YT 鉴定使用
YT鉴定板提供94个生化测试反应来鉴定/特征化一系列酵母菌。

A—C行测定是颜色，以A1孔作为参照孔。

D—H行测定的是浊度，以D1孔作为参照孔。

鉴定板培养24，48，或/和72h，形成特定图谱，读取获得鉴定结果。

注意事项：
1 用纯化后的菌落
2 用特定的培养基，最好转接2代
3 无菌操作，避免污染
4 尽量用一次性玻璃器皿
5 使用前预热接种用无菌水和鉴定板至室温
6 校正浊度仪，配制特定浓度范围的菌悬液
7 biolog的化合物包含对光和温度敏感的成分。

鉴定板孔颜色变为深褐色表明碳源也变质。

一些孔显示黄色或粉红色是正常的。

8 鉴定板测试的是活体细胞的代谢特性，一些菌在受到一些压力选择，如温度，PH，渗透压即使几秒也会失去代谢活力。

为得到最好的结果，一定确保细胞有活性，操作时也要注意。

无菌水自己制备无菌水，在无菌间将其转入biolog提供的相同的规格的玻璃管中。

（20ml 容量，20×150mm），每管放入12-15ml无菌水
测试步骤
1 在BUY培养基上26℃培养待鉴定的酵母菌。

凡能用YT鉴定板鉴定的菌都可以在该条件下培养生长。

2 样品准备及观察特征
利用湿法制备（水片法）或革兰氏染色（如果需要的话）来确认待鉴定菌株是酵母菌。

转到BUY培养基培养，最好培养两代。

细胞需要新鲜培养，平板培养基上培养时间为24-48h
如果菌量较少不足以接种鉴定板，多接几块平板，培养24-48h
3 接种准备
以装有空白无菌水玻璃管调100%T透光率
用标准比浊管校正，应为47%T
制备特定浓度菌悬液
接种上鉴定板，不要操作20min，每孔100ul
4 培养
放于26℃培养鉴定板
将板放入一个密闭的塑料袋或其他盒中，加入浸湿的纸团或毛巾，用以保持湿度，避免在培养过程中使鉴定板中菌悬液因蒸发而减少影响结果。

培养鉴定板24，48或72h，直到得到鉴定结果。

结果
A1孔作为A-C行的参照孔，
D1孔作为D-H行的参照孔。

以590nm处峰值用来分别测试A-C行的颜色变化，D-H行的浊度变化。

一般酵母菌鉴定板的图谱很难用肉眼来判读。

“假阳性”是指A1，D1 还有其他本该阴性的孔显示阳性反应。

（A1孔显紫色，D1孔产生浊度变化）。

可能的原因包括细胞利用了自身的胞外多糖，储存的内源底物，或细胞裂解的物质。

不正确使用鉴定板也可能产生假阳性。

一些酵母菌利用碳源生成带有颜色的（如褐色）的副产物。

这种情况下应看作“阳性”反应。

对于YT鉴定板，24H培养SIM阈值0.75，
48或72H培养SIM阈值0.5。

Trouble shooting
如果各孔全为阳性，确保以下因素：
1 确保该菌株适于用YT鉴定板来鉴定。

2 不要将培养基（含N源）的挑进接种液中（无菌水）
3 浓度控制在特定范围内
4 菌悬液均一，不含块状物
5 A1和D1不要少加菌悬液（not under-filled），各孔保持一致
如果各孔全为阴性，
1 确保该菌株适于用YT鉴定板来鉴定。

2 利用了BUY培养基，并新鲜培养
3 用作制备菌悬液的无菌水预热到室温，有合适的PH，不含防腐剂。

4 培养温度合适。

5 处理细胞使用的是一次性玻璃器皿（残留的肥皂会对细胞产生毒害）
6 A1和D1不要加多菌悬液（not under-filled），各孔保持一致
YT数据库的构建是在临床和环境微生物作大量代谢特征验证后做成的。

首先鉴定纯的菌株，只能对数据库中包括的菌鉴定。

非典型菌株培养72h
SIM低于0.5 都将报告为NO Identification。

质控菌株
1 Candida albicans A TCC 10231白色念珠菌（白色假丝酵母）
2. Candida geochares A TCC 36852
3. Kluyveromyces marxianus马克斯克鲁维酵母（酵母型）(Candida kefyr) ATCC 2512乳酒
假丝酵母（菌丝体型）
4. Galactomyces geotrichum (Geotrichum candidum) ATCC 34614白地霉（菌丝体型）。