免疫细胞功能检测技术
淋巴母细胞
细胞大小(直径μ m) 12～20
过渡型
12～16 6 ～8
核大小、染色质
核仁 有丝分裂 胞质、着色 浆内空泡
增大、疏松
清晰、1～4个 有或无 增多、嗜碱 有或无
增大、疏松
有或无 无 增多、嗜碱 有或无
不增大、密集
无 无 极少、天青色 无
伪足
有或无
有或无
无
检测方法
（1）形态学检查法 淋巴细胞（4-6天） 母细胞化
培养终止前加入MTT 测定溶解的甲臜
SI
试验孔A570nm 均值 对照孔A570nm 均值
优点：操作简便，无放射性污染 缺点：敏感性低于3H-TdR掺入法
(二) T细胞分泌功能测
体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后,分泌各 种细胞因子,可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技
术分别检测细胞因子含量、生物学活性或基因表达水平，
三、NK细胞活性测定
三、NK细胞活性测定
染色计数 方法学评价： 简便 有主观性 形态法
酶释放法
上清LDH或AKP
方法学评价： 经济、快速、简便、可定量 敏感性较低
杀伤肿瘤细胞 K562
测CPM值 方法学评价： 敏感性高，客观精确 设备要求，核素污染 放射性核 素释放法
测发光强度
方法学评价： 快速、简便、样品量少，敏 化学发光 感，可定量
有或无 无 增多、嗜碱 有或无
不增大、密集
无 无 极少、天青色 无
伪足
有或无
有或无
无
检测方法
（1）形态学检查法 淋巴细胞（4-6天） 母细胞化 刺激物
转化率 转化的淋巴细胞数 转化和未转化的淋巴细 胞数 100%
（2）3H-TdR掺入法
淋巴细胞DNA合成期 3HTdR掺入 测定细胞内的3H
琼脂糖平板法
趋化运动
（二）吞噬和杀菌功能测定
显微镜检查法
吞噬率(%) 吞噬细菌的白细胞数 100 计数的白细胞数
杀菌率(%)
胞内含着染菌体的细胞 数 计数的白细胞数
100
溶菌法
作用30、 60或90 min 菌落数 0 min 菌落数
杀菌率(%) （ 1
） 100
NBT还原试验
淋巴 细胞
淋巴 母细胞
空泡 空泡 核仁明显 核染色质疏松
未转化和转化淋巴细胞的形态特征
转化的淋巴细胞 未转化的淋巴细胞
淋巴母细胞
细胞大小(直径μ m) 12～20
过渡型
12～16 6 ～8
核大小、染色质
核仁 有丝分裂 胞质、着色 浆内空泡
增大、疏松
清晰、1～4个 有或无 增多、嗜碱 有或无
增大、疏松
转化率 转化的淋巴细胞数 转化和未转化的淋巴细 胞数 100%
（2）3H-TdR掺入法
淋巴细胞DNA合成期 3HTdR掺入 测定细胞内的3H 刺激物 PHA ConA
SI=
PHA刺激管cpm均值 对照管cpm均值
优点：简便易行 缺点：重复性和准确性差
（3）MTT比色法
优点：敏感性高，客观性强 重复性好 缺点：设备条件 放射性核素污染
以反映T细胞功能。
（三）T细胞介导的细胞毒试验
靶细胞 抗原
T细胞
致敏CTL
靶细胞杀伤活力
检测方法
（1）形态学方法 淋巴细胞+肿瘤细胞 计数残留肿瘤细胞
肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力： 判断预后，观察疗效
（2）51Cr释放法 CTL 淋巴细胞+含51Cr 的肿瘤细胞 测定γ射线
（四）体内试验
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特异性抗原皮试
结核 白色念珠菌 皮肤毛癣菌素 腮腺炎病毒等
Add your 迟发型超敏 vision in 反应 here
PHA皮试
非特异性刺激T细胞发 生母细胞转化
二、B细胞功能的检测
1
B细胞增殖能力的试验
溶血空斑试验
2
3 4
B细胞抗体形成功能的检测 体内试验
（一） B细胞增殖试验
刺激 DNA合成 分化 细胞变大 细胞浆扩大 有丝分裂 原/抗原
第15章
免疫细胞功能检测技术
医大一院检验科
本章内容
免疫细胞功能检测技术
淋巴细胞的功能检测
吞噬细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测的临床应用
免疫细胞
T细胞 中性粒 细胞
捕获抗原，处理 抗原，提呈给淋 巴细胞或表现其 他免疫功能
B细胞
识别特异性抗 原 ，被激活显 示出特异性应答
淋巴 细胞群
吞噬 细胞
巨噬 细胞
2．非特异性酯酶的测定 用IFN-γ 激活小鼠巨噬细胞，观察其对125I-UdR 标记DBA/2小鼠肥大细胞瘤P815的杀伤活性。
细胞毒作用测定
巨噬细胞促凝血活性测定 取已经37℃预温的正常兔血浆和CaCl2混合液，加
入经粘附有单层巨噬细胞的试管中，移置37℃， 即时记录血浆凝固时间。
反映机体免疫功能状态
（二）溶血空斑试验
经典溶血空斑试验 检测抗体：抗RBC抗体 用于测定药物和手术等因 素对体液免疫功能的影响 评价免疫治疗或免疫重建 后机体产生抗体的能力。
被动溶血空斑试验
检测抗体：抗SRBC吸附抗原的抗体
(三) B细胞抗体形成功能的检测 ——酶联免疫斑点法
可检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量。 优点：稳定、特异、抗原用量少；
第三节 免疫细胞功能 检测的临床应用
肿瘤、免疫缺陷病等疾病的诊断和疾病预 后监测
组织器官移植后排斥反应的早期发现
Thank You!
第二节 吞噬细胞功能 检测技术
一、中性粒细胞功能检测技术
二、巨噬细胞功能检测技术
大吞噬细胞： 单核巨噬细胞系统
趋化 吞噬
小吞噬细胞： 中性粒细胞
胞内杀伤作用
2
吞噬和杀菌功能的检测
（一）趋化功能检测
原理
中性粒细胞
方法
滤膜渗透法
微生物细胞成 分及代谢产物 补体活性片段 细胞因子等
可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量； 可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。
（四）体内试验
体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、破伤风类
毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。
将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免疫
后1周、2周、3周分别采血，分离血清，测定受检者免 疫前后相应抗体的效价，判断受检者体内B细胞的功能。
一、T细胞功能的检测
1
T细胞增殖试验
2
3 4
T细胞分泌功能测定
T细胞介导的细胞毒试验 体内试验
（一）T细胞增殖试验
刺激 DNA合成 分化 细胞变大 细胞浆扩大 有丝分裂 原/抗原
淋巴 细胞
淋巴 母细胞
空泡 空泡 核仁明显 核染色质疏松
未转化和转化淋巴细胞的形态特征
转化的淋巴细胞 未转化的淋巴细胞
NK细胞
树突状 细胞
一、T细胞功能的检测 第一节 淋巴细胞的 功能检测 二、 B细胞功能检测
三、 NK细胞活性测定
T细胞
细胞免疫功能
淋巴细胞
非特异性免疫作用
NK和 K细胞
B细胞
体液免疫功能
淋巴细胞功能测定
体内实验
间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或 有丝分裂原的应答反应
体外实验
主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分 裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性 试验及淋巴细胞分泌产物的测定
SI=
SPA/抗IgM(人) LPS（鼠）
PHA刺激管cpm均值 对照管cpm均值
优点：简便易行 缺点：重复性和准确性差
（3）MTT比色法
优点：敏感性高，客观性强 重复性好 缺点：设备条件 放射性核素污染
培养终止前加入MTT 测定溶解的甲？
SI
试验孔A570nm 均值 对照孔A570nm 均值
优点：操作简便，无放射性污染 缺点：敏感性低于3H-TdR掺入法
二、巨噬细胞功能的检测
给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)，间隔
1 2 3 4 5
炭粒廓清试验
一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度 用鸡红细胞、白色念珠菌、酵母细胞等作为吞噬 颗粒，用斑蟊敷贴法收集人巨噬细胞或从腹腔渗 出液获得鼠巨噬细胞。
吞噬功能检测
巨噬细胞溶酶体酶测定 1．酸性磷酸酶的测定
