1)配制%和%的琼脂糖，高压灭菌后置于55℃水浴中，使其保持融化状态。

2)配含20%FBS、2×抗生素的2×RPMI 1640培养基，37℃预热。

3)灌下层胶：%的琼脂糖胶与2×培养基1:1混合，加入到6孔板中，每孔3ml，
室温放置待其凝固。

4)等待下层胶凝固过程中消化B16 con shRNA与B16 Myo7a shRNA稳转细胞，
计数，用无血清培养基调整浓度为5×104/ml，每孔用100μl细胞，设3个平行孔。

5)下层胶凝固后灌上层胶：%的琼脂糖胶与2×培养基1:1混合(温度约40℃左
右)，加入100μl细胞悬液，即5000个细胞，混匀，加入孔板中，每孔3ml。

培养，约2-3周收细胞，%结晶紫染色，计数并比较两组克隆形6)37℃ 5% CO
2
成情况。