（７）：５２０．５２１．
‰＠）＝、／灯伪）＋订④１）＋时＠２）＋玎④３），由表４，
计算‰ｌⅨ）＝１．８１ｘ１０－２，则“何）＝０．００４。 ２．２．６扩展不确定度 取包含因子ｋ＝２，则扩展不确定度为ＵⅨ）＝０．００８。
２．２．７测量不确定度的结果报告与表示
该白酒样品中氰化物含量的测定结果为Ｘ＝（０．２１±
用０．１ｍｏｌ／Ｌ柠檬酸缓冲液和０．２ｍｏｌ／Ｌ磷酸氢二钠缓
冲液配成ｐＨ值为５．５、６．０、６．５、７．０、７．５的磷酸氢二钠．柠檬 酸缓冲液各１００ｍＬ，准确称取０．３９魔芋粗粉分别加入上述 不同ｐＨ值的缓冲液中，加热制各成魔芋胶溶液；用缓冲 液配置５ＩＵ／ｍＬ的１３一甘露聚糖酶液。向４组试管（每组６支） 中分别加入１．８ⅡｌＬ魔芋胶，４５℃水浴５ｍｉｎ后，分别向试管中入
合成不确定度
Ｕ饼）＝０．００８。各不确定度分量评定结果显示，白酒中氰化 物含量测定的不确定度主要来源于重复性实验引入的不 确定度及标准溶液引入的不确定度，故本实验要求人员 具有较高的操作水平，且应从正规渠道采购符合要求的标 准溶液。 本方法较国标方法操作简便、快捷，且克服了国标法 中显色液浑浊、回收率低等问题，可替代国标法，作为白酒 中氰化物检测的方法。 参考文献：
附表葡萄糖标准曲线的设定
Ａ牡ａｃｈｅｄ ｔａｂｌｅ Ｓｅｔｔｉｎｇ ｇｌｕｃｏｓｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔａｎｄａｒｄ
ｃｕｒｖｅ
体系０ 体系中标准物／ｍｇ 双蒸水／．２ １．８ ３
２ ０．４ １．６ ３
３ ０．６ １．４ ３
４ ０．８ １．２ ３
Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆｋｏｎｊａｃ ｍａｎｎｏｓｅ－ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｂｙ
ＨＥ Ｄａｎｌ，ＧＵＯ Ｘｉｏｎ９１，ＹＡＮＧ Ｓｈｕａｎｇｌｉａｎｌ，ＬＩ
ｐ－ｍａｎｎａｎａｓｅ ａｎｄ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ
Ｚｕｎｘｉｕ，ＴＡＮＧ Ｘｉａｎｇｈｕａｌ。‘
ａｎａｌｙｓｉｓ
Ｊｕｎｊｕｎｌ，ＨＵＡＮＧ
１：２。
６０ＩＵ／ｍＬ、７０ＩＵ／ｍＬ各５０ｍＬ，ｐＨ值为６，５的Ｂ．甘露聚糖酶液 （要求每克魔芋粉按照５０ＩＵ、１００ＩＵ、１５０ＩＵ、２００ＩＵ、２５０ＩＵ、 ３００ＩＵ、３５０ＩＵＩ约１３．甘露聚糖酶添加，探究酶添加量对寡糖得 率的影响）。向上述梯度的反应瓶中，分别加入１０９魔芋粗粉，
显色剂：２ｍＬ苯胺、２９二苯胺、１０ｍＬ ８５％磷酸溶于
ｆ１．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆＬｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｙｕｎｎａｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅ岱ｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５００９２，Ｃｈｉｎａ；２．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅ
Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆＢｉｏｍａｓｓ Ｅｎｅｒｇｙ，Ｍｉｍ＇ｓｔｒｙ ｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５００９２，Ｃｈｉｎａ）
【ｌ】王汉斌，牛文凯，刘晓玲．急性氰化物中毒的诊治现状【Ｊ】．中国全科医 学，２００９，１２（１０Ｂ）：１８８２．１８８４． 【２】李源栋，樊林，钱海燕，等．酒中氰化物测定方法的研究进展【Ｊ】酿 酒，２００９，３６（６）：１６．１８。 【３】黄选忠，杜洪山，吕全勇．ＣＴＭＡＢ．异烟酸．吡唑酮显色光度法测定 白酒中氰化物的研究［Ｊ】．湖北预防医学杂志，２００１，１２（１）：３５．３６． 【４】辛若竹，康澍．白酒中氰化物测定方法的改进［Ｊ】．理化检验，２００５，４１
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ
ａｓ
ｗｅｉ＇ｅ
ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｂｙ ｏｎｅ－ｗａｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｐＨ ｖａｌｕｅ，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｅｎｚｙｍｅ ａｄｄｅｄ ａｎｄ
ｔｉｍｅ．Ｔｈｅ
ｍａｎｌｙ
ｏｐｔｉｍａｌ
ｆｏｌｌｏｗ，ｐ・ｍａｎｎａｎａｓｅ ２５０ＩＵ／ｇ，ｐＨ ｖａｌｕｅ ６．５，ｅｎｚｙｍｏｌｙｓｉｓ ｉｎ ４５℃ｆｏｒ ５０ｍｉｎ．Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅｓｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ
１．１．３
１００ｍＬ丙酮中。 １．２试验方法 １．２，ｌ葡萄糖标准曲线的制作 准确称取１００ｍｇ干燥葡萄糖，用少量蒸馏水溶解后， 转移多］１００ｍＬ容量瓶中，定容、摇匀，浓度为ｌ ｍｇ／ｍＬ。按附 表分别加入试剂，将各管溶液混合均匀后，在沸水浴中加 热５ｍｉｎ，立即用冷水冷至室温，分别定容至２０ｒａＬ，摇匀，于 波长５４０ｈｍ处测吸光度值。然后根据吸光度值作标准曲线。
研究报告
中
国
酿造
２０１３年第３２卷第５期 总第２５４期
・８７・
５ １．０ １．０ ３
６ １．２ ０．８ ３
１．２．２魔芋粗粉酶解寡糖得率（以还原糖计）的测定
用Ｂ．甘露聚糖酶水解魔芋粗粉，将酶水解后的产物经 离心取上清液适当稀释后，用ＤＮＳ法测定酶解液中还原糖 的含量，寡糖得率计算公式：
寡糖得率（％）＝酶解液中还原糖的量（ｇ）／魔芋精粉的量（ｇ）
１．２．３
ｐＨ值对酶水解魔芋粉能力的影响
０．２ｍＬ
３－甘露聚糖酶液４５℃水浴５ｍｉｎ，对照组加入０．２ｍＬ蒸
馏水，反应１０ｍｉｎ，取出加入３ｍＬ ＤＮＳ试剂，煮沸５ｍｉｎ， 定容至２０ｍＬ，波长５４０ｎｍ处比色，测定还原糖含量。 １．２．４反应温度对酶水解魔芋粉能力的影响 配锘ｌＪｐＨ值为６．５的０．３％魔芋胶溶液和５１Ｕ／ｍＬ酶液，向 ４组试管（每组６支）中分别加入１．８ｍＬ魔芋胶，并分别将其 置于３５℃、４０℃、４５℃、５０℃、５５℃、６０℃的水浴锅中，恒温水 浴５ｒａｉｎ，加入０．２ｍＬ酶液，对照组加入０．２ｍＬ蒸馏水，反应 １０ｍｉｎ，取出加入３ｍＬＤＮＳ试剂，煮沸５ｍｉｎ，定容至２０ｍＬ， 波长５４０ｎｍ处比色，测定还原糖含量。 １．２．５酶添加量对寡糖得率的影响 根据１．２＿３和１．２．４的试验结果，选取ｐＨ值为６．５，温度为 ４５％的条件下，研究不同量的酶降解２０％底物的魔芋粉，分 别配制ｌ ０砌／ｍＬ、２０ＩＵ／ｍＬ、３０ＩＵ／ｍＬ、４０ＩＵ／ｍＬ、５０ｎ
【５】ＧＢ／Ｔ ５７５０．５—２００６，生活饮用水标准检验方法无机非金属指标【ｓ】． 【６】郭虹．异烟酸一巴比妥酸分光光度法测定酒中氰化物【Ｊ】．中国卫生 检验杂志，２００５，１５（１２）：１４５２．１４５３． 【７】ＪＪＦ １０５９－１９９９测量不确定度评估与表示【Ｓ】．
２０１ ３ Ｖ０１．３２ Ｎｏ．５
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ，口・ｍａｎｎａｎ鹤ｅ ＷａＳ ｕｓｅｄ ｔｏ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ
２０％ｋｏｎｊａｃ，ａｎｄ ｔｈｅｎ
ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ
ｋｏｎｊａｃ
ｉＴｌａｎｎｏｓｅ－ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｗａｓ
ａｎａｌｙｓｉｓｅｄ，Ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
研究报告
中
国
酿造
２０１３年第３２卷第５期 总第２５４期
・８５・
酶法制备魔芋甘露寡糖和产物分析
何丹－，郭 熊，，杨双莲，，李俊俊１，黄遵锡“ｚ，唐湘华ｎｚ木
（１．云南师范大学生命科学学院，云南昆明６５０５００；２．生物能源持续开发利用教育部工程研究中心，云南昆明６５０５００） 摘要：利用Ｂ一甘露聚糖酶水解２０％魔芋粗粉制备魔芋甘露寡糖并对其产物进行成分分析。在工艺研究中对反应的ｐＨ值、温度、酶添 加量、时间等进行单因素试验，确定最佳工艺条件为酶添加量为２５０ＩＵ／ｇ，ｐＨ值６．５，４５℃条件下，酶解５０ｍｉｎ，寡糖得率为３５％。魔芋甘 露寡糖的粗产物经硅胶薄层层析（ｎＣ）分离表明。三糖、四糖含量较大。 关键词：Ｂ．甘露聚糖酶；魔芋粗粉；魔芋甘露寡糖；薄层层析 中图分类号：ＴＳ２０２。３ 文献标识码：Ａ 文章编号：０２５４－５０７１（２０１３）０５—００８５—０４
・８６・
Ｓｅｒｉａｌ Ｎｏ．２５４
Ｃｈｉｎａ Ｂｒｅｗｉｎｇ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｒｅｐｏｒｔ
魔芋是唯一可进行商业化提取魔芋葡甘聚糖的植 物，广泛分布在云南、贵州、四川Ｉ等地【ｌ】。魔芋甘露寡糖 （ＭＯＳ）又称甘露低聚糖或甘露寡聚糖，能利用Ｂ．甘露聚 糖酶降解魔芋葡甘聚糖得到。ＭＯＳ是由几个甘露糖分子或 甘露糖与葡萄糖主要通过ｄ—ｌ，２糖苷键、ｏ【一ｌ，３糖苷键、仅．１， ６糖苷键或ｐ．１，４糖苷键、Ｂ．１，３糖苷键连接成的寡聚糖【２】。 魔芋甘露寡糖具有极高的应用价值，国ｉ为Ｊ＇ｂ科学家做 了大量的相关研究。在国内，江海燕等［３】的实验表明，利用 实硫酸化魔芋葡甘低聚糖对Ｈｅｐ Ｇ２．２．２．１５细胞株ＨＢｓＡｇ、 ＨＢｅＡｇ和乙肝病毒ＤＮＡ的产生均有一定程度的抑制作 用，其中对ＨＢｓＡｇ最为显著；高启禹等【４】对糖尿病小鼠模 型的研究表明，甘露寡糖具有降低血清中的血脂作用；于 艳梅等［５１研究表明，魔芋甘露寡糖能提高黄颡鱼非特异性 免疫功能。在国外，ＭＩＧＵＥＬ ＪＣ等Ｉ叼报道，甘露寡糖作为断 奶仔猪的生长促进剂，断奶初期仔猪的应激最大，此时饲 喂甘露寡糖，效果最好；ＢＡＲＢＡＲＡ Ｇ等［７－８）研究表明，饲喂 寡糖可以促进肠道内有益菌的生长、抑制有害菌的繁殖， 改善肠道微生态系统、提高非特异性免疫，最终达到促进 生长的目的。魔芋甘露寡糖具有重要的功能，但是在甘露 寡糖的组分中，功能性糖是哪一类还没有具体的报道，本 次实验旨在通过１３一甘露聚糖酶降解魔芋甘露聚糖，并利用 硅胶薄层层析（ＴＬＣ）对其产物进行分析，以期为其后期进 行单一组分的化学分析研究奠定基础，同时也是为其工业 化生产提供理论依据。 １材料与方法 １．１材料与仪器 １．１．１主要试剂 魔芋粗粉：云南丽江市玉元食品有限公司；３－甘露聚 糖酶（酶活力７９５１ＩＵ／ｇ，最适温度４５％，最适ｐＨ值为６．０）： 昆明爱科特生物有限公司；葡萄糖：Ｓｉｇｍａ公司；其他试剂 均为国产分析纯。 １．１．２主要材料 ＵＶ一２０００型紫外分光光度计：上海菁华科技有限公司； Ｇ一硅胶板：青岛海洋化工厂分厂；电子天平：奥豪斯仪器有 限公司；ｐＨ计：赛多利斯科学仪器有限公司；恒温水浴锅。