功能：a 产生物体的第一次倒立实像。
b 放大作用
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目镜
分类
惠更斯目镜 补偿目镜 平场目镜 广角目镜
功能：a 将物镜形成的倒立实像变成正立的虚像。
b 将像再放大4-16倍。
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二、常用光学显微镜
普通显微镜 相差显微镜 暗视野显微镜 荧光显微镜 实体显微镜
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第三节 电子显微镜
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1932年德国人发明电子显微镜 分辨率：极限分辨率0.2-0.25nm，为光镜的1000
倍 透射电镜 （transmission electron microscope ） 超高压电镜 扫描电镜（scanning electron microscope ）
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莱卡倒置显微镜
生物显微技术应用第一章尼显康微镜E-600显微镜
相差显微镜
40年代制造出来，1953年诺贝尔物理奖 。 特点：能观察无色、透明、活细胞中的细微结
构。 优点：不需要对标本进行染色，这就避免了在
染色过程中由于化学作用可能引起的标本内部 结构的变化。 用途：相差显微镜可用于观察活细胞或未经染 色的切片。
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LSCM的生物学应用
细胞的三维重建 ：各类细胞骨架形态学分 析、染色体分析、细胞程序化死亡的观察、 细胞内细胞质和细胞器的结构变化的分析
细胞定量荧光测定 细胞内钙离子pH值和其它离子的动态分析 细胞胞间通讯和膜的流动性
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分辨率
分辨率是指能区分两个物点间最小距离 的能力。两物点间的最小距离称为分辨 距离。分辨距离越小，分辨率越高，也 就是分辨细微结构的能力越大。
普通光学显微镜分辨率的极限是0.2μm。 可把物体放大1500倍 。
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放大率
最终成像的大小与原物体大小的比值称 为放大率。
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第一节 光学显微镜
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一、光学显微镜的原理与构造
成像原理 光射到物体上，再从物体射入物镜、目镜，
最后射入观察者的眼睛，在此过程中成像 并放大。
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性能
分辨率： 放大率： 镜口率： 焦点深度： 镜像亮度： 视野亮度：
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暗视野显微镜
原理：暗视野显微镜的聚光镜中央有当 光片，使照明光线不直接进人物镜，只 允许被标本反射和衍射的光线进入物镜， 因而视野的背景是黑的，物体的边缘是 亮的。
丁道尔现象 应用：最适于观察微粒，能够观察到
0.004μm 以 上 的 微 粒 存 在 。 还 可 以 观 察 活体的存在以及活体的运动状态。
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课程基础
细胞生物学 分子生物学 免疫学
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细胞大小
微米(um)
1um=1/1000毫米(mm)
纳米(nm)
1nm=1/1000微米(um)
原核细胞：1—10μm
细菌：3—4μm
支原体：0.1μm
动物细胞：10—100μm
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受光源、景深和其它成像因子的影响， 放大倍率在60倍以下，解像效果较佳。
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三、显微镜的使用与维护：
调焦 从低倍镜开始。调焦时，先用粗动手轮将镜筒下降，为了
避免物镜压在标本玻片上，可从侧面窥视。 一边从目镜中观察视野，一边利用粗动手轮将镜筒徐徐上
升，待初见物像后，改用微动手轮作精细调焦，直至物像 最清晰为止。 从低倍镜转换为高倍镜。 使用油镜时将镜筒升高后再转换，最后按低倍镜的调焦方 法重新调焦。
第一章 显微镜
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显微镜发展简史
1590年前后，荷兰人Hans父子发明了放大10倍的原始显微镜。 十七世纪英国物理学家虎克和意大利解剖学家马尔皮基设计了
性能较好的显微镜用于植物学和医学研究。 40年代制造出来相差显微镜。 1932年德国人发明电子显微镜。 1960-1962制成超高压电镜。 80年代，研制成功扫描隧道显微镜。
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显微镜的维护
微调是显微镜机械装置中较精细而又容易损坏 的元件，拧到了限位以后，就拧不动了。此时 决不能强拧。否则，必然损坏。调焦时，遇到 这样情况，应将微调退回3~5圈，重用粗调调焦， 待初见物像后，在改用微调。
使用高倍镜观察液体标本时，一定要加盖玻片。 油镜使用后，一定要擦拭干净。 仪器出了故障，不要勉强使用。否则，可能引
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荧光显微镜
• 特点：光源为紫外线，波长 较短，分辨力高于普通显微镜； •用于观察能激发出荧光的结 构。 •用途：免疫荧光观察、基因 定位、疾病诊断。
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实体显微镜
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用途：立体显微镜主要是用来观察不透 明的物体或生物标本的外部形态。
起更大的故障和不良后果。
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第二节激光扫描共聚焦显微镜
Laser Scanning Confocal Microscope，LSCM
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LSCM原理
用激光作扫描光源，逐点、逐行、逐面快速扫 描成像，有较高的分辨力，大约是普通光学显 微镜的3倍。
可以获得样品不同深度层次的图像，对较厚的 样本进行无损伤的系列"光学切片"，得到其各 层面的信息。这些图像信息都储于计算机内， 通过计算机分析和模拟，就能显示细胞样品的 三维立体结构。
总放大率=物镜放大率×目镜放大率
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显微镜的构造
光学系统 机械系统
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光学系统
物镜 目镜 照明装置 滤光装置
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物物镜
油浸系物镜
复消色差物镜
水浸系物镜
平场物镜