SELEX适体选择的过程
RNA或DNA的核酸片段,与蛋白质,多肽或小分子结合,使三维结构互补。
蛋白质,多肽或小分子。
“适”来自拉丁词Aptus匹配。
可应用于各种领域包括传感器探针,用于医疗诊断和环境毒性检测,分子成像,病毒治疗如疫苗和抗病毒药物,靶向药物送的发展与开拓新兴心态注定改变范式病人的护理。
这个有前途的适体可在体外用。
这个过程被称为“SELEX(系统的演变通过指数enrechiment 配体)”,在体外进化,库的单链DNA或RNA包含40-60基地随机序列区在~ 20基本常数序列引物地区有利于放大产生。
SELEX过程继续,直到收敛于一个收集池序列为目标的亲和力和通常得到的周期后8-15选择。
由于他们的高亲和力和选择性,适配体已经成功地分离出目标包括范围广泛小分子,肽,蛋白质,甚至整个cells5-8。
在这里,在技术回顾系列,我们将在评价的适体技术更集中毒性。
特别是,在这个问题上,不同的技术为获得适体,包括“技术”要讨论。
传统的适体的选择技术的“技术”采用SELEX最成功的适体代表1 109 1013的分子在1从library9。
通常选择过程的开始与低比例的核酸蛋白质为检查是否所有的分子结合的target10。
选择第一轮需要长时间的培养时间和不严格的条件,而后来的周期通常需要严格的条件,如改变缓冲液条件下,反应体积和时间的潜伏期。
之间的核苷酸结合后的反应图书馆与靶分子,绑定物种分离通过各种分离技术。
然后,该放大的分子被用于下一轮选择过程。
目标结合的分离未结合的适配体在筛选的过程是成功的适体的选择是至关重要的一步。
适体的选择是通过连续重复丰富目标绑定和未绑定的寡核苷酸去除步骤,其次洗脱,放大,和所选择的寡核苷酸净化。
由于蒂尔克和黄金的第一次尝试使用硝酸纤维素过滤方法,其他几个适体被选定,它仍然被认为是一种有效的分离的方法。
硝化纤维素过滤器的结合用于广泛调查的平衡结合和蛋白质oligonucleitides络合物的动力学性质由于硝基优先保留蛋白质和蛋白质的DNA或RNA复杂但不是免费的寡核苷酸。
完成整个选择的过程,通常需要12个周期,之后选定的分子可以被克隆到一个合适的载体并测序。
SELEX方法,而过滤策略已用于隔离适体对各种靶蛋白,这种技术仍然是一个繁琐,耗时的过程。
此外,一些DNA核酸适配体已选择使用硝酸纤维素大肠杆菌RecA protein11)。
同时,由于分离过滤效率,大量的选择轮是必需的。
传统的各种改进技术1990中描述的方法已被报道在近十年来,如毛细管电泳(CE)- SELEX,量身定制的SELEX,切换技术,照片—研究开发新的技术应用简单,容易和廉价的方法,如非SELEX,NP(纳米)- SELEX(例如,磁珠,胶体金粒子),细胞SELEX,溶胶-凝胶技术和微流控技术。
在本审查,几个隔离高亲和力的先进的分离方法和特异性核酸适配体的提供。
这些新的变异大大缩短时间的选择和改进适体的亲和性和特异性。
基于核酸适体的选择neccem;非SELEX毛细管电泳的应用(CE)为SELEX造成了巨大的改进。