3.各管溶液立即混均匀，沿试管壁加入液 体石蜡，约0.5cm，各管置于37℃的水 浴中保温，切勿摇动试管，随时 观察比较各试管颜色的变化， 记录褪色时间。
实验结果记录：
试管1 试管2 试管3 试管4 试管5 试管6
褪色时间（分钟） [I]/[S]
【注意事项】 ：
1、酶提取液的制备应操作迅速，以防止酶活性降低。 2、加入液体石蜡的作用是隔绝空气，以避免空气中的氧气对实
• 2、各管的褪色有明显的时间差别，褪色时间 随[I]/[S]逐渐增大，而增大。
• 3、丙二酸对琥珀酸脱氢酶抑制作用的类型是 竞争性抑制，其特点：最大反应速率Vmax不变， 米氏常数Km增大，竞争性抑制可以通过增大底物 浓度来减轻抑制程度。
• 4、本实验中5号、6号试管的作用是做对照， 5号试管和1号试管做对照，说明酶提取液中有琥 珀酸脱氢酶的存在，6号试管中的酶提取液在 100℃的水浴加热煮沸过，所以琥珀酸脱氢酶是失 活的。
验造成影响，因此加石蜡时试管壁要倾斜，注意不要产生气泡 。 3、37℃水浴保温过程中，不能摇动试管，避免空气中的氧气接 触反应溶液，使得还原型的甲烯白重新氧化成蓝色。 4.、37℃水浴保温过程中，要注意随时观察各试管的褪色情况。 5、实验结果结束后，一定要洗干净试管内的液体石蜡。
实验讨论：
• 1、酶提取液中有琥珀酸脱氢酶活性，表1所示， 在试管1中没有抑制剂，但琥珀酸依然能脱氢，使 得甲烯蓝反应得甲烯白。
实验原理
• 化学结构与酶作用的底物结构相似的物 质，可与底物竞争结合酶的活性中心， 使酶的活性降低甚至丧失，这种抑制作 用称为竞争性抑制作用。
E+S
ES
E+P
+
+
I
I
EI+S
EIS
琥珀酸脱氢酶：
是机体内参与三羧酸循环的一种重要的脱氢 酶，其辅基为FAD，如心肌中的琥珀酸脱氢 酶在缺氧的情况下，可使琥珀酸脱氢生成延 胡索酸，脱下的氢可将蓝色的甲烯蓝还原成 无色的甲烯白。这样，便可以显示琥珀酸脱 氢酶的作用
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谢谢聆听！
丙二酸对琥珀酸的竞争性抑制
主讲人：葛静 制作人：胡波
实验原理 实验目的
实验材料与仪器
实验步骤
实验结果记录 注意事项 实验讨论
实验目的：
• 1、学习和掌握竞争性抑制作用的特点。 • 2、观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用。
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实验步骤:
1、酶提取液的制备：取大白鼠的骨骼肌， 用冷水洗3次，加入1/15mol/L磷酸缓冲液 pH 在7.4。在研钵中碾碎，然后用纱布过滤，
用干净的烧杯收集过滤的备用。
• 2、取试管6支，编号，在按图步骤操作
酶提取 液（ ml）
磷酸缓 冲液（ ml）
0.2mol /L琥珀
酸（滴 ）
0.02m ol/L琥
珀酸（ 滴）
0.2mol /L丙二
酸溶液 （滴）
0.02m ol/L丙 二酸溶
液（滴 ）
蒸馏水 （滴）
甲烯蓝 （滴）
褪色时 间（分 钟）
试管1
2
—
8
—
—
ห้องสมุดไป่ตู้
—
8
3
试管2
2
—
8
—
—
8
—
3
试管3
2
—
8
—
8
—
—
3
试管4
2
—
—
8
8
—
—
3
试管5
—
2
8
—
—
—
8
3
试管6
2
—
8
—
—
—
8
3
试管6：酶提取液在100℃ 水浴中保温
实验材料与仪器：
器材 ： 大白鼠、 手术剪、滴管 镊子、纱布、 漏斗、量筒、 烧杯、研钵 刻度吸量管 试管及试管架、 恒温水箱、
试剂：
0.2mol/L琥珀酸溶液、 0.02mol/L琥珀酸溶液 0.2mol/L丙二酸溶液 0.02mol/L丙二酸溶液、 1/15mol/LPH=7.4磷酸 盐缓冲液、 0.02%甲烯蓝