验证方案 • 进行方法预验证实验并完善方法验证参数及接受标准 • 编写、审核及批准最终分析方法验证方案 （QA 批准）
分析方法验证 （GMP 实验室）
• 按已批准的分析方法验证方案，进行方法验证实验 • 计算、审核验证结果 • 编写、审核、批准分析方法验证报告包括相关的典型色谱图 • 完善、审核、批准并放行最终的分析测试方法
• 空白溶剂 / 辅料溶液 Diluent / Placebo Solution • 原料药 / 制剂中掺入杂质 • 强力降解试验 Stress Studies (∼10% degradation)
溶液：热、酸及碱水解、氧化、光照 固态：高温、高湿、光照 • API 主峰不受溶剂、辅料以及任何杂质峰干扰 • API 主峰纯度分析 (purity: NLT 990 or purity angle < purity threshold)
HPLC含量测定方法验证 （续）
耐用性 Robustness
• HPLC 系统参数变化
流动相比例 (± 10%) 缓冲液的 pH 值 (± 0.2) 流速 (± 0.2 mL/min) 柱温 (± 5°C)
Meet SS Criteria
• 样品制备的参数变化
振摇/超声时间 (± 5 min) 萃取溶剂的比例 (± 10%) 样品过滤的影响 对照品及样品溶液的稳定性 (0, 12, 24, 48 hrs)
使用药典专论 HPLC 杂质分析方法 药典制剂专论 Compendial DP Monograph
• 系统适用性 System Suitability • 方法重现性 Method Reproducibility • 方法准确性 Method Accuracy • 溶液稳定性 Solution Stability
原料药的主峰与从生产工艺中产生的所有已知和未知杂质峰相分离。 如果此方法将用于稳定性试验研究，那么必须进行强力降解试验来证明
所有降解产物也能与原料药主峰分离并表明主峰是纯峰，即此方法具稳 定性指示能力。
分析方法确认 Analytical Method Verification
使用药典专论 HPLC 含量测定分析方法 药典制剂专论 Compendial DP Monograph
线性 Linearity
• 对照品溶液（5-6个浓度），做线性回归 分析（面积响应与浓度） • R2 ≥ 0.998; 报告 Y-Intercept, Slope, Linearity Equation & Chart
HPLC含量测定方法验证 （续）
方法准确性 Method Accuracy
• 辅料混合物与对照品混合 (3 x 50%, 3 x 100%, 3 x 150%) • 回收率 Recovery：98.0-102.0%，报告 RSD
方法精密度 Method Precision
• 报告 RSD (3 x 50%, 3 x 100%, 3 x 150% 共9个样品 或 6 x 100%) • RSD: NMT 1.0% (DS); NMT 2.0% (DP) 注：含量均匀度 (Content Uniformity) 结果与 6 x 100% 平均值比较，NMT 2%
Meet SS Criteria
• 样品制备的参数变化
振摇/超声时间 (± 5 min) 萃取溶剂的比例 (± 10%) 样品过滤的影响 对照品及样品溶液的稳定性 (0, 12, 24, 48 hrs or longer)
偏差 Diff: NMT 15% 溶剂谱类似
GC残留溶剂方法验证
系统适用性 System Suitability
•
或
• 原料药 / 制剂中掺入杂质对照品 （6 x100%），单个杂质RSD: NMT 10%
中间精密度 Intermediate Precision
• 由第二个分析员在不同天，用不同的仪器及不同批号的柱子重复方法精密度试验
• 总杂RSD: NMT 10% ，或 单个杂质RSD: NMT 10%
• 两人结果偏差：NMT 15%，杂质谱类似
振摇 / 超声时间 萃取溶剂的比例 样品过滤的影响
分析方法确认 Analytical Method Verification
使用药典专论 HPLC 杂质分析方法 药典原料药专论 Compendial API Monograph
• 系统适用性 System Suitability • 方法重现性 Method Reproducibility • 方法准确性 Method Accuracy • 溶液稳定性 Solution Stability • 专属性 Specificity
结果与转移方实验室获得的实验结果一致
• 系统适用性 System Suitability 对于杂质分析方法需包括方法灵敏度
• 方法重现性和准确性 Method Reproducibility and Accuracy 使用同批次的原料药或制剂成品药
分析方法确认 Analytical Method Verification
溶液：热、酸及碱水解、氧化、光照 固态：高温、高湿、光照 • 所有杂质能被检测到并能互相分离，而且也能与溶剂、辅料以及主峰分离 • API 主峰纯度分析 (purity: NLT 990 or purity angle < purity threshold) • 质量平衡评估 Mass Balance Evaluation • 稳定性、降解途径及色谱图
分析方法转移、确认和验证
2015 年 3月6日
分析方法建立流程图
分析方法
方法 开发
项
工
工
目 启
艺 放
方法
艺 转
动
大
评估
移
R&D
方法开发报告
方法 验证
验 证 批 生 GMP 产
验证方案 验证报告
分析方法转移 Analytical Method Transfer
来自于不同公司的分析方法，如供应商 来自于同一公司但不同地点实验室的分析方法 来自于同一公司同一地点不同部门实验室的分析方法 确保接受方实验室能够可靠的测定，并且所得到的实验
HPLC含量测定方法验证
系统适用性 System Suitability
• 系统实用性溶液（1针）：T ≤ 1.5; N ≥ 2000; R ≥ 2.0 (method dependent） • 对照品溶液（5针）：RSD ≤ 1.0% (DS); RSD ≤ 2.0% (DP)
专属性 Specificity (PDA Detector: 200-400 nm)
• 系统适用性 System Suitability • 方法重现性 Method Reproducibility • 方法准确性 Method Accuracy • 溶液稳定性 Solution Stability
• 专属性 Specificity （辅料无干挠及强力降解实验） • 耐用性 Robustness （样品制备参数变化）
使用药典专论 HPLC 含量测定分析方法 药典原料药专论 Compendial API Monograph
• 系统适用性 System Suitability • 方法重现性 Method Reproducibility • 溶液稳定性 Solution Stability • 专属性 Specificity
专属性 Specificity (PDA Detector: 200-400 nm)
• 空白溶剂 / 辅料 / 每个杂质鉴别 Diluent / Placebo / Each Imp ID • 原料药 / 制剂中掺入杂质 • 强力降解试验 Stress Studies (∼10% degradation)
HPLC杂质分析方法验证（续）
线性 Linearity
• 对照品混合溶液（6个浓度，LOQ-150%），各成分做线性回归分析（面积响应与浓度） • R2 ≥ 0.99; 报告 Y-Intercept, Slope, Linearity Equation & Chart • 杂质和 API 斜率之比 = 校正因子 （0.9-1.1 之间，杂质用主峰定量时不用校正）
NMT 1.0% (DS) NMT 2.0% (DP)
HPLC杂质分析方法验证
系统适用性 System Suitability
• 系统实用性溶液（1针）：T ≤ 1.5; N ≥ 2000; R ≥ 1.5 (method dependent） • 对照品溶液（6针）：每个成分 RSD ≤ 5.0% each
• 专属性 Specificity （辅料无干挠及强力降解实验） • 耐用性 Robustness （样品制备参数变化）
振摇 / 超声时间 萃取溶剂的比例 样品过滤的影响
分析方法全验证 Full Method Validation
分析方法验证准备
• 基于预设定的质量标准，编写及审核分析方法草案 • 试验并完善强力降解试验条件 • 准备标准品包括杂质标准品 • 根据方法验证的要求，基于预设定的质量标准，编写及审核分析方法预
线性 Linearity
• 对照品混合溶液（6个浓度，LOQ-150%），各溶剂做线性回归分析（面积响应与浓度） • R2 ≥ 0.99; 报告 Y-Intercept, Slope, Linearity Equation & Chart
GC残留溶剂方法验证
检测限 LOD
• 在低浓度被测物的色谱图上比较其响应信号与仪器的噪音，信噪比 S/N: 3:1 or 2:1
从生产工艺中产生的所有已知和未知杂质峰应能检测并能互相分离而且 与原料药主峰也能很好分离。
如果此方法将用于稳定性试验研究，那么必须进行强力降解试验来证明 所此方法也能检测和分离所有降解产物，并且主峰是纯峰，即此方法具 稳定性指示能力。