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4．组织内虫体检查法 有些原虫可以在动物身体的不同组织内寄 生。一般在死后剖检时，取一小块组织， 以其切面在载玻片上做成抹片、触片，或 将小块组织固定后制成组织切片，染色检 查。抹片或触片可用瑞氏染色法或姬氏染 液染色。
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镜检法为取隔肌肉样0.5~1g剪成3×10mm的小 块，用厚玻片压紧，放显微镜下检查或投放到屏 幕上观察。 消化法为取100g肉样，搅碎或剪碎，放入3L的烧 瓶内。加入10g胃蛋白酶，溶于2L自来水。加入 16ml盐酸（25%），放入一磁力搅拌棒。置于可 加热的磁力搅拌器上，设温于44~46℃。30min 后，将消化液用180μm的滤筛滤入一2L的分离漏 斗，静置30min，放出40ml液体于一50ml的量筒 内，静置10min，吸去30ml上清夜。加入30ml水， 摇匀。10min后，再吸去30ml上清液。剩下的液 体到入一带有格线的平皿内，用20-50X显微镜观 察。
直接涂片法是取50%甘油水溶液或普通水 1~2滴滴于载玻片上，镊取黄豆大小的被检 粪块与之混匀，剔除粗粪渣，抹薄涂匀， 盖上盖玻片镜检。本法最为简便，但检出 率不高。为提高阳性检出率，每个样本应 检多片。
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2．漂浮集卵法flotation method
应用比重较虫卵大的漂浮液，使蠕虫卵、球虫卵囊等浮于 液体表面，易于集中检查。漂浮集卵法对某些线虫卵、绦 虫卵和原虫卵囊有很好的检出效果。缺点是高比重的漂浮 液易使虫卵和卵囊变形，检查时必须迅速，也可在制片时 补加一滴清水。 常用方法为饱和盐水漂浮法。取5~10g粪便置于200ml烧 杯中，先加入少量饱和盐水（1L水中加食盐400g），搅 拌混合后再加入约20倍的漂浮液，用金属筛或纱布滤去粪 渣，滤液静置30~60min，用直径0.5~1.0cm的金属圈蘸 取表面液膜，抖落于载玻片上，加盖片后镜检。 检查比重较大的虫卵，如棘头虫虫卵、猪肺丝虫虫卵及吸 虫卵时，需用硫酸镁、硫代硫酸钠以及硫酸锌等饱和溶液。
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4．麦氏计数法MacMaster method
是常用的虫卵计数方法之一。通过虫卵计数，可 以估计动物感染强度。 取粪样2g放入三角烧瓶内，加饱和盐水58ml和玻 璃珠若干，充分震荡使成混悬液，吸取混悬液注 入麦氏计数室，置显微镜下计数计数室（1cm2） 内虫卵数。由于每室混悬液等于0.15ml,结果乘以 200,即为每克粪便虫卵数。通常一次计数4室,然 后按平均值计。本法只适用于可被饱和盐水漂起 的各种虫卵。
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DNA探针（DNA probe）技术
DNA探针是带有标记物的已知序列的DNA片段。 DNA探针技术的基本原理是碱基配对。在变性而 成为单链的被检DNA中加入变性的探针，随着温 度的降低，探针便可与被检DNA中的互补序列形 成双链，这一过程称杂交。通过捕捉探针标记物 释放出的信号，便可知被检DNA中有无与探针序 列相同的DNA。每一种病原体都具有独特的DNA 片段，通过分离和标记这些片段，就可制备出探 针，用于疾病的诊断等研究。
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免疫酶技术
基本原理 免疫酶技术是继免疫荧光技术之后发展起来的又一种免疫 标记技术，是根据抗原与抗体特异性结合，以酶作标记物， 酶对底物具有高效催化作用的原理而建立的。酶与抗体或 抗原结合后，既不改变抗体或抗原的免疫学反应的特异性， 也不影响酶本身的酶学活性。酶标抗体或抗原与相应的抗 原或抗体结合后，形成酶标抗体-抗原复合物。复合物中 的酶在遇到相应的底物时，催化底物分解，使供氢体氧化 而生成有色物质。有色物质的出现，客观地反映了酶的存 在。根据有色产物的有无及其浓度，即可间接推测被检抗 原或抗体是否存在以及其数量，从而达到定性或定量的目 的。
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二、免疫学诊断方法
已报道的寄生虫免疫学诊断方法很多，包 括变态反应、沉淀反应、凝集反应、补体 结合试验，免疫荧光抗体技术、免疫酶技 术、放射免疫分析技术、免疫印迹技术等。 此处仅介绍主要几种。
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间接血凝试验
基本原理 间接血凝试验（ IHA）是凝集试验的一种。抗原与相应抗 体结合形成复合物，在电解质存在下，复合物相互凝集形 成肉眼可见的凝集小块或沉淀物。根据是否产生凝集现象 来判定相应抗原或抗体，称为凝集试验。颗粒性抗原与抗 体直接结合后出现的凝集现象，称直接凝集试验。将可溶 性抗原或抗体先吸附于一种与免疫无关的，一定大小的载 体颗粒表面，然后与相应抗体或抗原作用，在适宜的条件 下由于抗原抗体的特异性结合，会带动载体颗粒的凝集， 出现肉眼可见的凝集现象，称间接凝集试验。常用的载体 颗粒有红细胞（“O”型人红细胞，羊红细胞），聚苯乙 烯胶乳颗粒，白陶土，离子交换树脂，火棉胶等。以红细 胞为载体时，就称作间接血凝试验。
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免疫酶技术在方法上分为两类，一类用于 组织细胞中的抗原或抗体成分检测和定位， 称为免疫酶组织化学或免疫酶染色法，另 一类用于检测液体中可溶性抗原或抗体成 分，称为免疫酶测定法。
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常规免疫酶染色法可分为直接和间接两种方法。 真接法是用酶标记特异性抗体，直接检测寄生虫 或其抗原。在含有寄生虫或其抗原的标本固定后， 消除其中的内源性酶，用酶标记的抗体直接处理， 使标本中的抗原与酶标抗体结合，然后加底物显 色，进行镜检。 间接法是将含有寄生虫或其抗原的组织或细胞标 本，用特异性抗体处理，使抗原抗体结合，洗涤 清除未结合的部分，再用酶标记的抗抗体进行处 理，使其形成抗原-抗体-酶标记抗抗体复合物， 最后滴加底物显色，进行镜检。
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5．毛蚴孵化法hatching test
是诊断日本血吸虫及东毕吸虫的方法之一。其依据是血吸 虫卵内的毛蚴在适宜的的条件下能很快孵出，并基本上按 直线运动于水面下，利用这一特性检查毛蚴即可确诊。 取被检粪便30~100g（牛100g）经沉淀集卵法处理，将 沉淀倒入500ml三角烧瓶内，加温清水（自来水需脱氯处 理）至瓶口，置22~260C孵化，第1、3、5h，用肉眼或 放大镜观察并记录一次。如见水面下有白色点状物做直线 来往运动，即是毛蚴，但需与水中一些原虫如草履虫、轮 虫等相区别。必要时吸出在显微镜下观察。气温高时，毛 蚴孵出迅速，因此，在沉淀处理时应严格掌握换水时间， 以免换水时倾去毛蚴造成假阴性结果。也可用1.0%~1.2% 食盐水冲洗粪便,以防止毛蚴过早孵出，但孵化时应用清 水。
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酶联免疫吸附试验（ELISA） ELISA是固相免疫酶测定法中应用最广、 发展最快的一种。其基本过程是将抗原 （或抗体）吸附于固相载体，在载体上进 行免疫酶反应，底物显色后用肉眼或分光 光度计判定结果。
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三、分子生物学诊断技术
已在寄生虫上得到应用的分子生物学技术 很多，如核型分析、DNA限制性内切酶酶 切图谱分析、限制性DNA片段长度多态性 分析，DNA探针技术，DNA指纹分析， DNA聚合酶链式反应（PCR），随机扩增 多态性DNA（RAPD），核酸序列分析等。 这些技术的应用，极大地推动了寄生虫诊 断及寄生虫分 IHA已广泛用于寄生虫病的诊断和流行病学调查，有较高 的敏感性和一定的特异性，如对日本血吸虫病的诊断，阳 性检出率可达91.9~100%，假阳性为0.7~3.2%。 致敏红细胞冷冻干燥后，在4℃可保存1~2年，所用器材 简单，国内均已生产。且方法简便快速，便于基层单位使 用。 缺点是不同实验室制备的红细胞和不同批号制品，其敏感 性和特异性可能不一致，因此试剂制品需标准化和商品化。 另外还存在一定的非特异性反应，这与致敏红细胞的质量 优劣有关。必要时可用血凝抑制试验来排除非特异性反应。
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血液和组织内虫体检查法
1．鲜血压滴标本检查 自动物耳静脉或颈静脉采血，将采出的血液滴在 洁净的载玻片上，加等量的生理盐水与之混合， 覆以盖玻片，立即放显微镜下用低倍镜检查，发 现有运动的可疑虫体时，可再换高倍镜检查。由 于虫体未染色，检查时应使视野中的光线弱些。 2．涂片染色标本检查 采血，滴于载玻片之一端，按常规推制成血片， 姬氏或瑞氏液染色。后用油镜检查。
寄生虫病诊断的常用方法
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一、病原学诊断方法
许多寄生虫，特别是寄生于消化道的虫体， 其虫卵、卵囊或幼虫均可通过粪便排出体 外，通过检查粪便，可以确定是否感染寄 生虫或确定寄生虫的感染强度。
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粪便虫卵检查法
1．直接涂片法 2．漂浮集卵法 3．沉淀集卵法 4．麦氏计数法 5．毛蚴孵化法
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1．直接涂片法direct smear method
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3．沉淀集卵法sedimentation method
用水处理粪便，经离心或自然沉淀，使虫卵沉淀 集中，更易于检查。 自然沉淀集卵法是取粪便5~10g加水混合成悬浮 液，经40~60孔/2.54cm2铜筛滤去大块物质，静 置15min后倾去上清液,如此反复操作，直至上层 液体透明为止,最后弃去上层液体，置沉淀物于载 玻片上，镜检虫卵。 离心沉淀法是取1~2g被检粪便于试管中，加5倍 量的水制成悬浮液，经40孔/cm2铜筛过滤到一离 心管中，以800rpm离心3~5min,弃上清，将沉渣 置载玻片上，镜检虫卵。 本法也适用于检查尿液内的虫卵。
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动物接种法
有些原生动物，在病畜体内用上述显微镜 检查法不易查到，为了确诊常采用动物接 种试验。接种用的病料、被接种的动物种 类和接种的途径均依病的种类不同而异
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动物剖检法
在动物死亡（或捕杀）后，首先制作血片，染色 检查，观察血液中有无寄生虫，而后仔细检查体 表，观察有无体表寄生虫。 而后剥皮，观察皮下组织中有无虫体寄生。 将各内部脏器依次取出，先收集胸水，腹水，沉 淀后观察其中有无寄生虫。而后取出全部消化器 官及其所附的肝、胰等腺体。取出呼吸系统、泌 尿系统和生殖系统、心脏和大的动脉和静脉血管， 分别进行检查。
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3．虫体浓集法 上法虽然可以查到血液中的原虫，但血液中的虫 体较少时，则不易查出虫体。为此，常先进行集 虫，再制片检查。其操作过程是，采病畜抗凝血 6~7毫升，以每分钟500转的速度，离心5分钟， 使其中大部分红细胞沉降；而后将含有少量红细 胞，白细胞和虫体的上层血浆移入另一离心管中， 补加一些生理盐水，以每分钟2，500转的速度离 心10分钟。取沉淀物制成抹片，按上述染色法染 色检查。此法适用于伊氏锥虫病和梨形虫病。其 原理是锥虫和感染有梨形虫的红细胞较正常红细 胞的比重为轻，所以在第一次沉淀时，正常红细 胞下降，而锥虫和感染有梨形虫的红细胞尚悬浮 在血浆中。第二次离心沉淀时，则将其浓集于管 底。