加样 上柱前，先将样品溶解在溶剂里或对洗脱液透析，样品溶 液的浓度应该尽可能高些，以减少样品溶液体积，使区带狭窄。将 样品仔细加到层析床的表面，打开旋塞至液面与床面齐，然后连接 溶剂池，保持一定高度的液面。
三、提高离子交换分离效果的途径
1）树脂的选择与填充技术 参照文献方法，结合被分离对象（阴离子？阳离子？）选择合适类型
交联度为8%的强酸性聚苯乙烯型树脂，约50um， 柱温50℃。
以150×0.9cm的交换柱，0.2M柠檬酸钠，pH 3.244.25为淋洗剂可以先分离出酸性氨基酸如谷氨酸，后分离 出中性氨基酸，如苯丙氨酸
以15 ×0.9cm的短交换柱，0.4M 0.2M柠檬酸钠， pH5.26为淋洗剂可以分离出碱性氨基酸，如精氨酸等。
带”——即色谱 Chromatography
该方法现在仍然广泛使用，如有机合成中的“过柱子”。常见的 是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。又称为柱层析/柱色谱，或经 典液相色谱法（相对于HPLC）。
一、离子交换色谱法的分类
1）淋洗色谱：通常先将少量样品通过交换柱，达到吸附 平衡，然后用亲和力比组分A、B、C都弱的离子作淋洗剂， 得到相互分离开的淋洗曲线。主要用于分析分离。
后进行测定。
置换色谱：
锂和钠的硫酸盐混合溶液通过一根氢型DOWE×50，300目树脂的交 换柱，用1.0mol/L(NH4)2SO4淋洗得到的淋洗曲线。
有时，在淋洗液中加入一定的络合剂，降低金属离子与树脂的亲和力， 从而使得NH4 +, Na+能对二、三价的金属离子起到置换作用。 Li+＜H+＜Na+＜NH4+＜K+＜Rb+＜Cs+＜Ag+＜Tl+
在用溶剂平衡时，先使材料沉淀， 用倾泻法除去悬浮的细颗粒，否则由 于细颗粒的堵塞，溶剂的流速将显著 降低。
层析柱的填装是先关闭出口，用溶剂灌注至1/3体积，并使支持 板下的“死体积”不存有气泡，再慢慢地向溶剂中加浆状物，要小 心地沿着玻棒倾注以防止气泡存留在柱内。让悬浮液沉淀，并放出 过多的溶剂，为了避免分层，最好一次装完，如需分几次填装，则 在二次填装前应先在已经沉淀的表面用玻棒搅拌后再倾注，重复这 个过程，直至装到需要的高度。用溶剂彻底洗涤层析柱后使液面降 到比层析床表面略高一点。最后覆盖一张圆形滤纸或尼龙布，以免 加样时扰乱离子的钠盐混合溶
液通过一支Ac-交换柱的淋洗曲线。
二、离子交换色谱的操作技术
1）交换柱的准备： 填充均匀
2）淋洗 加样时不能扰动柱床。 要求有恒定的流速，否则出现不规则小峰。
3）流出液的收集与分析 手工检测/自动分析？ 绘制淋洗曲线（浓度与淋洗体积V）
层析柱的基本装置如图。层析柱通常是玻璃的。
的柱子 装柱通常采用重力下沉法。将树脂用蒸馏水调成浆状，在柱内加入
3cm的蒸馏水，然后到入浆状树脂，让其在重力作用下下沉。（匀浆法） 不能有裂缝。 2）流速
最佳流速根据树脂的性能、粒度大小、交换反应的快慢等由实验结果 确定。
流速应稳定、适中.太快，难以有效分离，或者出现紊流，是本来已 经分开的组分重新混合；太慢，耗时，也可能由于扩散使分离效率降低。 （通常可调范围有限。）
长柱分辨力好（柱子径高比一般在1：5-10 ），但大
量物质的处理则用粗的柱比较适宜。
分离材料: 又称为色谱填料、固定
相等。可以是硅胶、氧化铝或者其他 如氧化锆、活性炭、……、壳聚糖微 球等。
在装柱前这些材料要用溶剂平衡， 另外还需作一些预处理。例如，凝胶 层析材料需要溶胀，吸附剂需要加热 或酸处理来活化，离子交换树脂需要 用酸碱处理来得到所需的电离形式。
第五章 离子交换色谱法
1903-1906年，俄国植物学家Tswett发表了叶绿素和其他植物色素分 离过程的描述。但直到25年后才得到公认。
Twestt的色素分离 过程说明 1、层析柱（即玻璃管） 2、装入固定相（“CaCO3”）； 3、从上面加入植物色素，然后
用石油醚淋洗； 4、分离成为有“颜色的谱
2）置换色谱：先将较大量的样品（通常接近柱的满负载） 通过交换柱，然后用亲和力比组分A、B、C都强的离子作 淋洗剂，将样品组分依次置换下来，得到部分重叠的淋洗 曲线。可用于大量物质的制备分离。又称顶替or排代色谱。
3）前沿色谱：将样品直接通过交换柱，最先流出的组分 可以部分得到纯的组成（不需要淋洗剂）。实际应用不多。 又称迎头色谱。
淋洗色谱：
Li+，Na+，K+ 的分离： （1）含有Li+，Na+，K+的混合溶液通过强酸型阳
离子交换树脂柱，三种离子都被树脂吸附。 （2）用0.1mol/L的HCl淋洗，三种离子都被洗脱。 （3）根据树脂对这三种离子亲和力的不同，依次得
到不同的金属离子（见淋洗曲线）。 （4）将洗脱下来的Li+，Na+，K+分别用容器收集
3）淋洗液的性质与浓度（重要的影响因素！）
浓度太高，组分很快被洗脱，未能得到分离；浓度太低分离时间延 长，并出现拖尾现象。
有时可采用梯度淋洗法，即用两种或两种以上浓度的同一种淋洗液 按一定顺序淋洗，其效果见图。有时，还采用酸度、温度梯度淋洗。
在分离稀土元素时，性质差别小，为了扩大差异，可加入柠檬酸作 淋洗剂（络合淋洗，非简单的交换）。 4）温度
提高温度可以加快传质速度，加快反应速度（如络合交换），有利 于改善分离效果。（但操作上有一定的难度。） 5）交换柱的长度、内径
结合分离效率、实际需求（样品量）、操作难易（填充均匀性、柱 压）等考虑。
梯度淋洗 等度淋洗
四、离子交换色谱法的应用
同离子交换分离法。（色谱方法与离子交换法相互 结合，提高了分离效率，尤其是性质相似物质的分离或 者多种组分的分离。） 例：氨基酸的分离