江苏农业科学 2013 年第 41 卷第 1 期
张孟琴，王朝阳，田爱琴． 三叶木通果皮黄酮纯化条件［J］． 江苏农业科学，2013，41（ 1） ： 247 － 250．
— 247 —
三叶木通果皮黄酮纯化条件
张孟琴，王朝阳，田爱琴
（ 河南科技大学林业职业学院，河南洛阳 471002）
摘要： 从三叶木通果皮中提取黄酮可提高三叶木通的经济效益。在从三叶木通果皮中提取出黄酮类化合物的基 础上，主要研究了三叶木通果皮黄酮的最佳纯化条件，结果表明： AB － 8 大孔吸附树脂对三叶木通果皮黄酮具有良好 的吸附分离性能，其静态饱和吸附量为 34． 8 mg / g； 当黄酮的浓度控制在 0． 8 ～ 1． 5 mg / mL 时，其动态吸附容量为 21． 2 mg / g； 50% 乙醇为黄酮的最佳洗脱剂，在流速为 0． 5 ～ 1． 0 mL / min 条件下，洗脱率高达 85． 9% ，提取的总黄酮的 质量分数为 42． 6% 。
我们在对三叶木通果皮黄酮的前期研究中，已优化了从 三叶木通果皮中提取黄酮类化合物的方法［8］，在此基础上， 进一步探讨三叶木通黄酮类化合物的纯化条件。
收稿日期： 2012 － 05 － 01 基金项目： 河南省省属科研院所研究专项资金（ 编号： 0441100102） 。 作者简介： 张孟琴（ 1969—） ，女，河南洛阳人，硕士，高级讲师，研究方
关键词： 三叶木通； 果皮； 黄酮； 提取分离； 纯化工艺 中图分类号： R283 文献标志码： A 文章编号： 1002 － 1302（ 2013） 01 － 0247 － 04
三叶木通（ Akebia trifoliata） 属于木通属落叶木质藤本植 物，形似香蕉，故 称“野 香 蕉 ”。 其 果 肉 呈 乳 白 色，多 汁 味 甜。 但是作为水果资源，三叶木通果实皮厚、种子多，可食用部分 仅占果实的 25． 0% ，而果皮占果实总量的 69． 1% 之多［1］，果 皮在大多数情况下被丢弃； 但三叶木通果皮中含有黄酮，因此 从果皮中提取纯化黄酮成为提高三叶木通经济效益的最重要 突破口。黄酮类化合物在医药等方面具有广泛的用途，它具 有抗衰老、抑制凝血、抗癌、抗菌消炎及促进雌性激素的分泌 等许多方面的作用［2 － 4］。因此，若能从三叶木通果皮中提取 用途广泛的高价值黄酮，这不仅有效解决了三叶木通果皮丢 弃带来的环境污染问题，而且还可明显提高三叶木通的经济 效益，成为三叶木通综合利用的有效途径。黄酮类化合物是 色原烷或色原酮的衍生物，泛指是由 2 个芳香环 A 和 B 通过 三碳链相互作用连接而成的一系列化合物，其基本骨架具有 C6—C3—C6 的特点（ 图 1） 。天然的黄酮类化合物几乎在 A、 B 环上均有取代基，一般是羟基、甲氧基和异戊烯基等［2，5 － 7］。 在植物体中，黄酮类化合物因其所在组织不同，其存在状态也 呈多样化。在木质部多以苷元形式存在，在花、叶、果实等器 官多以糖苷形式存在。
向为天然产物开发与利用。E － mail： henanmengqin@ yahoo． com． cn。
1 材料与方法
1． 1 材料、试剂与仪器 三叶木通果皮采集于河南淅川大别山。AB － 8 大孔吸
附树脂、X － 5 大孔吸附树脂、D － 101 大孔吸附树脂； 亚硝酸 钠、硝酸铝、氢 氧 化 钠、无 水 乙 醇、甲 醇 等 试 剂 均 为 国 产 分 析 纯； 芸香苷标准品，Sigma 公司生产。UV － 754 紫外可见分光 光度计、电热恒温水浴锅、RE － 522 旋转蒸发器、HY － 5 回旋 振荡调速振荡器、真空干燥机、层析柱。 1． 2 方法 1． 2． 1 黄酮的测定原理 在碱性条件，黄酮化合物可与亚硝 酸铝形成红色络合物，在可见光区 510 nm 处有最大吸收峰。 1． 2． 2 标准溶液的配制［9 － 11］ 准确称取 120 ℃ 干燥至恒重 的芸香苷 5． 00 mg，用 50% 乙醇溶解后，转移至 50 mL 的容量 瓶中，进而 用 50% 乙醇定容，摇匀。准 确吸取上述溶液 0、 0. 50、1． 00、1． 50、2． 00、2． 50、3． 00 mL，分别置于 10 mL 容量 瓶中，分别加入 1． 00 mL 50% 的乙醇，然后各加入 0． 3 mL 5% NaNO2 溶液，摇匀，在室温高于 10 ℃ 条件下放置 10 min 后， 分别加入 10% Al（ NO3 ） 3 溶液 0． 3 mL，摇匀，放置 10 min，再 分别加入 4% NaOH 溶液 4 mL，最后用 50% 乙醇溶液定容，摇 匀，放置 10 ～ 15 min，以空白试剂做参比，在 510 nm 处测吸光 度 D。对吸光度值做线性回归方程，得到吸光度（ D） 与浓度 （ C） 的标准曲线（ 图 2） 。标准曲线回归方程为 y = 0． 008 1x + 0． 010 1，r2 = 0． 996 4，由此可知芸香苷浓度在 5 ～ 30 μg / mL 范 围内有良好线性关系。 1． 2． 3 黄酮含量的测定 按标准溶液的铝盐显色法在 510 nm 下测其吸光度 D，由标准曲线的回归方程计算出黄酮 浓度，进而计算出黄酮含量［5 。 ，7］ 1． 3 三叶木通果皮中黄酮供试液的制备
— 248 —
江苏农业科学 2013 年第 41 卷第 1 期
通果皮试样液进行 5 次平行测定，计算出总黄酮含量。由表 1Байду номын сангаас可以看出，用分光光度法测定的三叶木通果皮总黄酮含量， 其标 准 方 差 和 变 异 系 数 都 较 小，分 别 为 0． 001 4% 和 0. 473% ，说明该方法的精密性、准确性良好，且测定条件易控 制，效果较佳。
取三叶木通果皮粉用 50% 乙醇在 90 ℃ 下回流提取 4 h 得到黄酮提取液，浓缩后备用。 1． 4 大孔吸附树脂对黄酮的吸附、洗脱 1． 4． 1 树脂的预处理 将 AB － 8、X － 5 和 D － 101 等 3 种大 孔树脂用乙醇浸泡 24 h，湿法上柱，先用乙醇清洗至流出液加 水不 混 浊 为 止 ，再 用 蒸 馏 水 洗 至 流 出 液 澄 清 。然 后 分 别 用