[收稿日期]2007-06-21[基金项目]山东省科技发展计划项目 中药材质控标准和中药标准样品制备技术研究 丹参药材质控标准和标准品制备技术研究 (2006GG1109078)[作者简介]周凤琴(1951-),女,山东临沂人,教授,博士生导师,长期致力于中药鉴定学、中药商品学和中药资源学的教学与科研工作。
丹参叶化学成分的初步研究周凤琴1,黄尚荣1,王 婷1,王 颖1,王建成2,冉 蓉1(1.山东中医药大学药学院,山东济南250355; 2.山东省临沂市药检所,山东临沂276000)[摘要]目的:研究丹参叶的化学成分。
方法:采用系统预试法、薄层色谱法进行化学成分的预试,采用高效液相色谱法测定丹酚酸B 。
结果:丹参叶中含黄酮类、酚酸类、皂苷类及香豆素类成分,其中已知成分有丹酚酸B,几乎不含丹参酮类和原儿茶醛。
丹参叶中丹酚酸B 的含量为0.57%~6.06%;白花丹参叶中丹酚酸B 的含量甚微。
结论:化学成分测定表明,丹参叶具有一定的药用价值。
[关键词]丹参叶;化学成分;系统预试;T LC;HPL C[中图分类号]R282.710.5 [文献标识码]A [文章编号]1007-659X(2007)06-0504-03Preliminary study on chemical compositions of leaves of Salvia Miltiorrhiza Bge.ZHOU Feng -qin 1,HU AN G Shang -r ong 1,WA NG T ing 1,WA NG Y ing 1,WA NG Jian -cheng 2,RAN Rong 1(1.Colleg e of Chinese Phar macology ,Shandong U niversity of T raditio nal Chinese M edicine,Jinan 250355,China;2.Linyi Institute fo r Drug Contr ol,Linyi 276000,Ch-i na)[Abstract]Objective:to study the chemical constituents of the leaves of S alvia miltior r hiz a Bge.M ethods:the chemical constituents were pre -tested by preliminary systemat ic test and T L C.T he contents of salvianolic acid B were determined by HPLC.R esults:the leaves of Salv ia miltior r hiz a Beg.contained flavonoids,phenolic acids,saponins,coumar in and tanshinone and protocatechuic aldehyde.T he kno wn co mponent w as salv ianolic acid B.Its content w as 0.57%~6.06%.T he content of salv ianolic acid B in the leaves of Salv ia miltior r hiz a Bg e. f.alba C.Y.Wu et H.W.L i w as very low.Conclusion:this paper provided the scientific foundation for the ex ploitation and utilization of the leaves of Salvia miltior-r hiz a.[Key words]Salvia miltior r hiz a Bg e.;leaves;chemical const ituents;pr eliminary systematic test ;T L C;HPL C丹参及其制剂是目前防治心脑血管疾病的重要中药,山东道地产区年产量约1000万kg,但大量的地上部分却弃之不用。
已有报道[1],丹参的白花变型 白花丹参的叶制剂对脑梗死有保护作用,表明其叶与根有相似的化学成分和药理作用。
丹参叶是否有同样的开发利用价值呢?作者对丹参叶的化学成分进行了初步研究。
1 仪器、试剂与样品1.1 仪器岛津高效液相色谱仪;LC -10AT 泵;SPD -10Avp 紫外检测器;Phenomenox 色谱柱(250m m 46mm,5 m );C -R6A CHROMATOPAC 记录仪;FA1104型电子天平等。
1.2 试剂、药品及对照品甲醇(色谱纯、分析纯)、乙腈(色谱纯)、甲酸(分析纯);丹参酮 A 、原儿茶醛、丹酚酸B 对照品(购自中国药品生物制品检定所)。
1.3 样品经作者鉴定,原植物为唇形科植物丹参Salvia504第31卷 第6期2007年11月山东中医药大学学报JOU RN AL OF SH ANDON G U NIVERSITY OF TC MV ol.31,No.6Nov.2007miltiorr hiz a Bge.;其中2,19,20号为白花丹参S.miltiorr hiz a Bge.f.alba C.Y.Wu et H.W.Li.。
样品粉碎过四号筛。
见表1。
表1 样品来源及采收时间样品编号来源 产地 采收时间11丹参根及根茎山东蒙阴2004.9.23 1丹参叶山东曲阜示范园2004.7.22 2二年生白花丹参叶山东莱芜2004.7.30 3丹参叶山东莱芜2004.7.30 7丹参叶山东曲阜示范园2004.8.20 9丹参叶山东曲阜示范园2004.9.20 13丹参叶山东蒙阴2004.9.23 14野生丹参叶山东济南千佛山2004.9.25 19一年生白花丹参叶山东莱芜2004.7.30 20白花丹参叶山东莱芜2003.112 系统预试参照文献[2],采用试管法、滤纸片法和圆形滤纸层析法进行系统预试。
结果显示,丹参叶中可能含有氨基酸、多肽、蛋白质、有机酸、酚类成分、糖及其苷类、皂苷、黄酮类、香豆素类及挥发油。
3 薄层色谱鉴别3.1 供试品溶液制备取丹参叶和丹参药材粉末各两份,每份2g。
一份以20ml乙醚浸渍过夜,过滤,滤液挥干,加2ml乙酸乙酯溶解,作为供试品溶液 。
另一份加入75%甲醇浸渍过夜,滤液用石油醚除去叶绿素,下层液浓缩至2ml,作为供试品溶液 。
3.2 对照品溶液制备精密称取丹参酮 A、原儿茶醛对照品各10mg,分别置50ml棕色容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,精密吸取2ml置25ml棕色容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀即得。
精密称取丹酚酸B对照品适量,加75%甲醇,制成每1ml含0.14mg的溶液。
3.3 薄层层析吸取供试品溶液 各5ml,以丹参酮 A为对照品,点于同一块硅胶G薄层板上,以苯-乙酸乙酯(19:1)展开,取出,晾干,结果见图1A。
吸取供试品溶液 各5ml,以原儿茶醛为对照品,点于同一块硅胶G薄层板上,以氯仿-丙酮-甲酸(8 1 0.5)展开,取出,晾干,喷间苯三酚-浓硫酸试液,结果见图1B。
吸取供试品溶液 各5ml,以丹酚酸B为对照品,点于同一块硅胶GF254薄层板上,以甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(2 3 4 0.5 2)展开,取出,晾干,结果见图1C。
图1 丹参叶与根及根茎TLC图谱比较A.丹参酮类成分比较;B.原儿茶醛的比较(棕红色斑点);C.丹酚酸类成分的比较(亮淡蓝色荧光)1.根及根茎;2.叶;3.丹参酮 A;4.原儿茶醛;5.丹酚酸Ba.橙色;b.棕红色;c.棕黄色;d.黄绿色;e.绿色;f.类白色结果显示,丹参叶中几乎不含丹参酮类和原儿茶醛,主含酚酸类。
4 丹参叶中丹酚酸B的含量测定4.1 色谱条件与系统适用性试验参照 中国药典 (2005年版)。
4.2 对照品溶液的制备同3.2。
5052007年11月 周凤琴等:丹参叶化学成分的初步研究 第31卷第6期4.3 供试品溶液的制备参照 中国药典 (2005年版)。
4.4 线性关系考察精密吸取10%,20%,30%,40%,50%,100%, 200%对照品溶液,按4.1项色谱条件,分别进样20 l,以峰面积与进样量进行回归,得回归方程:Y =920583X-11649.0,r=0.9996;线性范围为0.2800~5.6000g。
4.5 精密度试验分别精密吸取对照品溶液10 l,按上述色谱条件连续重复进样6次,记录色谱峰面积,平均峰面积为1416946,RSD=0.56%。
表明仪器精密度良好。
4.6 稳定性试验精密吸取13号供试品溶液10 l,分别于0,2, 4,6,24h进样,测定峰面积,结果平均峰面积为1635902,RSD=1.54%。
表明样品避光保存在24h 内稳定。
4.7 重复性试验取13号供试品,按照供试品溶液的制备方法,平行制备6份溶液,按上述色谱条件测定其含量,平均值为3.80%,RSD= 1.34%,说明重复性良好。
4.8 加样回收试验取同一丹参叶粉末6份,每份约0.10g,精密称量,置具塞锥形瓶中,分别加入10ml对照品溶液,按供试品溶液的制备方法处理,依法测定丹酚酸B含量,计算回收率。
平均回收率为98.71%,RSD= 2.30%。
4.9 样品测定按4.3项方法分别制备供试品溶液,精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 l在上述色谱条件下进样,用外标一点法测定,计算各样品中丹酚酸B 的含量。
见表2。
结果,不同产地丹参叶均含有丹酚酸B,但含量具有显著性差异,以曲阜9月份产丹参叶中丹酚酸B的含量最高,为6.06%。
曲阜7~9月份产丹参叶中丹酚酸B的含量逐渐增高,显示动态积累趋势,9月份达到最高值。
但由于样品所限,9月后的含量规律有待进一步研究。
而丹参叶中丹酚酸B的含量明显高于白花丹参叶。
表2 丹参叶中丹酚酸B含量测定结果样品编号含量(%)显著性差异1 3.25 0.08D20.07 0.00G30.57 0.01F7 4.35 0.08B9 6.06 0.11A13 3.82 0.06C14 1.56 0.02E190.06 0.00G200.05 0.00G数据经SA S统计软件处理,不同字母之间比较均有显著性差异(P<0.05)5 小结与讨论5.1 系统预试表明,丹参叶中主含酚酸类、黄酮类、皂苷类及香豆素类成分。
其中酚酸类是丹参叶与根及根茎相似的成分。
5.2 薄层色谱显示,丹参叶中主含丹酚酸B,几乎不含丹参酮 A和原儿茶醛。
并表明丹参叶中含有多种不同于根的化学成分,正在进一步研究中。