特异性强
操作繁琐 操作简单，反应快 价格便宜，原料省 反应时间短，操作 简便快速，金标试 剂稳定 敏感性、特异性高 具有发展前景
斑点酶免疫渗透法 利用微孔膜的可过滤性，使反应溶液 自膜上迅速通过，从而完成抗原抗体 （DIEFA） 的快速测定 类似于ELISA，只是用胶体金标记IgG， 斑点免疫金结合法 不用加显色底物阳性反应即为红色斑 点
利福平结构式
抗结核药物
药物名称 异烟肼 杀菌剂 利福平 吡嗪酰胺 半杀菌剂 药物类型 副作用 周围神经炎，偶见肝功 能损害 过敏反应，肝功能损害 胃肠道不适，高尿酸血 症，肝功能损害 听力障碍，眩晕，肾功 能损害 视神经炎 抑菌剂 胃肠道不适，肝功能损 害
链霉素
乙胺丁醇
对氨基水杨酸
Q u e s tio n 7
M T B 的免疫逃逸机制
• M T B 能够阻止吞噬溶酶体的酸化，降低磷脂酶D 的活性，抑制活 性氧中间体和活性氮中间体的产生，抑制吞噬溶酶体的成熟，进而 抑制巨噬细胞的氧依赖杀伤作用。
• 细胞壁上的脂阿拉伯甘露糖（LA M ）具有抑制巨噬细胞凋亡功能， 其他成分如分枝菌酸、结核硬脂酸等也可抑制其凋亡
Case B • a 35-ye a r -o ld m a n • a h is to ry o f in tra v e n o u s d ru g u s e • a d ry p e rs is te n t co u g h , fe v e r , m a la is e , a n o re x ia • 15 p o u n d s w e ig h t lo s s , e x p e rie n c e d ch ills a n d sw e a ts • a ch e s t X -ra y re v e a le d p a tc h y in filtra te s th ro u g h o u t th e lu n g fie ld s • b a ct eri al , fun g al , an d m y c o b a ct e ri al c ult ur e s , a s w e ll a s e x a m in a tio n fo r P n e u m o c y s tis o rg a n is m s (肺孢子菌) • H IV p o s itiv e
结核分枝杆菌
——Case 2-3
C a s e 2-3
Case A • a 32-ye a r -o ld w o m a n • co u g h fo r se v e ra l w e e k s , 5 kg w e ig h t lo s s • n ig h t sw e a ts , fe v e rs , fa tig u e d • d e s p ite e ry th ro m y c in (红霉素) tre a tm e n t , h e r co n d itio n g o t w o rs e • co u g h b lo o d -tin g e d sp u tu m • ch e s t X -ra y re v e a le d rig h t u p p e r lo b e in filtra te s
巨噬细胞的天然防御机制
• 识别 M T B 方式： -直接识别：通过其表面激素样受体直接识别侵入机体的M T B -间接识别：通过表达补体受体识别M T B • 巨噬细胞杀菌系统： -氧依赖系统：在抗微生物效应中起决定性作用 -非氧依赖性系统：溶菌酶属于该系统产物
• 能通过自身凋亡来消除M T B 赖以生存的环境，抑制其在宿主体内进 一步生长和繁殖
Q u e s tio n 3
• W h a t is th e m a jo r tra n s m is s io n w a y s o f th is o rg a n is m ? • 传染源：痰中带菌的病人 • 传播途径： 呼吸道（为主） 消化道 泌尿生殖系统 皮肤粘膜伤口 经淋巴血管播散
• 无鞭毛、无芽胞
• 对干燥、酸碱抵抗力强，对乙醇、湿热及紫外线抵抗力弱 • 对利福平、链霉素、卡那霉素等抗结核药敏感，易出现耐药性 • 形态、菌落、毒力及耐药性可发生变异
Q u e s tio n 1
• W h a t i s u n i q u e a b o ut th e c ell wall of my c o b a ct eri al , a n d w h a t b io lo g ic e ffe c ts ca n b e a ttrib u te d to th e ce ll w a ll stru c tu re ? • 由于结核分枝杆菌细胞壁中含有大量脂质，表面呈强疏水性和聚集 生长，导致： • 不易着色， • 对化学物质抵抗力强 • 细菌毒力与其脂质成分有关，脂质含量越高，毒力越强
基因芯片技术
Q u e s tio n 6
• W h y d o m y c o b a c te ria l in fe c tio n s h a v e to b e tre a te d w ith m u ltip le d ru g s fo r 6 m o n th s o r m o re ? • 治疗原则：早期，联用，适量，规律，全程用药 • 两阶段疗法： -强化期（1~ 3个月）：联合应用4~ 5种抗结核药，一边在短时 间内大量杀灭繁殖活跃的敏感菌，减少耐药菌产生 -巩固期（6个月~ ）：继续消灭残留的结核菌，减少和避免复 发机会
• 经过淋巴管道、血流、支气管和消化道扩散可引起： 结核性胸膜炎 全身粟粒性结核病 血源性结核病 肺粟粒性结核病 肺外器官结核病 肠结核病 结核性脑膜炎
Q u e s tio n 5
• H o w to d ia g n o s is th e M y c o b a c te ria l tu b e rc u lo s is in fe c tio n ? D e s c rib e so m e n e w la b o ra to ry d ia g n o s is m e th o d s . • 目前较为常用的方法分为三大类 -细菌学诊断 -免疫学诊断 -分子生物学诊断
DNA序列测定
用于突变的检测，并确定突变的部位 简便快速，自动化， 与性质，其中PCR-DNA序列测定在结核 商品化 分枝杆菌耐药基因研究中应用广泛 将多种探针分子固定于支持物上，与 标记样品分子进行杂交，通过检测每 个探针分子的杂交信号强度获取样品 分子的数量和序列信息 技术操作简单，自 动化程度高，效率 高，但成本高
• H o w is th e d is e a s e m a n a g e d a n d p re v e n te d ?
• 疫苗接种：新生儿接种卡介苗可使 儿童发病率减少，但实验发现此种 疫苗对成人结核病预防几乎起不到 作用，对幼儿的预防也存在一定危 险性，因此急需研制新型疫苗 • 及早发现和治愈传染源 • 防止结核菌的传播：定时开窗通风， 日光照射 • 减少结核菌感染者的发病：增强抵 抗力，戒烟，限酒，生活作息规律 • ……
Q u e s tio n 2
• W h a t a b o u t th e m e c h a n is m s o f h o s t d e fe n s e s fo r m y c o b a c te ria l? • M T B 进入机体首先侵入巨噬细胞，产生非特异性免疫 巨噬细胞与结核分枝杆菌相互作用 -巨噬细胞的天然防御机制 -M T B 的免疫逃逸机制 • 感染后3~ 6 周，产生特异性细胞免疫 细胞免疫的两个阶段 -抗原提呈 -T 细胞的识别、活化、应答
免疫印迹技术
高分离SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳与高敏 感性酶联反应相结合
分子生物学诊断
方法 简介 主要类型：cDNA或rRNA探针，全染色 体DNA探针，克隆DNA或PCR扩增片段 探针，寡核苷酸探针 略（大家都懂的） 特点
核酸探针 聚合酶链反应 （PCR）
特异性强，但敏感 性低且价格昂贵 能早期诊断，检测 时间较短，但假阳 性和假阴性率较高
F in a l a n a ly s is c o n c lu s io n
T h e y w e re a ll in fe c te d w ith
• M Y C O B A C T E R IA L T U B E R C U L O S IS
C h a ra c te ris tic
Q u e s tio n 4
• W h a t is th e ty p ic a l clin ic a l p re s e n ta tio n a n d w h a t co m p lic a tio n s ca n o c c u r?
• 典型临床表现 全身毒性反应：乏力，全身不适，厌食，体重减轻等 全身症状 发热 盗汗 咳嗽、咳痰 局部症状 咯血 胸痛 呼吸功能障碍引起的症状 体征：患侧呼吸运动减低、叩诊闻浊音、听诊有支气管肺泡呼吸音 和湿罗音
• 形态为细长略弯曲、有分枝生长趋势 • 专性需氧菌，最适生长温度37℃，最适酸碱度pH 6.5 - 6.8 ，生长 缓慢 • 细胞壁含有大量脂质，主要是分枝菌酸 • 齐 - 尼（ Zi e h l - N e e l s e n ）抗酸性染色法 , 又名抗酸杆菌（ a ci d fa s t b a c illi ）
菌落为红或紫色， 操作简单，培养时 阳性率不高，结果 染色镜检 间短，无特殊仪器 观察存在主观性 噬菌斑有无 简便、快速、特异 直接检测活菌， 性高、灵敏度高 具有一定的传染性
免疫学诊断
方法 原理 特点
吸附在固相载体上的结核抗原（抗体） 酶联免疫吸附实验 可与待检标本中的结核抗体（抗原） 结合，形成复合物，再与酶标结合， （ELISA） 酶使底物显色 生物素-亲和素-酶 免疫测定法 （BAS-酶免法） 类似于ELISA，只是用BAS来标记酶