多巴胺的测定
神经递质多巴胺的测定,采用荧光分光光度法
荧光法测定大鼠脑组织和血液中单胺类物质的方法探讨：
1、主要仪器：荧光分光光度计（日本产，SHIMADZURF-5301PC）；组织高速分散器（上海产，XHF-1）；冷冻离心机（上海产，TGL-16G）；恒温水浴箱；旋涡混合器等。

2、试剂：剂来源除标明外均为国产分析纯级，试剂配制使用双蒸水。

（1）标准品：重酒石酸去甲肾上腺素；盐酸多巴胺；5-羟色胺硫酸肌酐；5-羟吲哚乙酸为瑞士Fluka产品。

（2）混合标准储存液的配制：分别精确称取上述标准品各50mg，用0.01N盐酸配制成100ml混合标准储存液（500ugml），置4℃冰箱保存，临用前稀释成1.25ugml应用液。

（3）酸性正丁醇：每升正丁醇加入浓盐酸0.85ml，混匀。

（4）正庚烷。

（5）0.1%OPT-10N盐酸溶液：邻苯二甲醛为瑞士Fluka产品，临用前用10N盐酸稀释成0.001%OPT-10N盐酸溶液。

（6）0.25%半胱氨酸溶液：用0.1N盐酸新鲜配制。

（7）碘试剂：配制0.02N碘液和5%碘化钠（以70%乙醇溶解），临用前以1∶1体积比混合。

（8）115M，PH=7.2的磷酸盐缓冲液。

（9）0.33M碳酸氢钠溶液。

（10）碱性亚硫酸钠溶液：25%亚硫酸钠与5N氢氧化钠在临用前以1∶9体积比混合。

（11）0.1MEDTA试剂：用1M醋酸钠溶液配制，以10N氢氧化钠调节H至7.0。

3、实验方法：
⑴标本处理：大鼠断头处死，立即取血及脑组织。

脑组织用冰生理盐水冲洗，去除血膜、嗅球和小脑，沿脑中线剖开，取一半脑组织吸干水分称重，加入10倍体积的冰酸性正丁醇，用组织分散器匀浆备用。

血液静置凝固后用冷冻离心机分离血清，立即加入10倍体积冰酸性正丁醇摇匀。

⑵提取过程：同时制备标准管和空白管，与血、脑标本在相同条件下按下图流程进行提取，获得水相A和水相B。

⑶NE、DA的测定步骤：各管取水相A0.5ml，按下列流程进行操作：
①水相A0.5ml＋115M磷酸盐缓冲液1.5ml＋0.1MEDTA0.4ml＋碘液0.2ml
②混匀、静置3mn＋碱性磷酸钠（新配）0.4ml
③混匀、静置3mn+5N醋酸0.4ml
④混匀，80℃水浴，冷却
⑤测NE荧光测度，激发波长为382488
⑥继续沸水浴20mn，冷却。