固 体 剂 型 回 流 提 取
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液 体 剂 型 液 液 萃 取
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固 体 剂 型 大 蜜 丸
——
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定性鉴别
色谱鉴别
2.纸色谱法： 显色：含硫酸的试剂不可 3.HPLC法： 快速、灵敏、微量
Rt值法，峰面积 or 峰高加大法（用内标）
经干燥滤纸滤过除去水分。
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2010版 乌头总生物碱+ 麻黄HPLC定量
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酸性染料分光 光度法 水相pH的选 择是分别取乌 头碱标准液， 以不同pH的 缓冲液进行试 验，pH3.0较 好。该条件下， 吸收度较大， 指示液空白对 照吸收度较小， 呈色稳定性好
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I 将此沉淀过滤洗净后溶于丙酮/甲醇直接比 色测定，换算生物碱的含量；
II 精密加入过量雷氏盐试剂，滤除生产的生物 碱雷氏盐沉淀，用滤液进行比色测定残存的过量 雷氏盐含量，间接计算生物碱的含量（雷氏盐剩 余比色法）。
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分光光度法
雷氏盐比色法
注意事项：
1.雷氏盐的水溶液室温可分解，应新鲜配制，沉
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分光光度法
酸性染料比色法
有机溶剂的选择：根据离子对与有机相能否形成氢键以及形
成氢碱能力的强弱，氯仿、二氯甲烷与离子对形成氢键，有
中等程度的萃取率，选择性好，是常用的提取溶剂 有机相中的水份的影响：微量水分使氯仿发生浑浊，且水相
中的过量染料影响测定结果。有机溶剂提取液可加脱水剂或
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分 光 光 度 法： 直 接 测 定 法
2010版药典：HPLC 定量黄连、炒白芍
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分 光 光 度 法： 直 接 测 定 法
2010版药典：HPLC 定量黄连
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分光光度法 离子对萃取比色法
范围：中药制剂中微量生物碱的含量测定
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分光光度法
酸性染料比色法
关键：介质的PH、酸性染料的种类、有机溶剂 pH值的选择：染料的性质及生物碱的碱性，生物 碱一元碱与溴百里酚蓝形成1：1的离子对，
pH(5.2~6.4)，二元碱形成1：2的离子对，
pH(3.0~5.8) 常用染料：溴百里酚蓝、溴甲酚绿、溴酚蓝、溴甲 酚紫
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7.检测器的选择：UVD 8.定量分析 8.1方法学考察：专属性，线性关系和范围，精密 度试验，重现性试验，稳定性试验 8.2含量测定：
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第五章 中药制剂中各类化学成分分析
第一节 生物碱类成分分析
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大纲要求
熟悉生物碱类成分结构特征及理化性质 掌握生物碱类制剂定性鉴别常用方法
含量测定
总生物碱含量测定 化学分析法
范围：处方药味少，内含成分简单的中药制剂 酸碱滴定法：生物碱碱性强弱，水/非溶液酸碱滴 定法
重量法：提取生物碱成沉淀 or 加生物碱沉淀试剂
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酸碱滴定法
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子对而大多具有碱性。
绝大多数具有显著的生理活性 中药材中生物碱多和植物酸性成分结合成盐的状态存在
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结构特征及理化性质


结构特征 CHON 理化性质
大多数生物碱 在酸性水溶液中可 以与某些试剂生成 不溶于水的复盐或 分子复合物，这类 试剂
物理性状：结晶性固体；液体、小分子固体（挥发性、升华性），多无色 溶解性：多样性 沉淀反应：生物碱沉淀试剂，定性（蛋白质、多肽、鞣质，避免假阳性） 显色反应：纯品，少用于制剂中生物碱分析 碱性：多呈碱性，碱性强成盐弱游离，供试品制备及分析方法建立及条件 选择的依据 紫外光谱特征：共轭体系，紫外吸收
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常见生物碱类成分的中 英文对照
小檗碱：berberine 士的宁：strychnine 乌头碱：aconitine 苦参碱：matrine 甜菜碱：betaine 麻黄碱：ephrine 水苏碱：stachydrine 吴茱萸碱：evodiamine
原理：一定PH介质中，有机碱与一些酸性染料或磺酸类、 酸类的阴离子，定量结合为有色离子对，离子对定量溶于 某些有机溶剂，一定波长下测定有机溶剂的或碱化后释放 出的染料的吸收度，按分光光度法计算有机碱的含量。
常用方法：酸性染料比色法和苦味酸盐比色法
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分光光度法
酸性染料比色法
适当PH介质中，生物碱可与氢离子结合成生物 碱盐的阳离子，而酸性染料在此条件下解离为阴离子， 生物碱盐的阳离子与染料阴离子定量地结合成有色的 配合物（即离子对），此离子对可定量地溶于某些有 机溶剂，测定有机溶剂的吸收度 or 经碱化后释放出 的染料的吸收度，即可计算生物碱的含量。
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定性鉴别
一般理化鉴别
沉淀反应多用：酸性条件，净化处理（除蛋白质、 多肽、鞣质），制剂中两种以上含生物碱药材（难 说明问题）
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马钱子主含生物碱。以番木鳖 碱(士的宁) 与马钱子碱(布鲁 生) 为主, 主效成分及毒性成 分。生物碱以盐的形式存在， 加浓氨水使生物碱盐转变成游 离碱，易溶于氯仿有机溶剂。 地龙含较多多肽、蛋白质等， 不溶于有机溶剂。
淀需在低温进行
2.中药制剂应先纯化处理 3.雷氏盐的丙酮or丙酮－水溶液吸收值，随时间 有变化，应尽快测定
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超声处理：
不同功率、频率 超声提取仪对含 量测定的结果不 同 在同一提 取器内由于摆放 部位不同提取效 果也不一致。
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含量测定
单体生物碱的含量测定
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含量测定
反映中药制剂中含生物碱的真实情况 提取、净化、分析测定均要准确
方法学考察内容
1.提取净化条件的考察 2.测定方法与条件的选择 3. 定量分析方法验证 3.1 专属性 3.2 线性关系考察 3.3 精密度试验
3.4 准确度试验 3.5 稳定性试验
3.6 测灵敏度及检测限的测定
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溶液后标示的“（1－10）”等符号， 系指固体溶质1.0g或液体溶质1.0ml 加溶剂使成10ml的溶液；未指明用 何种溶剂时，均系指水溶液；
重 量 法
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含量测定
分光光度法
样品分离、净化（化学法、柱色谱法、TLC法等） 直接测定法：不经过化学反应用生物碱物质自身 的吸收波长 范围：药物少，内含成分简单的中药制剂 离子对萃取比色法
C18)
硅醇基酸性大，生物碱可与其牢固键合，保留时间
延长，峰形变宽，拖尾，克服措施：
改进流动相
改进固定相
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含量测定
HPLC法：改进流动相： ①流动相中加入硅醇基抑制剂，竞争或部分阻断硅醇剂的 影响，最常用硅醇基抑制剂是二乙胺、三乙胺（TEA) 等。
②采用离子对色谱系统：合适的pH下，流动相中加入低
TLC
HPLC GC
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含量测定
单体生物碱的含量测定
TLC法：样品需纯化，吸附剂、展开剂及显色与鉴别相
似，要求更严格
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2010版药典：HPLC法定量黄连
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含量测定
HPLC法：反相HPLC法应用多（ODS or
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定性鉴别
色谱鉴别
1.TLC法： 常用载体：硅胶 常用展开剂：氯仿、苯及相应极性调节剂
硅胶弱酸性，形成盐至Rf值小、拖尾、复斑，碱性展开系统or碱性条件下
显色剂：改良碘化铋钾（橘红色） 供试品的制备：处方、剂型、存在状态、溶解性、共存成分的性质
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思考题
小儿清热片质量分析方案设计，请设计本品定性鉴别、 检查及含量测定分析方案。 定性鉴别：对照品、对照药材、鉴别方法（要不少于5味 药材） 检查：片剂的检查内容
含量测定：所测成分、提取净化方法、测定方法、含量
测定方法学考察内容
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名称 处方 制法 性状 鉴别 检查 浸出物测定 含量测定 功能与主治 用法与用量 注意 规格 贮藏
掌握生物碱类制定量分析常用方法
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问题
生物碱类成分的理化性质？
含生物碱类成分的中药制剂制备供试品时需考虑
的问题？ 含生物碱类成分中药制剂定性鉴别，以硅胶为载 体时，展开系统需注意的问题？ HPLC法分析制剂中单体生物碱的含量时，改进流 动相的常用方法？
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概述
定义 生物碱是生物界除生物体必须的含氮化合物 （如氨基酸、蛋白质和B族微生素等）之外的所有 含氮有机化合物，因其结构中氮原子上的未共享电
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进展
High performance capillary electrophoresis, HPCE
高灵敏度 高分离效率（比HPLC 高得多:理论板数在百万以上，最高可达 10,000,000/m ） 高速度 （一般一次分离仅需几十秒钟至数分钟） 所需样品量少:进样量 1-10 Nl,样品量 5ul -5 mL 检测 :在线检测 自动化: 自动进样，缓冲液交换，数据处理 重现性: 迁移时间 0.5% 运行成本较低 应用范围极广 有多种模式 可免于接触HPLC流动相的毒性和污染