酶法提取由于反应特异性强、条件温 和易获得、提取时间短、提取率高、绿色 节能等已引起广泛的关注，具有较大的应 用潜力，且随着对酶法技术的不断研究， 酶法与其他技术如超声波、超高压、微波 等技术的联用也将成为另一个热点研究方 向。
Thanks
2.纯化
将香菇粗多糖水溶解后用色谱仪分离， 干燥获得纯香菇多糖。
影响香菇多糖得率的因素：
1.复酶浓 度大于0.4%后提取增加率趋于平缓，因此，最佳复合酶 的浓度为0.4%。
2.料液比对多糖得率的影响
当料液比在1∶15～l∶25之间多糖提取率增长较快， 继续提高料液比多糖提取率仍有升高，但提高速率 减小．因此最佳料液比为1∶20．
实 验 方 法 与 步 骤
香菇的复合酶法提取
分离纯化 1.分离提取
用0.5%NaOH初步提取，之后取清液，用透析袋透去 除杂离子，透析后去除杂蛋白，用活性炭脱色1 h，加 入95%乙醇，使溶液中乙醇的浓度达到75%进行醇沉．醇 沉过程中要将其保存在4℃冰箱中，保持24 h，离心15 min，取沉淀，置于真空干燥箱中干燥，即可得到香菇 粗多糖。
3.酶解时间对多糖得率的影响
由图可知,香菇多糖的提取率随酶促反应时 间的延长增加。
局限性：
酶的最佳温度及最佳pH值往往 在一个很小的范围内，为使酶活性 提高到最大值，必须严格控制酶反 应时的温度及pH，反应条件的微小 波动，都可能使酶的活性大大降低 ，因此对实验设备有较高的要求。
酶法提取的应用前景：
香菇多糖的提取方法：
热水浸提法
稀酸(碱)浸提法 微波法提取香菇多糖
超声波提取法 深层发酵培养提取法
酶解法
酶解法：
酶解法就是指在浸提的过程 中加入相应的酶来水解纤维素、 果胶、蛋白质分子等，以使多糖 从细胞中分离出来。
酶法提取较其他方法的优点
1.其作用条件温和。 2.通过酶法破壁去除杂质可以明显提高 提取率，缩短提取时间。 3.可减少能源消耗。 4.有效的保存多糖的生物活性。
复合酶提取香菇多糖：
复合酶 纤维素酶+木 纤维素酶+中 木瓜蛋白酶+ 中性蛋白酶+
瓜蛋白酶
多糖得率（%）12.90
性蛋白酶
7.02
纤维素酶
9.46
纤维素酶
6.34
香菇多糖的制备工艺
一.原料准备 二.提取 三.分离纯化
香菇的复合酶法提取
原料的准备和处理 香菇→烘干( 50℃) →粉碎→过筛→多 糖提取原材料。
香菇的复合酶法提取
主要实验试剂及仪器 真空干燥箱，离心机，恒温振 荡器，紫外可见分光光度计，傅里 叶变换红外光谱仪，纤维素酶，木 瓜蛋白酶
香菇的复合酶法提取
1 2 3 4
5
称取80目的香菇粉2g，放入到250mL的三角瓶中， 加蒸馏水35mL混合均匀后置于40℃水浴锅中，水浴 30min，调节pH值。 称取木瓜蛋白酶和纤维素酶按一定比例混 合，加入5mL蒸馏水溶解。 香菇溶液放在水浴中预热至酶解温度，将酶液加入 到香菇溶液中，在恒温振荡器上提取。 反应结束，将三角瓶放到沸水锅中， 10min沸水浴灭酶。 灭酶结束，冷却至室温，将酶提取液放入到离心 管中，调至4000 r/min离心，取上清液，即得到 酶提取多糖清液。
香菇多糖的复合酶法 提取
• 香菇多糖是香菇中分离出的
一种重要的具有生理活性的物质。
香菇多糖的作用：
香菇多糖具有抗病毒 、抗肿瘤，调节免疫 力、降血糖、抗氧化 等功能。有关香菇多 糖的研究，特别是结 构方面的研究已引起 国内外学者的高度关 注，并有望成为多糖 领域的研究热点。
与其他抗肿瘤药物相 比，香菇多糖几乎无 任何副作用，对胃癌、 鼻咽癌、直肠癌、乳 腺癌和慢性粒细胞白 血病等有抑制和防止 术后微转移的作用， 是目前已知最强的免 疫增强剂之一。