螺旋调节;也不得移动载玻片。 根据观察物象,选择偏光条件确认特征。 用毕,应将最小物镜与通光孔相对,关闭光源, 罩好,收置起来。 显微镜的光学部分,只能用特殊的擦镜头纸擦拭。
1) 徒手切片法切片
一手持刀片,另一手拇指和食指夹持样品, 中指托着样品的底部,使样品略高出食、拇二指; 肘关节应固定,使样品的切面保持水平,刀口向 内并使刀刃自前向后切削,即可得薄切片。 操作时,材料的切面和刀刃须经常加水或50% 乙醇保持湿润,防止切片粘在刀片上。切好的切 片用毛笔蘸水轻轻从刀片上推入盛有水或50%乙 醇的培养皿中。

7、常用制片法 ——永久片制作技术
药材切片标本的制作方法较多。在药材鉴 定的研究工作中往往将其制成石蜡切片(永久 切片),因制成的石蜡切片外形较完整,厚薄 均匀,且可制得连续切片,观察时方便,又能 长期保存。但由于制片技术较复杂,费时太多, 不适用于日常检验。
常用制片法 ——临时制片技术
徒手切片或滑走切片法: 表面装片:为观察叶类、花类及全草类药材的叶 片、花冠、萼片、苞片等的表皮组织及其附属物 的特征。 解离组织装片:可清楚地观察比较坚硬的细胞组 织,如导管、纤维、石细胞等的形态。 花粉粒与孢子制片法:观察花粉粒、孢子等的形 态特征或构造,需用花粉粒与孢子制片法制片。 磨片法:观察矿物药或较坚硬的动物类药材如珍 珠、石决明及动物骨骼,可采用磨片法制片。
7.3.3 显微化学分析
丁香切片滴加3%氢氧化钠的氯化钠饱 和液,油室内有针状丁香酚钠结晶析出; 北柴胡横切片加无水乙醇-浓硫酸1:1液, 木栓层、栓内层和皮层显黄绿色至蓝绿色。
Байду номын сангаас 7.3.4 微量升华法
利用药材所含成分有升华现象,置显 微镜下观察结晶形状、色泽。如大黄,可 见菱状针状或羽状结晶。
7.3.5 成方制剂粉末装片
注意:
加热温度不能过高,以防水合氯醛试液沸腾, 使组织内带入气泡;加热时应将载玻片不断移 动,以免受热不匀而炸裂。透化后放冷,加甘 油乙醇试液l~2滴后加封盖片,贴上标签。冬日 室温较低时,透化后不待放冷即滴加甘油乙醇 液,以防水合氯醛结晶析出而妨碍观察。水合 氯醛试液能使已收缩的细胞膨胀,便于清楚地 观察组织构造;可溶解淀粉粒、蛋白质、叶绿 体、树脂、挥发油等,对草酸钙结晶无作用, 为观察草酸钙结晶的良好试剂。如需观察菊糖 等一些多糖物质则加水合氯醛试液不加热。
7.1 仪器和用具
仪器
生物学显微镜(最好具有2.5×或4×物镜头及偏光装 置)、显微摄影装置或显微描绘器、电脑联机装置及其图像 处理软件、滑走切片机、小型粉碎机、台式离心机、医用超 声仪等。
用具
放大镜、刀片、镊子、剪刀、解剖针 载玻片、盖玻片
7.1 仪器和用具
吸湿器(即玻璃干燥器改装成底部放入蒸馏水 加微量苯酚防霉,上部瓷板上置药材样品,利用 潮气润湿药材样品) 培养皿或小烧杯、酒精灯、试管,试管架、滴 管、玻璃棒、乳钵、绸布、滤纸、火柴等。
** 含挥发性成分的制剂
7.3.1.3 装片
选取薄而平整的切片置载玻片上,根 据所要观察的内容要求,滴加适宜的试 液1~2滴,盖好盖玻片,即可在显微镜下 观察。为防止较大的切片弯卷,可选取 理想的切片,用两张载玻片夹住,浸于 水中放置4小时使材料压平,放入95%乙 醇中固定,甘油装片观察。
透化
在载玻片上放有切片处滴加1~2滴水合 氯醛试液,置载玻片于酒精灯上方微微加 热,至边缘起小泡即停止加热,可继续补 充试液再加热,以不烧干为度,直至切片 透化完全为止。
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