先准备约6支干燥、洁净的玻璃管，将下端用堵头封闭， 防于试管架上备用。按分离胶缓冲液∶分离胶贮液∶H2O∶过 硫酸铵溶液=1.5mL∶3mL∶1.5mL∶6mL的比例吸取各溶液 至小烧杯中，然后加入一滴四甲基乙二胺（TEMED），混 合均匀，用尖嘴滴管灌吸取混合好的胶液并灌注到玻璃管中， 直至胶液至玻管的刻度线处(如有气泡应设法排除)，然后沿 玻管内壁在胶面上缓慢加注0.5cm的水层，约30min左右， 当见到水层底下有一清楚界面时，表明胶已聚合。倒去水层， 或用滤纸条吸干水分。
实验08 植物过氧化物酶同工酶测定 （园盘式凝胶电泳法）
一、原理
聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺(Acr)和交联 剂甲叉双丙烯酰胺(Bis)在催化剂作用下聚合而 成，具有三维网状结构，其网孔大小可由凝胶 浓度和交联度加以调节。凝胶电泳兼有电荷效 应和分子筛效应。被分离物质由于所载电荷数 量、分子大小和形状的差异，在电泳时会产生 不同的泳动速率而相互分离。
（四）点样 （五）电泳
（六）剥管，放入培养皿中。用一个带有长针头的注射器，吸满 水，将针头沿管壁插入，同时慢慢地将注射器中的水推 出，并不断转动凝胶管，将凝胶管挤脱出来。 （七）染色
取0.5mL联苯胺母液 + 9.3mL H2O +0.2mL 3% H2O2，混匀后倒入盛有凝胶条的培养皿。此时可以看 到胶条上出现蓝色或棕褐色环，即过氧化物酶酶带，约 10min后用自来水冲洗，此时蓝色带会慢慢变为棕褐色 条带。
四、结果
用尺子量出各酶带和溴酚蓝的迁移距离，计 算各同工酶的迁移率，并划出同工酶图谱。
28S 18S
二、材料、设备与试剂
（一 ）实验材料 ：小麦芽。 （二）设备 ：1.冷冻离心机；2.稳流稳压电泳 仪；3. 电泳槽（园盘型）等。 （三）试剂
1.分离胶缓冲液 2.分离胶贮液： 3.过硫酸铵：现配现用。
4.四甲基乙二胺(TEMED)。 5.电极缓冲液：Tris6.0g，Gly（甘氨酸） 28.8g，用水定容至1000mL(pH8.3)，用前稀释 10倍。
6. 3% H2O2。 7. 联苯胺染色母液：联苯胺1g + 冰醋酸 18mL+ H2O 2mL溶解后贮于棕色瓶中。 8.同工酶染色液：配后立即使用。取0.5mL 联苯胺母液 + 9.3mL H2O +0.2mL 3% H2O2。
三、实验步骤
（一）过氧化物酶的提取 （二）电泳槽的安装 （三）分离胶的配制
过氧化物酶是植物体内常见的氧化酶， 植物体内许多生理代谢过程受其同工酶的种 类及活性的调节。同工酶具有不同的迁移速 度。
将电泳后的凝胶置于含有H2O2及联苯胺 的溶液中染色，利用过氧化物酶催化H2O2分 解并把联苯胺氧化成蓝色或棕褐色产物的原 理，出现的蓝色或棕褐色条带即为过氧化物 酶同工酶在凝胶中存在的位置，多条有色带 即构成过氧化物酶同工酶酶谱。