实验试剂：琼脂糖（Promega公司，V3125）；其他常备试剂购自sigma公司；PKC活性检测试剂盒（Promega公司， V5330）
实验仪器：电泳仪（北京六一厂，112-0640）；水平电泳槽（北京六一厂，122-3146）；电热恒温培养箱（碧云天生物，EBI025）；电热恒温水浴锅（江苏省金坛市环宇科学仪器厂，HH-8）基本原理：分离PKC蛋白（磷酸化蛋白及非磷酸化蛋白），利用试剂盒组分将2种蛋白分离并加以区分，利用电泳琼脂糖凝胶技术显示2种不同的蛋白，利用分析软件将显示的不同蛋白定量并加以比较，以磷酸化PKC非磷酸化PKC灰度值IOD的比值显示PKC活性（PKC活化度）。

操作步骤：
1．用预冷的匀浆器把细胞匀浆。

2．在4℃，用14,000 × g 离心裂解液5 分钟，保存上清。

3．用PKC 抽提液预平衡1ml 的DEAE 纤维素柱，再把第2 步中得到的上清过柱。

用5ml的PKC 抽提液洗柱子，然后用5ml 含有200mM NaCl 的PKC 抽提液洗脱含有PKC 的组分。

4．用PKC 稀释液（PKC dilution buffer）将少量蛋白激酶C（Promtein Kinase C）稀释到2.5ug/ml。

随试剂盒所附的产品信息中标有这个酶的初始浓度。

5．用探头超声波破碎仪超声处理PKC Activator Solution 20-30 秒，或直到溶液变温暖。

6．对每一个样品，按照下面所列顺序在0.5ml 小离心管中混合PepTag® PKC 5×Buffer,PepTag® C1 Peptide，超声过的PKC Activator 5X Solution，和水。

在样品加入之前，小离心管一直要放在冰上。

阴性对照将用于对反应进行定量时确定其摩尔吸收值（说明书第IV.部分）。

标准PKC检测
PepTag® PKC Reaction 5X Buffer 5ul
PepTag® C1 Peptide (0.4ug/ul) 5ul
PKC Activator 5X Solution, 超声处理的 5ul
短肽保护液（非必须） 1ul
样品 9ul
去离子水使终体积为 25ul
PKC阳性对照检测
PepTag® PKC Reaction 5X Buffer 5ul
PepTag® C1 Peptide (0.4ug/ul) 5ul
PKC Activator 5XSolution, 超声处理的 5ul
短肽保护液（非必须） 1ul
Protein Kinase C (2.5ug/ml 溶于 PKC dilution buffer） 4ul
去离子水使终体积为 25ul
PKC阴性对照检测（不加PKC）
PepTag® PKC Reaction 5X Buffer 5ul
PepTag® C1 Peptide (0.4ug/ul) 5ul
PKC Activator 5XSolution, 超声处理的 5ul
短肽保护液（非必须） 1ul
去离子水使终体积为 25ul
（以阳性对照IOD值为100，其余各组的PKC+ p-PKC总和为100分配IOD数值）。