唾液淀粉酶最适pH值的测定实验
小组成员: 孙天纬李敏媛唐芳娇蒋雅莉
实验目的：
1.掌握设计性实验的基本思路，并完成设计报告。

2.掌握唾液淀粉酶最适pH的测定原理和方法。

3.熟悉影响酶促反应速度的因素。

实验原理：
1．酶促反应速度受到许多因素的影响，如温度、pH、激活剂和抑制剂等。

上述诸因素对唾液淀粉酶催化淀粉水解反应速度的影响，可用定性或定量的反应来观察。

利用碘与淀粉反应的颜色随产物的量的增加而加深的特点，来衡量酶促反应的速度的快慢。

蓝色—紫红色—黄色，颜色由蓝变黄，表示酶促反应速度由慢到快。

此为定性观察。

2.进一步利用郎伯—比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液的浓度符合一定的比例关系。

由于在被水解的程度也不一样。

当唾液淀粉酶不能将完全水解时，淀粉遇碘呈蓝色，经查阅文献，吸收波长位于660nm处。

不同pH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同，吸光度值也不同。

因此，通过测量660nm处的吸光度值，可以了解pH对酶促反应的影响，吸光度最小的溶液其pH 即为唾液淀粉酶的最适pH。

实验步骤：
1.缓冲溶液的配制。

取7支试管进行编号1-7，分别按下表加入试剂，再加蒸馏水稀释到10mL。

2.淀粉用量的确定用量：mL
*选择颜色最浅的一支试管
3.唾液的采集。

先给备取者一杯纯净水让其漱口，将漱口液吐掉,让备取者下嘴唇抵住干净的杯子口，并做咀嚼运动，这时，备取者的唾液会不停地流出来。

4.唾液的稀释。

取7支试管，进行编号1＇-7＇,进行稀释。

5.唾液稀释倍数的选取。

另取7支试管，分别编上A-G号，各取上述稀释的唾液各0.1ml，分别加入相应编号的试管里，向7支试管内同时加入0.1ml的2.5g/L的淀粉溶液和0.9mL的7.0pH缓冲液，振荡混匀后放入37 ℃恒温水浴7.5分钟后取出，滴加2碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变化适中的一支，记录稀释倍数。

结论：使用稀释10倍的唾液的试管的颜色适中。

6.最适pH的测定。

另取9支试管,进行编号,按下表加入试剂。

进行测定。

7.结果分析
当在最适pH下反应时,淀粉被水解最完全,剩余最少,颜色最浅,吸光度最小,所以吸光度最小对应的pH为最适pH。

思考讨论:
1.
2.
参考文献
1.吴耀生主编.医学生物化学与分子生物学实验指南.北京：人民卫生出版社.2014。