PCR实验室的质量体系文件
• 检测项目的性能验证； • 项目检测的SOP; • 仪器和设备的操作SOP； • 仪器和设备的维护SOP； • 人员的技术档案； • 各种记录表格；
表格记录
仪器设备的维护校准SOP
• 日维护 • 周维护 • 定期维护 • 剂量单位校准 • 厂家校准
人员的技术档案记录
④ 不再出现； ⑤ 纳入标准；
理的“精髓”。
质控规则的符号及其定义
符号
定义
• 12S • 13S • 22S • R4S
一个质控测定值超出±2s控制限。 一个质控测定值超出±3s控制限。 两个连续的质控测定值同时超出+2s或－2s控制限。 同一批测定中，两个不同浓度质控物的测定值之间的
差值超出4s控制限。
合要求、要猜到病原体等；
第49-51页
室间质量评价
• 为客观比较一个实验室的测定结果与靶值 的差异，由外单位机构，采取一定的办法， 连续和客观地评价实验室的测定结果，发 现误差并校正结果，使各实验室之间的结 果具有可比性，这是对实验室操作和实验 方法的回顾性评价，而不是用来决定在实 时的测定结果的可接受性。
室间质评的档案袋
• 申请表； • 接收记录； • 保存记录； • 实验记录； • 结果上报表； • 结果汇报表； • 分析和改进内容；
Next
质控规则
• 质控规则的功能：判断测定批的失控还是 在控；
• 失控处理：
① 查出原因； ② 采取措施； ③ 保证消除；
防止同样的问题出 现第二次是质量管
• Levey-Jennings质控图法：稳定条件下，20 个室内质控结果不应有多于1个结果超过 2SD限度；在1000个测定结果中超过3SD的 结果不多于3个。
“即刻法”
• 在刚开始进行质控时，可以采用“即刻法” 进行质控，当日常有效测定次数超过20次 时，转入使用Levey-Jennings 质控图结合 Westgard多规则质控的方法进行质控。
临床基因扩增实验室 质量管理体系的建立
2013.10.21
From
福建省临床基因扩增检验实验室 规范化培训暨技术人员培训班
卫生部临床检验中心 李金明
实时荧光定量PCR
模板起始浓度越高，荧光信号强度达 到域值所需的循环数越少，即Ct值越 小。
荧光值

未知浓度样本
循环数n
荧光值 Ct值
模板起始浓度的常用对数 与Ct值呈负线性关系。
• 改善测定精密度的措施必须首先着重在最不精密的步骤上， 即对试剂准备、标本采集、核酸提取、测定方法和仪器操 作写出并严格执行“标准操作程序（SOP）”。
室内质量控制
• 标本采集、运送和保存中的关键点:
① 容器——密闭、一次性、无菌、无核酸酶及扩增抑制物； ② 采集方法——人员训练有素、防污染、保存时间和温度； ③ 合格标本——容器完整、量够、时间符合要求、外观符
Levey-Jennings质控图
Thank you！
The end.
• 一人一个档案； • 个人基本情况； • 培训证和上岗证； • 论文、著作、成果等； • 培训考核记录等；
仪器设备的技术档案
• 一台仪器一个档案； • 仪器的基本情况； • 仪器的使用说明书； • 仪器校准的记录； • 维修维护的记录等；
Next
室内质量控制
• 由实验室工作人员采取一定的方法和步骤，连续评价本实 验室工作的可靠性程度；旨在监测和控制本实验室工作的 精密度，提高本实验室常规工作中批内和批间样本检验的 一致性，以确定测定工作的结果是否可靠、可否发出报告 的一项工作；
已知浓度系列标准品
循环数n
标准曲线
log起始浓度
无基因无核酸的重要性
• 严格分区（一区→二区→三区）； • 开窗通风； • 用次氯酸钠擦洗地面和台面，甚至墙面； • 增长紫外照射的时间； • 用75%乙醇空中喷雾； • 实验前的处理程序和实验后的处理程序；
核酸污染的来源
• 临床标本中存在的大量待测微生物 • 科研中得到的质粒克隆 • 以前分析研究的特定微生物 • 大量存在于实验环境中的特定微生物 • 以前扩增产物的残留污染。这也是PCR实验
室最容易产生的，将造成假阳性的“污 染”。
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质量体系文件的编写
• 基本原则：最有效+符合实际； • 三大特性：
①法规性：一旦批准必须认真执行； ②唯一性：一个检验活动只能有唯一的操作程序； ③适用性：要符合实际，具有可操作性；
• SOP包含的内容：5W+1H； • SOP呈现方式：图片+文字；
• 41S 四个连续的质控测定值同时超出+1s或－1s控制限。 • 7T 七个连续的质控测定值呈现一个向上或向下的趋势变
化。
• 10X 十个连续的质控测定值同时处于均值的同一侧。
质控方法
• “即刻法”和Levey-Jennings质控图法 • “即刻法” 的实质是一种统计学方法，即
Grubs异常值取舍法 ；只要有3个以上的数 据即可决定是否有异常值的存在。