发展简史 光学显微镜简称光镜（light microscope，LM）


16 世纪末荷兰人发明光镜 1665 年英国人胡克命名“细胞” 意大利人马尔比基观察了脾、肺、肾、表皮 荷兰人列文虎克发现红细胞、精子、肌纤维；格拉 夫发现卵泡 1801 年法国人比沙提出“组织”概念


细胞学说
德国人施万、施莱登（1838、1839）提出了细胞学 说. 内容：细胞是一切动、植物体的基本结构和功能单 位；细胞内进行着复杂的化学反应；新细胞由原有 细胞产生 由于显微技术的提高、组织切片机的发明、生物标 本的固定和染色方法的出现，19世纪下半叶成为组 织学和细胞学发展的黄金时代。到19世纪末人们已 能较正确地描述细胞结构。




用硝酸银将神经细胞染为黑色(镀银染色法) 用醛复红将弹性纤维和肥大细胞的分泌颗粒染为紫色 活体染色，即将无毒或毒性小的染料经静脉注入后， 再取材制成切片观察。如注入的台盼蓝(trypan blue) 可被肝、脾等器官内的巨噬细胞吞噬 。 在组织化学术,常使用荧光染料染色或作为标记物,用 荧光显微镜观察


构成：细胞群和细胞外基质 细胞：机体结构和功能的基本单位，成人约有1015 个、200 余种 细胞外基质：由细胞分泌形成 类型：上皮组织、结缔组织、肌组织和神经组织； 组织以不同的种类、数量和方式组合形成器官；若 干功能相关的器官构成系统
意义

促进了生理学的进步 是病理学的基础 促进人类对自身的深入了解
组织学绪论
研究内容

组织学（histology） 研究机体微细结构及其相关功能的科学 研究水平：组织、细胞、亚细胞和分子 比较组织学(compare histology) 研究不同动物微细结构及其相关功能的科学
肌动蛋白 肌球蛋白 细肌丝 粗肌丝 肌球蛋白杆 肌球蛋白头 肌钙蛋白
组织（tissue）




当代组织学
新仪器、新技术的发明和应用，如图像分析仪、共 焦激光扫描显微镜、流式细胞仪等。 免疫组织化学技术能显示细胞和组织中的蛋白质， 提供其定位、定性和定量的信息，可获知亚细胞结 构的蛋白组成、空间分布关系及在细胞不同时期的 变化。 原位杂交技术能在切片上特异性地显示器DNA与mRNA 片断，提供细胞所含基因及其表达的信息。 免疫组织化学技术和原位杂交技术将组织学引入分 子水平。 组织工程学技术拓展了组织学的临床应用前景，在 体外模拟培养皮肤、软骨、骨等器官和组织。
与无色的品红硫酸复合物(即希夫试剂)结合，形成紫红色反应 产物]

脂类：锇酸固定染色，呈黑色[用甲醛固定，冷冻切片，
用油红O、尼罗蓝或苏丹类脂溶性染料染色，使脂类(脂肪、类 脂)呈相应颜色 ]
PAS反应，小肠上皮杯状细胞的粘原颗粒

核酸：福尔根反应显示DNA，甲基绿－派若宁反应同 时显示DNA与RNA[切片先经稀盐酸处理，使DNA水解；再用来自组织化学
组织化学术（histochemistry）为应用化学、物理、 生物化学、免疫学或分子生物学的原理和技术，与 组织学技术结合而产生的技术，在组织切片显示某 种物质的存在和分布状态及定量信息。 分类： 一般组织化学术 免疫组织化学术

原位杂交术
一般组织化学术：组织中的某种结构成分与所加试剂 发生化学反应并呈现某种颜色，在显微镜下可观察到 糖类： 用PAS（过碘酸希夫）反应显示多糖和糖蛋白， 呈紫红色[糖被强氧化剂过腆酸氧化后，形成多醛；后者再


电子显微镜简称电镜（electron microscope, EM）

1932 年 德国人卢斯卡和科诺尔发明电镜，使分辨 率从0.2μm提高到 0.2nm 约二十年后出现超薄切片术（50~80nm）同时，以观 察物体表面结构的扫描电镜问世组织学进入第二个 黄金时代。 可观察超微结构（ultrastructure）：即细胞膜、 细胞器、染色体等亚细胞结构，组织学从细胞水平 飞跃到了亚细胞水平。






学习方法
审视角度
组织水平：层次顺序、特征性结构和细胞
细胞水平：主要细胞的分布、结构特点（含重要细 胞的超微结构）及功能

形态和结构相统一 结构是功能的基础，功能是结构的必然表现 培养观察能力：重视实习课和图像观察

培养空间思维能力：将二维图形还原为三维构像


技术简介
光镜技术 石蜡切片术（paraffin sectioning）：取材、固定、脱水、 （臵换）、包埋、切片（5～10 µ m 厚）、贴片、脱 蜡、染色 苏木精- 伊红染色法（hematoxylin-eosin staining， HE染色法）：苏木精为碱性染料，使染色质和核糖体 着紫蓝色；伊红为酸性染料，使胞质和细胞外基质着 红色 嗜酸性（acidophilia); 嗜碱性(basophilia) 中性（neutrophilia） 特殊染色：

电镜技术 透射电镜术（TEM）
用于观察组织细胞的超微结构，需制备超薄切片 （50 ~80nm 厚）并经电子染色，根据电子束在不同 结构上被散射程度的差异表现为电子密度高（黑或深 灰色）和电子密度低（浅灰色）

扫描电镜术（SEM）
用于观察组织细胞表面结构，具有真实的立体感， 无需制备切片

透射电镜术：组织块(lmm3)用戊二醛与饿酸两次固 定，脱水后树脂包埋，用超薄切片机切片，再经醋 酸铀和拧橡酸铅染色。电子束射落到切片时，随细 胞构成成分的密度以及吸附重金属铀、铅、饿的程 度不同，而发生相应的电子散射。当电子束技射到 密度大、吸附重金属多的结构(如溶酶体)时，电子 被散射得多，因此，射落到荧光屏上的电子少而呈 暗像，电镜照片上呈黑或深灰色，习惯称该结构为 高电子密度( electrondensity)；反之呈浅灰色， 称低电子密度 扫描电镜术：不需要制备切片，组织块(约0.3cm大 小)用戊二醛和饿酸固定后，经脱水、干燥，再于其 表面喷镀薄层碳与金属膜。
希夫试剂处理，形成紫红色反应产物。如要同时显示DNA和RNA， 则用甲基绿-派若宁反应。甲基绿与细胞核DNA结合呈蓝绿色， 派若宁与核仁及胞质内的RNA结合呈红色]