? 方法评价：
– 特异性易受影响； 敏感性不高。
? 应用：
– 多用以测定 抗体的含量 （效价、滴度 ）。 –肥达氏反应 、外斐氏反应 、交叉配血试验 。
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 弃掉0.5
菌液 1
2 3 45 6 7
结 果
试管凝集试验原理
? 结果观察：观察管底是否有凝集现象。
①完全凝集（＋＋＋＋）：凝集块完全沉于管底，液体澄清。 ②75%凝集（＋＋＋）：凝集块沉于管底，液体稍混。 ③50%凝集（＋＋）：凝集块沉于管底，液体混浊。 以上结果均为阳性，均出现肉眼明显可见的凝集。
?活性炭： ?SPA：
二、间接凝集反应类型
根据致敏用的试剂和反应方式分为：
1.(正向)间接凝集试验 （indirect agglutination test)
2.反向间接凝集试验 (reverse indirect agglutination test )
3.间接凝集抑制试验 (indirect agglutination inhibition
第五章 免疫凝集试验 (agglutination test)
第一节 概述
? 定义： 颗粒性抗原(可溶性抗原与载体颗粒
结合成致敏颗粒后)与相应抗体发生特 异性反应，在适当电解质存在下，形成 肉眼可见的凝集块。
? 发生机制：特异性；分两阶段进行。 ? IgM的凝集作用＞IgG 。 ? 不完全抗体：与相应抗原结合，但不形
?RBC为载体 ： ?动物，或人的“ 0”型血
RBC ?醛化红细胞 ：
?用戊二醛处理，成团， 不易摇散；吸附大，耐温， 耐冻融。 ?致敏红细胞保存时间短， 易变脆、溶血、被污染， 因此在致敏前醛化。 ?致敏醛化红细胞： 用Ag/Ab 直接或化学联结，与 RBC作用，
?优点：敏感度比直接凝集反应高 2～8倍，亦 明显高于沉淀反应。
?载体(carrier):试验体系中与免疫无关的颗粒。 ?对载体的要求：
?不溶于水，在NS中性质稳定，无化学、血清学活性。 ?大小均一，短时间内不致下沉。 ?能够直接吸附或偶联抗原或抗体，且不影响其活性。
?致敏：抗原(或抗体)偶联于颗粒表面的过程。
?致敏颗粒（sensitized particle) :吸附有已知抗 原或抗体的颗粒。
载体 可溶性抗原 致敏
致 敏 颗 粒
NS
凝 集 颗 粒
一、常用载体种类及其处理方法
?红细胞： 新鲜红细胞吸附蛋白质的能力差。一
般先醛化后应用。
?聚苯乙烯胶乳颗粒： 可物理吸附蛋白质；常制备带有化学
活性基团的颗粒。
④25%凝集（弱阳性）：液体混浊。 ⑤阴性：无变化。
? 结果判读： 以产生明显凝集现象（“＋＋~＋＋＋”）的最
高稀释度作为Ab的效价（含量）。
第三节 间接凝集反应
(indirect agglutination test) ?间接凝集试验：用人工方法将可溶性抗原(或 抗体）吸附或偶联于载体上，使之成为致敏 载体颗粒，再与相应抗体（或抗原）作用， 在适宜电解质的参与下，出现的凝集现象。
其中的抗原 (agglutinogen) ：凝集原(细菌,RBC 等) 抗体(agglutinin) ： ：凝集素
? 常用方法 ：
–玻片法： –试管法： –微量血凝反应板法：
直接凝集反应
?凝集原
?凝集素
一、玻片凝集试验 (slideagglutination test)
? 玻片法：定性试验。 常用已知Ab，测定未知Ag(待检样本 )。
原理图
混 合
SPA
IgG
SPA- IgG
SPA- IgG待测抗原 凝集颗粒
待测抗原
二、间接血凝试验 (被动血凝试验 )
（indirect hemagglutination test)
? 原理
将可溶性抗原 (或抗 体）吸附人的“ O”型血 红细胞或绵羊或家兔的 红细胞 ，制成致敏血红 细胞,与相应抗体（或抗 原）作用，在适宜电解 质参与下，出现红细胞 凝集现象。
成可见的凝集现象。主要为IgG 类抗体。
凝集反应的类型：
? 直接凝集反应。 ? 间接凝集反应。 ? Coombs 试验。
凝集反应的应用：
? 抗原或抗体的定性检测 ? 抗体的半定量检测
第二节 直接凝集反应 （direct agglutination test）
? 定义： 颗粒性抗原 + 相应抗体→肉眼可见的凝集块
? 结果判读： 已知Ab ＋ 未知Ag → 凝集，阳性 (+)。 不凝集，阴性 (-)。
? 方法评价： 特异性强; 简便、快速 ;敏感度低。 ? 应用：ABO 血型鉴定。
细菌的鉴别与分型 。
ABO血型的鉴定
1.已知抗体
抗A
抗B
2.未知抗原 (待检RBC)
3.结果：
凝集
不凝集Biblioteka 4.结论： 受检者血型为：A型
test )
4.协同凝集试验 (coagglutination test )
载体 可溶性抗原
致
敏
致敏
颗 粒
用特异性抗原致
敏载体，检测标
NS
本中的相应抗体
待测抗体
的方法。
凝
集
结果判读：凝集，阳性(+)。 不凝集，阴性(-)。
颗 粒
已知抗体
载体
＋
致敏
致 敏 颗
粒
用特异性抗体
致敏载体，检 凝
NS
测标本中的相
细菌的鉴别
? 材料：玻片1张/1人，待检菌，已知诊 断血清，接种环
? 方法：
NS＋待检菌＋诊断血清 NS＋待检菌
轻摇玻片，1～2分钟后观察
? 结果判定：出现乳白色凝集块属阳性反应 ? 结 论：待检菌为？？
二、试管凝集试验 (tube agglutination test)
? 试管法：半定量试验。 常用已知Ag，测定未知 Ab(待检血清)。
集 颗
应抗原的方法。 粒
待测抗原
结果判读：
凝集，阳性(+)。
反向间接凝集试验不凝集，阴性(-)。
待测抗原
已知抗体
＋
特异 结合
NS
用抗原致敏载体及相 应抗体作为诊断试剂， 用于检测标本中是否 存在与致敏载体相同 的抗原。
间接凝集抑制试验
抗 原 抗 体 复 合 物
致敏颗粒 无凝集颗
粒为阳性
待测抗原
已知抗体
＋
无结合
NS
间接凝集抑制试验
有凝集颗
粒为阴性
抗 原 抗 体 分 散 致敏颗粒
协同凝集试验
? 原理 SPA能与血清中的IgG类 抗体的Fc段非特异性结合， 而两个Fab段暴露在葡萄球 菌菌体表面，仍然保持正 常的抗体活性，与特异性 抗原相遇时，能出现特异 的凝集现象。
?应用
微生物的快速 诊断、定种及 定型；以协助 传染病的早期 诊断。