,58.生物骨科材料与临床研究O rthopaedic B iomechanics M aterials A nd C linical S tudy2019年04月第16卷第2期doi: 10.3969/j.issn. 1672-5972.2019.02.014文章编号：swgk2018-12-00220论著•经验交流新西兰大白兔佐剂性关节炎模型的评价陈芳1刘琴1王丽平1陈利锋2张宜1杨鸿3*[摘要]目的建立一种简单、可行的兔佐剂性关节炎动物模型，并对其进行鉴定。
方法通过注射弗氏完全佐剂建立兔关节炎模型，测量造模前、后24 d致炎侧的足趾周长变化；摄X线片，观察其软组织肿胀及骨性变化；用滑膜组织H E染色方法观察组织病理学变化。
结果造模后24d致炎侧足趾周长较正常组肿胀明显Ci><0.05); X线片显示，与正常组比较，佐剂性关节炎动物模型组软组织肿胀明显，关节间隙变窄甚至模糊不清，关节面不平整；取材过程中发现模型兔关节腔有明显积液，模型兔足趾部解剖有明显微血管增生和炎症；滑膜组织HE染色后，正常组的滑膜细胞呈现“串珠样”规则排列，模型组的滑膜细胞排列紊乱并出现水肿。
结论成功建立了兔佐剂性关节炎动物模型，方法简便，成功率高，为进一步研宄提供良好的实验动物模型。
[关键词]佐剂性关节炎模型；病理学变化；评价[中图分类号]R593.22 [文献标识码]BEvaluation of adjuvant arthritis model in New Zealand rabbitsChen Fang1,Liu Q i n W a n g Liping', etal. 1 Department o f M edical Experiments; 2 Department o f I ntegrated Traditionaland Western Medicine, Central Theater Command General Hospital o f the Chinese People's Liberation Army, WuhanHubei, 430070; 3 Department o f Wound Repair, Liyuan Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University o fScience and Technology, Wuhan Hubei, 430077, China[Abstract] Objective To establish a simple and feasible animal model of r abbit adjuvant arthritis and to identify it. Methods The rabbits were injected complete Freund's adjuvan (CFA) to establish the model of a djuvant arthritis. Adjuvantarthritis (AA) rabbits the perimeters of t he hind toe were measured before and after modeling. The changements of softtissue and bone were assessed by X-rays. Pathological changes were observed by HE staining method in synovial tissue.Results Before modeling, the perimeters of the toe in four groups showed great difference compared with normal group(^O.OS). Through X ray pictures, compared with the normal group, the edema of model group soft tissue was moreserious, joint space loss or even obscured, articular surface is not smooth. During the extraction process, it was foundthat the model rabbit j oint cavity had obvious effusion, and the model rabbit toe was dissected with obvious microvascularhyperplasia and inflammation. After the synovial tissue HE staining, the synovial cells in the normal group showed abeaded pattern arrangement, and the synovial cells in the model group were disordered and edema. Conclusion Theanimal model of rabbit adjuvant arthritis is successfully established, the method is simple and the success rate is high,which provides a good experimental animal model for further research.[Key words] Adjuvant arthritis model; Pathological changes; Evaluation类风湿性关节炎（RA)是一种慢性自身性免疫性疾病, 其病因和发病机制尚未完全明确，在治疗方面亦无特效治疗 措施[1]。
全球有0.5%〜1%的人群受到此疾病的影响，该病 不仅致残率高，还可引起血管炎、心包炎等并发症，严重影 响患者的生活质量，造成巨大的家庭和社会负担B]。
寻找安 全、有效缓解RA病情的药物是目前治疗R A的重点[3]。
佐*基金项目：湖北省卫生和计划生育委员会科研项目(WJ2017H0054)作者单位：中国人民解放军中部战区总医院1医学实验科；2中西医结合科, 湖北武汉,430070; 3华中科技大学同济医学院附属梨园医院创面修复科，湖北武汉,430077剂性关节炎（adjuvant arthritis,AA)动物模型已经广泛用于类风湿性关节炎发病机制的研宄和评估潜在的抗类风湿性 关节炎药物的临床应用'而从报道文献来看，兔RA动物 模型普遍存在标准不一、流程各异和细节不清的问题，特别 是检测指标不统一等，甚至只是从肉眼来判断，诸多设计思 路也值得商榷。
如何复制出更接近R A的动物病理模型一直 成为困扰风湿免疫科研工作者的难题，因此寻找发病机制更 接近R A的动物模型具有重要的临床意义[a。
本研宄旨在建 立一个较完整的兔佐剂性关节炎动物模型，为研宄关节疾病 的发病机制、病理变化以及药物疗效、作用机制提供一个实2019年04月第16卷第2期生物骨科材料与临床研究O rthopaedic B iomechanics M aterials A nd C linical S tudy.59.验平台。
1材料与方法1.1实验动物健康新西兰大白兔16只，雌雄不限，体质量2.5〜 3.0 kg，清洁级，由武汉市新洲区万千佳禾实验动物养殖场提 供[SCXK (鄂）2017-0045]，本实验在广州军区武汉总医院医 学实验科动物实验设施内进行[SYXK (鄂）2014-0082]。
本实 验经中国人民解放军中部战区总医院（中国人民解放军武汉 总医院）伦理委员会批准进行[武总动（福）第2018038号]。
1.2实验试剂及仪器弗式完全佐剂（Sigm a公司，美国）；苏木素、伊红Y (水溶性)、无水乙醇、二甲苯、盐酸、包埋石蜡、中性树脂 等由国药集团提供；脱钙液（硝酸-甲醛液，按甲醛15mL，蒸馏水90mL，纯硝酸20m L比例来配制），硝酸和甲醛由 武汉市洁洋盛科技公司提供；病理切片机（LeicaRM2016 轮转式切片机，德国），组织摊烤片机（武汉俊杰JK-6生物 组织摊烤片机)，显微镜（尼康E100型生物显微镜)，倒置 荧光显微镜（奥林巴斯，日本)，软皮尺等。
1.3实验方法1.3.1A A兔模型的建立[6]新西兰兔16只，1只/笼进行分笼喂养，随机分组为正 常组（8只）和模型组（8只），饲养间温度18〜24°C，相 对湿度40%〜60%。
新西兰兔适应性喂养1周后，足爪剌 毛称体重，测足趾部的周径。
模型组初次诱导：将家兔背部 肩胛骨间及双膝关节以下的毛用脱毛剂脱去，每只新西兰兔 右跖部皮下注射弗氏完全佐剂0.4mL，同时注射背部4点，每点0.2mL。
加强诱导：注射后7d加强注射弗式完全佐剂 1次，每只新西兰兔右跖部皮下注射弗氏完全佐剂0.4 mL;背部任意2点，每点注射0.2 mL。
1.3.2 A A兔模型的鉴定1.3.2.1双侧足趾周径测定采用软皮尺于造模前、造模后24 d分别测定各组家兔 双足跖周径变化。
测量时注意取相同松紧度，于足趾肿胀最 高点进行测量。
1.3.2.2兔双足X线片变化随机抽取正常组和模型组兔各3只，于我院放射科行双 足斜位X线片。
并对其足趾软组织肿胀度、关节变化情况 进行评价。
1.3.2.3滑膜组织H E染色在取材之前对兔肉眼所见拍照，并在取材过程中拍下一 些典型的病变特征。
实验动物脱白处死，取踝关节，修剪整齐后，放入10%的甲醛固定液中，固定1周后，转入甲酸 脱钙液中，脱钙至骨质变软，用小刀切取软骨，修剪成0.5 cmx〇.4cmx〇.3cm,并包埋（梯度乙醇脱水、二甲苯脱水、透明，石蜡包埋切片，分别用苏木精-伊红染色)。
1.4统计学方法用SPSS 19.0统计软件进行统计学处理，数据以均数士 标准差表示，P<〇.〇5为差异有统计学意义。
2结果2.1 A A兔足趾周长的影响表1结果显示，造模前，各组间右足趾周长差异无统计 学意义C P>〇.〇5)，造模各组右足趾周长差异无统计学意义 (尸>0.05)，具有可比性；造模组足趾周长均较正常组明显升 高 C P<0.05)。
表1各组实验兔致炎侧足趾周长比较（元±0组别n(只）■致炎侧足趾周长(cm)造模前造模后正常组8 5.98 土0.14 6.08 土0.08模型组8 5.92 士0.127.96 土0.45*注：*与正常组比较，P<0.05。